褐藻胶裂解酶产生菌的发酵优化研究

以筛选的羊栖菜腐败菌系不动杆菌属X8菌株为研究对象,对其产褐藻胶裂解酶的发酵培养条件进行优化研究.结果表明,该菌株最适液体培养基组成为(m/V):0.6%褐藻酸钠,0.7%蛋白胨,0.2% KH_2PO_4,0.2 % NaCl,初始pH 7.0.该菌株于25 ℃,150 r/min 振荡培养16 h后,褐藻胶裂解酶酶活可达157.32 U/ml,较优化前提高了1.59倍.Mg~(2+)、Ca~(2+)和Fe~(2+)对菌株产酶有一定的抑制作用.     

锈凹螺褐藻胶裂解酶的分离纯化及性质研究

采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE-Sephadex A25、Sephadex G-100和Sephacryl S-300 HR 柱层析等方法从海洋食藻性锈凹螺(Chlorostoma rustica)消化腺中分离纯化出一种褐藻胶裂解酶(Alginate lyase),得到电泳纯酶制品,并对此酶的酶学性质进行了研究.结果表明:此褐藻胶裂解酶的分子量为28 kD,反应的最适温度为40 ℃,具有热不稳定性,最适pH为7.0;酶的反应受多种离子的影响,Mn2 、Co2 和Cd2 对此褐藻胶裂解酶活性具有明显的抑制作用,而Mg2 、Zn2 、Na 和K 则具有促进作用;采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和聚古洛糖醛酸的特异性,实验表明,此酶对聚古罗糖醛酸(Polyguluronate,PG)有特异性.     

皱纹盘鲍内脏酶的酶学性质及褐藻胶裂解酶的分离纯化

采用(NH4)2SO4分段盐析、透析、阴离子(DEAE-52)交换柱层析、SephadexG-200凝胶柱层析等分离纯化技术,通过SDS-PAGE电泳分析了皱纹盘鲍内脏酶的组成,结果表明鲍内脏酶主要含有两种褐藻胶裂解酶Ⅰ, Ⅱ,一种纤维素酶,一种琼脂酶。对酶的酶学性质分析结果表明两种褐藻胶裂解酶Ⅰ, Ⅱ的最适pH分别为8.6, 7.2,最适温度为35 ℃,分子量分别为35.2 ku, 67 ku;两种褐藻胶裂解酶的热稳定性比较差,且易受金属离子影响;纤维素酶的最适pH为5.0,最适温度为40 ℃。并确定了皱纹盘鲍内脏酶分离纯化的方法及参数,为进一步研究鲍内脏复合酶的性能提供了基础参数。图14表3参12 关键词：皱纹盘鲍; 褐藻胶裂解酶; 纤维素酶; 纯化 E-mail：wqk320@dlfu.edu.cn     

海洋细菌来源低温褐藻胶裂解酶的分泌表达和酶学性质研究

为了筛选稳定性较好的低温褐藻胶裂解酶,本研究进行了海洋细菌分离鉴定、酶的编码基因克隆与分析、酶分泌表达与纯化、不同因素对酶活力和稳定性的影响以及酶解产物分析实验。结果显示,用以褐藻胶为唯一碳源的平板,筛选出一株能分泌低温褐藻胶裂解酶的海洋细菌SJ-H-12,基于16S rDNA序列构建进化树,该菌株鉴定为Yangia sp. SJ-H-12。进而克隆酶的编码基因Alyya,ALYYA属于PL5家族褐藻胶裂解酶。将基因在食品级宿主解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)中进行分泌表达,重组ALYYA的活力达到34.2 U/mL,分子量约为39.0 kDa,具有较强的PolyM偏好性。ALYYA在25℃~35℃时表现出80%以上的活力,且在30℃时表现出最高活力;在pH为5.0~10.0的范围内稳定性较好,孵育后剩余超过60%的活力;0~2.0 mol/L的NaCl能明显激活ALYYA的活力。ALYYA降解褐藻胶的产物主要是二糖,另有少部分单糖和三糖,该酶是一种内切褐藻胶裂解酶。综上所述,本研究筛选到一株产低温褐藻胶裂解酶细菌,所产ALYYA是典型的低温褐藻胶裂解酶,具有优良的酶活力和稳定性。本研究为低温褐藻胶裂解酶的筛选和开发利用提供了参考数据。     

