基于权重基因共表达网络分析(WGCNA)挖掘双酚A代替物的分子作用机制

评估双酚A(bisphenol A, BPA)代替物的内分泌干扰活性并挖掘其分子作用机理。采用分子对接技术模拟预测BPA代替物对人雌激素受体α(estrogen receptor,ERα)的结合活性;构建权重基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis, WGCNA)找到BPA代替物和细胞增殖之间强相关的模块和基因;构建蛋白互作网络(protein protein interaction network,PPI),找到BPA代替物发挥雌激素活性的枢纽基因(Hub gene);基因-疾病关联(gene-disease associations)分析找到与BPA代替物高度相关的人类疾病。结果表明,6种BPA均具有雌激素活性;WGCNA分析找到2个模块共1 090个基因与细胞增殖强相关的基因;PPI挖掘到BPA代替物发挥雌激素作用的Hub gene是孕酮受体(rrogesterone receptor,PGR)、Myb相关蛋白(Myb-related protein like 1,MYBL1)、过氧化物酶体增殖剂激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)和MYB原癌基因转录因子(MYB);基因-疾病关联分析表明BPA代替物可能对机体的乳腺肿瘤、子宫内膜癌和糖尿病等疾病的发生发展过程产生不良影响。     

传染性支气管炎病毒感染对蛋雏鸡输卵管雌激素受体及孕激素受体表达的影响

以不同传染性支气管炎病毒（肾型IBV-河北分离株与呼吸型IBV-M41）分别感染蛋雏鸡,通过测定输卵管蛋白分泌部及子宫雌激素受体（Estrogen receptor,ER）和孕激素受体（Progesterone receptor,PR）的表达水平,来探讨IBV早期感染（10d）对抑制蛋鸡输卵管发育的作用机制。结果显示,IBV感染降低子宫和蛋白分泌部ER mR-NA、PR mRNA的表达水平,即致子宫ER mRNA和PR mRNA的表达低于检测水平;蛋白分泌部ER mRNA和PR mRNA的表达水平显著降低（P〈0.01）,且M41的作用幅度较肾型IBV更为显著（P〈0.01）。结果表明,IBV可通过降低ER和PR的表达水平,抑制输卵管对雌激素的应答能力而影响输卵管的发育。     

青春期前双酚A暴露对雌性大鼠生殖器官发育的影响

本研究旨在从毒性病理学角度探讨双酚A(BPA)暴露对青春期前雌性大鼠生殖器官发育的影响,为研究BPA雌激素样作用提供组织形态学依据。选用21日龄雌性大鼠,经不同浓度的BPA暴露后,检测大鼠脏器指数、血清雌二醇水平,观察子宫和卵巢形态结构。结果显示,BPA给予7 d后与对照组比较,BPA 180 mg/(kg·bw)组大鼠子宫和卵巢指数升高(P<0.05),血清雌二醇水平降低(P<0.05)。光镜观察发现,BPA试验组大鼠与对照组比较,子宫内膜增厚、内膜细胞形态改变,卵巢初级和次级卵泡数量增多。病理半定量分析结果表明,与对照组比较, BPA 180 mg/(kg·bw)组大鼠子宫内膜厚度、内腔面积及外腔直径、总卵泡数量有统计学差异(P<0.05)。表明BPA短期大剂量暴露可促进青春期前雌性大鼠子宫和卵巢发育,其作用存在明显的剂量依赖关系。     