基于酶技术生产低黏度及超低黏度褐藻胶的工艺

为解决当前低黏度及超低黏度褐藻胶生产工艺中存在的不足,本实验以海带为原料,利用褐藻胶裂解酶降解制备低黏度及超低黏度褐藻胶,研究了分子量、p H、温度对黏度的影响,确定了碱消化的最佳条件,探究了酶解工艺中加酶量、酶解时间及原料的初始黏度对褐藻胶产品的影响。结果显示,通过控制加酶量(100~500 U/g),酶解30 min即可得到低黏度及超低黏度褐藻胶,其中加酶量为100~330 U/g时可得到低黏度褐藻胶,加酶量增加至330~500 U/g时,可得到超低黏度褐藻胶,且酶解法得到的褐藻胶样品分子量均一度高,工艺节水率高达10%~50%;同时研究发现酶解样品黏度与原料初始黏度相关性不大,只在较短时间内表现出相关性,该工艺具有较高的原料适用性。     

海洋低温溶菌酶的制备及酶学性质

对一株海洋杆菌产低温溶菌酶的分离纯化及理化性质进行了研究。20℃下将菌株在含有葡萄糖、酵母膏、胰蛋白胨的标准海水培养基中震荡培养40h。获得活性大约为150U/ml的溶菌酶上清液。上清液经SMB-20生物型错流超滤系统浓缩、透析及CM-Sepharose-FF阳离子交换层析（     

产β-1,3-葡聚糖酶海洋细菌的筛选及其酶学性质研究

依据从海水中分离、筛选得到的β-1,3葡聚糖酶活较高的菌株SY-3之形态、生理及生化特性,初步鉴定为气单胞菌.该菌发酵产生的粗酶液经过硫酸铵沉淀、透析除盐后,对其酶学性质进行了初步研究.经测定,SY-3所产β-1,3葡聚糖酶的最适作用温度、pH分别为30 ℃、7.5.通过Lineweaver-Burk做图,得到其米氏常数(Km)为1.21 mg/ml.K+、Na+和Ca2+对酶促反应有促进作用,而Mg2+、Mn2+、Cu2+和Zn2+等有不同程度的抑制作用.     

壳聚糖固定化海洋微生物YS2071脂肪酶及其酶学性质

采用壳聚糖为载体,优化了海洋微生物YS2071脂肪酶的壳聚糖固定化条件。结果显示,在壳聚糖浓度为2% (m/v)、氢氧化钠浓度为12% (m/v)、乙酸浓度为1% (v/v)、戊二醛浓度为0.25% (v/v)、与戊二醛交联的时间为12 h及添加2 ml (1120 U)的游离脂肪酶时,固定化脂肪酶的活力最高,其活力回收率达到69.4%。对游离脂肪酶与固定化脂肪酶的酶学性质进行比较,结果显示,游离脂肪酶的最适反应温度为40℃,而固定化脂肪酶的最适反应温度为45℃,固定化脂肪酶的温度稳定性明显优于游离脂肪酶。最适反应pH均为8.0,脂肪酶经过固定化之后,酸碱耐受性增大。重复利用10次的固定化脂肪酶的酶活力保留率仍高于65%。固定化脂肪酶贮藏半衰期为96 d,而游离脂肪酶的贮藏半衰期是33 d。固定化脂肪酶与游离脂肪酶的酶活力保留率在不同有机试剂中表现出不同的稳定性。     

鲍鱼酶的制备和应用试验

从鲍鱼的消化器官中提取裂解酶 ,比较了胃、肠和消化腺中酶的活力 ,并用于海带、裙带菜和条斑紫菜的单细胞分离。结果表明 :三种器官中裂解酶的活力依次为消化腺 ＞肠 ＞胃 ,用以酶解上述三种藻类组织的单细胞 ,得率分别为 8.7× 10 ⁶i/g、7.2× 10 ⁶i/g、4 .6× 10 ⁶i/g。     