胎儿期至性成熟期持续暴露双酚A影响雌鼠卵巢核糖体功能

双酚A(BPA)是一种常见的环境类雌激素,对动物产生生殖毒性。为了探究长期双酚A暴露对卵巢发育的影响,将孕0 d昆明小鼠(8周龄,体质量25～30 g,SPF级)随机分为7组,每组4个重复,每个重复5只。A组每天饮水给予蒸馏水(0.00 mg/kg BPA)作为对照组,B组每天饮水给与0.05 mg/kg BPA,C组每天饮水给与0.50 mg/kg BPA,D组每天饮水给与5.00 mg/kg BPA,E组每天饮水给与10.00 mg/kg BPA,F组每天饮水给与20.00 mg/kg BPA,G组每天饮水给与50.00 mg/kg BPA。BPA饮水自母鼠孕0 d到仔鼠45 d性成熟,共计63 d。结果显示,BPA剂量≥0.50 mg/kg时,仔鼠血清和卵巢中BPA含量显著增加(P0.05),但仔鼠卵巢器官指数均无显著变化和病理损伤。TUNEL结果显示,染毒BPA≥10.00 mg/kg时卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡(P0.05)。当染毒BPA剂量≥0.50 mg/kg时仔鼠卵巢ERα表达量显著增多(P0.05);低剂量BPA (0.05～10.00 mg/kg)显著降低ERβ表达,较高剂量(20.00～50.00 mg/kg)显著增加ERβ表达。转录组测序结果显示,BPA影响了卵巢核糖体通路,其中核糖体蛋白L21、Sa表达基因显著下调,核糖体蛋白L3、S2、L7a、S26、L26表达基因显著上调。这些基因的改变可能会导致胚胎生殖系统发育受阻和卵巢早熟。荧光定量PCR验证了转录组结果。本研究证实长期低剂量BPA暴露不会导致性成熟期小鼠卵巢器官指数变化和明显病理损伤,但会导致卵巢细胞凋亡和ER表达异常,BPA的生殖毒性可能与核糖体功能蛋白表达异常有关。     

雌激素受体和雌性生殖研究进展

雌激素通过雌激素受体（ER）在雌性生殖活动中起着重要作用,雌激素受体是配体依赖的转录调节因子,属核受体超家族成员。目前认为存在2种亚型：即经典的ERα和新发现的ERβ。利用基因敲除技术研究表明,ERα和ERβ对于卵巢的发育不是必需的,但ERα可通过负反馈回路调节排卵,而ERβ通过卵巢内和卵巢外2条途径调节卵泡的发育和排卵,两者共同作用以维持雌性性征、卵泡发育和排卵等生理活动;在子宫中,ERα占主导作用,在子宫成熟和胚胎附植过程中起着重要作用,ERβ则能以反应特异性和剂量依赖性的方式调节ERα的作用。     

雌激素受体α、β在妊娠猪子宫中的表达

众所周知,子宫是一个内分泌、旁分泌和自分泌的分子作用靶器官,类固醇激素对其具有特殊的重要性。本试验通过RT-PCR、Western bloting和免疫组化技术对怀孕猪整个妊娠期（交配后10、18、32、50、71、90 d）的雌激素受体（ERα和ERβ）mRNA和蛋白质进行了定位。研究结果首次发现,猪的整个妊娠周期中都有雌激素受体蛋白存在。ERα存在于怀孕猪子宫的腔上皮（LE）、腺上皮（GE）细胞和子宫肌层的肌细胞中,而且在妊娠的不同阶段染色的强度并不相同;在怀孕猪妊娠周期内LE和GE细胞中均可检测到ERβ,但子宫肌层上仅只有少许细胞中存在ERβ,并且染色结果显示弱免疫反应。Western bloting分析结果表明,试验期内都能检测到ERα和ERβ蛋白。RT-PCR结果显示,在妊娠期的每一阶段都有ERα和ERβ的mRNA表达。以上结果表明,相对ERβ而言,妊娠猪子宫中ERα含量更丰富,且占主导地位;怀孕猪整个妊娠周期内都能发现ERα和ERβ,并且可能对雌激素细胞的增值和分化起直接作用。     

镰刀菌毒素对断奶小母猪阴户、生殖器官指数、子宫雌激素受体分布和表达的影响

本试验旨在研究自然霉变饲粮中镰刀菌毒素对断奶小母猪阴户、生殖器官指数、子宫雌激素受体(ERs)分布和表达影响。选用35日龄平均体重(8.45±0.94)kg的健康三元杂交(杜×长×大)断奶小母猪40头,随机分为2个处理,每个处理20头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂含镰刀菌毒素的饲粮[玉米赤霉烯酮(ZEN)0.90 mg/kg;呕吐毒素(DON)1.43 mg/kg;烟曲霉毒素(FUM)5.85 mg/kg)]。预试期7 d,正试期35 d。结果表明:试验组35 d仔猪的阴户长、宽和面积及断奶母猪生殖器官指数均显著高于对照组(P0.05)。雌激素受体α(ERα)免疫阳性物质主要见于子宫内膜的腺上皮细胞和子宫肌层细胞的细胞质;雌激素受体β(ERβ)免疫阳性物质主要见于内膜的动脉管壁平滑肌和肌层平滑肌细胞的胞质内。与对照组相比,试验组仔猪子宫内膜腺上皮细胞ERα免疫阳性反应明显增强,且腺泡数量明显增多;而ERβ在试验组仔猪子宫肌层平滑肌和动脉管壁平滑肌细胞的阳性细胞数量明显多于对照组。试验组断奶母猪子宫中ERα和ERβ的mRNA相对表达量显著高于对照组(P0.05)。由此可见,镰刀菌毒素能够对断奶小母猪生殖系统造成不良影响,这种影响是通过ERs基因的转录来调控ERs在子宫中的相对表达量,进而改变生殖器官的发育实现的。     

不同性腺激素水平对子宫内膜细胞体外增殖的影响

为探讨不同雌激素（E2）和孕激素（P4）水平对家兔子宫内膜细胞体外增殖和分化的影响。采用离心法获取家兔子宫内膜上皮细胞及基质细胞，设不同雌激素和孕激素水平组合添加于培养液，利用MTT法间接测定不同性腺激素水平对子宫上皮和基质细胞的体外增殖的影响；利用免疫组织化学法检测传代细胞是否分化为其他类型细胞。结果表明利用离心法可获得纯度较高的子宫内膜上皮和基质细胞；孕激素（100nmol／L）对基质细胞的增殖有促进作用（P〈0.05），雌激素（100nmol／L）和少量孕激素（10nmol／L）对上皮细胞增殖有促进作用（P〈0.05）；免疫组化结果表明，经性腺激素刺激的子宫内膜上皮和基质细胞分别对上皮角蛋白抗体和波形蛋白抗体呈阳性。研究证实适宜的性腺激素水平对体外培养的子宫内膜细胞有促进增殖的作用，而且不会促使其分化为其他类型细胞。     

妊娠期环境雌激素双酚A暴露对子代成年雌鼠的生殖损伤作用

为探究母鼠妊娠期暴露双酚A(BPA)对子代成年雌性小鼠生殖损伤作用及DNA甲基转移酶(DNMT)基因表达量的影响,将120只妊娠母鼠随机分为6组,每组20只。各组分别在母鼠孕0.5～17.5 d内按0、2.5、5、10、20、40 mg·(kg·d)~(-1)剂量灌胃BPA。每组随机选取10只子代成年(56 d)雌鼠,麻醉后处死,收集血液、子宫和卵巢;统计子鼠成年时子宫和卵巢指数;HE染色观察子代雌鼠卵巢的组织形态学变化;放射性免疫法检测子代雌鼠血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)和孕酮(P_4)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测子代雌鼠卵巢内雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)的含量;实时荧光定量PCR法检测子代雌鼠卵巢内ERα、孕酮受体(PgR)、DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA转录水平。结果显示,BPA显著降低子代雌鼠血清FSH、LH、E_2和P_4水平,显著提高子代雌鼠卵巢ERα和ERβ含量,显著降低子代雌鼠卵巢ERα、PgR和DNMT mRNA的转录水平(P0.05或P0.01)。BPA暴露子代小鼠成年时卵巢和子宫指数增大,HE染色观察卵巢实质发生萎缩,初级和次级卵泡数量增加。本研究表明,妊娠期暴露BPA可促进成年子鼠卵巢产生卵泡,显著降低生殖激素的含量及活性,显著增加卵巢激素受体的含量,抑制卵巢激素受体和DNMT的转录,对子代产生生殖损伤。     