琼胶降解菌AT-22的筛选和产酶性质

从青岛近海的红藻(Gelidium amansii)中分离筛选到1株高活力的海洋琼胶降解菌AT-22，对其生长、产酶特性和酶活力影响因素进行初步研究。结果表明，AT-22所产琼胶酶为诱导酶，0．2％葡萄糖的添加对菌株产酶有抑制作用。该酶作用的最适pH值为6．0-7．0，最适温度为40℃，最适底物质量分数为1％～1．2％，Ca^2 的添加对酶促反应有较强的促进作用，而Fe^3 、Mn^2 、Cu^2 和Hg^2 等有不同程度的抑制作用。     

Comparative study on general properties of alginate lyases from some marine gastropod mollusks

Alginate lyase (EC 4.2.2.3) is an enzyme that splits glycosyl linkages of alginate chain via β-elimination, producing unsaturated oligoalginates. This enzyme is widely distributed in herbivorous marine mollusks, brown algae, and marine and soil bacteria. In the present study, we determined the general properties and partial amino acid sequences of alginate lyases from three Archeogastropoda, i.e., Haliotis discus hannai, H. iris, and Omphalius rusticus, and one Mesogastropoda, i.e., Littorina brevicula, in order to enrich the information about functional and structural diversity in gastropod alginate lyases. The alginate lyases were extracted from hepatopancreas of these animals and purified by ammonium sulfate fractionation followed by conventional column chromatography. Single alginate lyases with molecular masses of approximately 28, 34, and 34 kDa were isolated from H. discus, H. iris, and O. rusticus, respectively. While three alginate lyases with molecular masses of 35, 32, and 28 kDa were isolated from L. brevicula. These enzymes were identified as poly(M) lyase (EC 4.2.2.3) since they preferably degraded poly(M)-rich substrate. Western blot analysis using an antiserum raised against H. discus enzyme suggested that H. iris, and O. rusticus enzymes shared similar primary/higher-order structure with H. discus enzyme, but the L. brevicula enzymes did not. H. discus, H. iris, and O. rusticus enzymes were classified to polysaccharide-lyase family-14 by the analysis of partial amino acid sequences, while the L. brevicula enzymes were not.     

动物胶原的研究进展

胶原是结缔组织主要成分之一，近年来随胶原提制技术的发展和对其性质，结构等方面的深入研究，进一步促进了胶原应用的研究。本文就胶原提制技术及其特性，应用方面的研究进行综述。     

益生菌与鱼类肠道健康研究进展

集约化、高密度养殖已成为水产养殖业的发展趋势.在这种养殖模式下,如何保障鱼体健康是人们关注的焦点.20世纪80年代,益生菌在水产养殖行业中首次应用,这种环保且有效的水产养殖策略获得了业界的关注.目前,鱼类养殖中常用益生菌有芽孢杆菌属、乳酸杆菌属、乳球菌属和酵母菌属.添加的益生菌通过抑制病原微生物的增殖、改善鱼类肠道屏障...     

硬骨鱼类虹彩细胞的研究进展

虹彩细胞是硬骨鱼中一类常见的色素细胞,含有大量的虹彩小体,其内含有由鸟嘌呤晶体构成的高折射率的反射小板,反射小板与低折射率的细胞质交替排列形成交替层的结构,光被交替层反射后通过多层薄膜干涉,使细胞呈现出彩虹般的颜色。虹彩细胞能在激素、交感神经系统或外界环境刺激的作用下通过改变反射小板的间距来实现颜色的变化。鸟嘌呤是虹彩细胞呈色和颜色变化的基础,其合成途径已被详细解析。虹彩细胞由多能的神经嵴细胞分化而来,从神经嵴细胞分化为成熟的虹彩细胞的谱系特化过程受到多个基因的调控,目前已在模式生物斑马鱼中发现了一些关键基因,并通过对这些基因间相互作用的研究初步解析了控制虹彩细胞特化的核心基因调控网络,同时也发现了其他影响虹彩细胞特化、分化及存活的基因和信号通路。本文综述了硬骨鱼类虹彩细胞呈色及颜色变化的机制、鸟嘌呤合成途径及调控基因以及影响虹彩细胞发育和存活的基因和信号通路的研究进展,并对未来的研究方向进行了展望,期望能对虹彩细胞有更深入的认识,并为研究虹彩细胞发育过程的基因调控提供参考。     

重组鱼类干扰素研究进展

干扰素(Interferons,IFNs)是由免疫细胞分泌的能对几种病原,例如对病毒、细菌、寄生虫和肿瘤细胞等产生应答的一类蛋白质。本文综述了几种经济鱼类的干扰素基因及重组鱼类干扰素的研究进展。     