妊娠期母鼠暴露BPA对子代断乳雌鼠生殖激素水平与受体含量以及卵巢DNA甲基化的影响

为探究母鼠妊娠期暴露双酚A(bisphenol A,BPA)对子代雌鼠生殖激素的影响及BPA与机体发生作用的分子机制。通过灌服不同剂量的BPA制造孕鼠BPA暴露模型,然后计算子代小鼠断乳时的死亡率、卵巢与子宫系数;放射免疫法检测血清中雌二醇(E_2)、孕酮(P_4)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)含量;qPCR法检测卵巢DNA甲基转移酶1(Dnmt1),DNA甲基转移酶3A(Dnmt3A),DNA甲基转移酶3B(Dnmt3B),孕酮受体(PgR)及雌激素受体α(EsR1)mRNA表达。结果显示,子代雌鼠的相关指标与母鼠妊娠期BPA暴露存在非单调性剂量-反应关系;卵巢系数、E_2含量与BPA剂量呈现"U"型关系;子宫系数,血清P_4、FSH、LH水平,卵巢ERβ含量,卵巢Dnmt1、 Dnmt3A、 Dnmt3B mRNA相对转录水平与BPA剂量呈现"波浪式"关系;卵巢PgR、EsR1 mRNA相对转录水平与BPA剂量呈现"倒U"型关系;且BPA暴露组与空白组相比有极显著差异(P0.01)。这表明BPA可能通过增强子代雌鼠DNA甲基化酶的转录活性使生殖激素分泌紊乱,造成子代生殖损伤。     

冢畜胚胎着床和母体妊娠识别的分子调控

着床是指胚胎发育到胚泡阶段 ,与此同时子宫增殖和分化到可接受状态的同步化发育 ,并最后形成胎盘的过程。猪、马、牛、羊等都是表面着床 ,胚泡与子宫内膜只是表面接触 ,并未嵌入子宫内膜中。黄体产生的孕酮对于妊娠维持、子宫内膜接受态的建立以及着床后的妊娠维持都很重要。妊娠早期胚胎诱导母体的内分泌变化以维持卵巢黄体孕酮的持续分泌 ,这是母体对妊娠最早的生理反应 ,以使妊娠与正常的卵巢周期相区别 ,称为母体妊娠识别 ,它是着床起始必不可少的环节。最近证实 ,雌激素启动着床是通过诱导子宫上皮分泌细胞因子、生长因子以及粘蛋白等…     

母鼠孕期暴露双酚A对子代断乳雄鼠生殖内分泌以及睾丸DNA甲基化的影响

为探究母鼠妊娠期暴露双酚A(bisphenol A,BPA)对子代断乳雄鼠生殖内分泌与睾丸DNA甲基化的影响。按0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0 mg·kg~(-1)·d~(-1 )BPA剂量在妊娠期(PND)1～17 d灌胃孕鼠,制备孕鼠BPA暴露模型。然后统计母鼠妊娠期流产率,仔鼠断乳时存活率,睾丸系数。放射免疫法检测血清中雌二醇(E_2)、睾酮(T)含量;酶联免疫吸附法检测血清中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)含量;实时定量荧光PCR法检测睾丸中DNA甲基转移酶1(Dnmt1)、DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)、DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)mRNA相对转录水平。结果显示,20.0 mg/kg BPA暴露可极显著增加断乳时仔鼠睾丸系数(P0.01);20.0,40.0 mg/kg BPA暴露可显著增加母鼠流产率(P0.05),极显著降低仔鼠存活率(P0.01);2.5,20.0 mg/kg BPA暴露可极显著提高仔鼠血清T和ERβ含量(P0.01);各BPA剂量均可极显著降低仔鼠血清雌二醇水平(P0.01),促进睾丸内Dnmt1转录,抑制Dnmt3a和Dnmt3b转录;血清中雌激素受体α含量与BPA剂量呈现非线性关系。表明BPA通过干扰子代雄鼠睾丸内DNA甲基转移酶(Dnmt)的转录,使睾酮、雌二醇及雌激素受体分泌紊乱,影响子代雄鼠的生殖机能。     