罗非鱼性别决定和分化机制的研究进展

罗非鱼染色体遗传型性别决定机制(Chromosomal genetic sex deterruination,GSD)的研究歼展较早,目前利用种间杂交的方法得到全雄罗非鱼在生产上已广泛应用,而对影响罗非鱼性别决定的环境因素研究开展较晚.研究证实罗非鱼确实存在温度依赖型性别决定机制(Temperature-dependent sex determination,TSD),而且这种温度依赖型性别决定机制只出现在性别发育的某一特定时期.近年来,研究者们开始尝试用分子生物学手段来研究罗非鱼性别决定及分化机制,寻找影响性别决定的基因位点、研究位点之间的相互关系及其相互作用,以及外界因素是如何通过调控性别决定位点来影响鱼类性别分化的等.目前研究的主要功能基因有DMRT基因家族、DAX1、SHP、AMH、oP450arom等.最新研究结果表明,tDMRT1,可作为尼罗罗非鱼精巢分化的分子标记.[中国水产科学,2009,16(1):139-145]     

亲鱼的脂类营养与繁殖性能研究进展

多数鱼类在性腺发育前积累的大量脂类,除了为生殖洄游等活动提供代谢能外,还是雌性生殖细胞发育过程中必需储存的重要能源和结构物质,其中必需脂肪酸（EFA）是磷脂和固醇类（生物膜主要结构成分）生物合成中的重要结构组分或转运因子,它对胚胎发育进程及早期仔鱼的存活至关重要。繁殖期间若缺乏EFA,会影响亲鱼的产卵数以及卵的发育质量,导致鱼卵孵化率下降,还可能引起幼鱼脊柱前突、侧突以及鳔发育不完全等严重后果。本文归纳与总结了国内外有关亲鱼脂类营养、代谢及其对繁殖性能影响的研究成果,希望能有助于我国亲鱼的营养与饲料研究,促进优质亲鱼的培育。     

鱼类几种新型免疫因子的研究进展

Cytokines are low molecular weight proteins that serve as chemical messengers within the innate and adaptive immune systems. To date, great progresses have been made in fish cytokine researches. A number of cytokine genes have been cloned and sequenced in fish. This review will focus on a number of novel immune-related cytokines including interleukin, interferon, interferon regulatory factors, Myxovirus resistance proteins, transforming growth factor, tumor necrosis factor, chemokines (CC and CXC chemokines), NK dell enhancement factor, MHCⅠ, MHCⅡ and some of their receptors, which have been identified in many fish species recently. Their genes and molecular structures are clarified. These cytokines are evolutionary well conserved. They share high identities at both the nucleotide and amino acid levels with the high vertebrate cytokines, and maintain characteristic structural motifs of those higher vertebrates. The function of some cytokine genes are analyzed in conventional manner by production of recombinant molecules. Several fish cytokines have been identified based on functional similarity to, or cross-reactivity with, mammalian cytokines. Moreover, molecular techniques, such as suppression subtractive hybridization, PCR and cDNA library screening, have recently enabled the identification of fish cytokine genes. Because of fish phylogenetic position and the fact that their immune systems have not been elaborated to the extent seen in mammals, progresses in this field will deepen our understanding of the molecular origins of cytokine genes and extend our knowledge on their mechanisms conferring disease resistance and the recombinant cytokines to control fish diseases.     

观赏鱼着色研究进展

观赏鱼的观赏价值和商品价格主要决定于它的体色．改善观赏鱼的体包以提高其观赏价值是观赏鱼养殖中的一个主要任务。本文对观赏鱼着色的机理、方法和营养因素的研究进展进行了综述与分析。     

贝类血细胞分类及其功能研究进展

<正>血细胞是贝类细胞免疫的承担者,直接参与异物的吞噬、包囊、免疫黏附、伤口修复等过程[1],同时能够合成和释放多种水解酶、抗菌肽、细胞因子类似物、调理素、凝集素等免疫因子,是体液免疫的供给者[2]。关于贝类血细胞的研究开始于1934年,兴盛在上世纪70年代中期,主要研究血细胞的形态、结构、功能,了解贝类的防御机制,以便抵御当时