siRNA抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2基因的表达研究

为探讨核因子E2相关因子（nuclear factor E2 related factor，Nrf2）基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响，本试验利用小分子干扰（siRNA）技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚（tBHQ），分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1（HO-1）和Homebox A10（HOXA10）基因表达的影响。结果显示，经实时荧光定量PCR方法检测，在设计的2条siRNA序列（siRNA-1209和siRNA-1672）中，siRNA-1672在终浓度为75 nmol/L、作用时间24 h时抑制效果较好，抑制效率在80%以上；经Western blotting方法检测，Nrf2蛋白表达水平在转染后96 h极显著下降（P<0.01），而HO-1和HOXA10的mRNA表达量分别下降了60%和70%（P<0.01），蛋白表达量在96 h后极显著或显著下降（P<0.01；P<0.05）。此外，经CCK8方法检测，Nrf2基因表达沉默后，牛子宫内膜上皮细胞增殖能力减弱。而在tBHQ激活Nrf2试验中，经Western blotting方法检测，tBHQ终浓度为30 μmol/L时Nrf2蛋白表达量最高，极显著高于对照组（P<0.01），且HO-1和HOXA10的蛋白表达量与对照组相比也明显上升。结果表明，本试验设计的siRNA-1672能特异性地抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2的表达，而抑制Nrf2的表达会导致牛子宫内膜上皮细胞增殖能力下降，且Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞HO-1和HOXA10基因表达存在调控作用。     

葛根素对去卵巢小鼠乳腺及子宫发育的影响

目的：观察葛根素对去卵巢小鼠乳腺及子宫的影响,研究其雌激素样作用。方法：将21日龄昆明系雌性小白鼠50只随机分成5组,每组10只。①正常对照组,正常＋蒸馏水;②阴性对照组,去势＋蒸馏水;③阳性对照组Ⅰ,去势＋己烯雌酚;④阳性对照组Ⅱ,去势＋己烯雌酚＋黄体酮;⑤试验组,去势＋葛根素。做乳腺标本和乳腺及子宫的常规切片,光镜观察。结果：摘除卵巢后的小鼠乳腺及子宫发育停止,乳腺导管和腺泡数（P〈0.01）、子宫系数（P〈0.01）、子宫壁腺体数（P〈0.05）与正常对照组比较差异显著或极显著。试验组的各项指标与阴性对照组比较差异不显著（P〉0.05）,但高于阴性对照组。结论：葛根素有微弱的雌激素样作用,对去卵巢小鼠乳腺和子宫发育有显著的影响。     

M41型IBV对输卵管中雌激素、孕激素受体及胰岛素生长因子-Ⅰ表达的影响

本试验通过相对定量RT-PCR检测接种M41型鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)对蛋鸡输卵管各部分(蛋白部、峡部、伞部和子宫)雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA表达的影响,研究IBV早期感染(10 d)抑制蛋鸡输卵管发育的作用机制。结果显示,输卵管各部均有ER、PR和IGF-Ⅰ mRNA的表达,染毒组ER、PR mRNA的表达量较正常对照组显著减少(P＜0.05),而IGF-Ⅰ的表达量较正常对照组显著增加(P＜0.05)。可见IBV可通过降低ER和 PR mRNA的表达水平,抑制输卵管对雌激素的应答能力而影响输卵管的发育;而IGF-Ⅰ可能是以自分泌、旁分泌方式在输卵管局部起作用,是输卵管生长的调节因子。     

导致母牛胚胎死亡因素的分析

1胎儿因素遗传因素主要表现在以下两个方面。首先是母牛患有染色体畸变的,包括内分泌混乱或者是生殖器问题,进而导致不能促进胚胎的正常发育。其次是胚胎其本身的遗传物质异常,进而会直接影响到胚胎的正常生长和发育。也有可能会干扰到其胚胎适应子宫内的环境变化,最终导致胚胎死亡。通常情况下,公牛与母牛的染色体结合时很容易发生易位,因此很容易导致其胚胎死亡。根据调查可知,在母牛配种的90天之后,出现染色体畸变的概率非常     

环境雌激素的雄性生殖毒性作用及机制

大量资料表明,在人类生产和生活过程中所产生的多种能模拟或颉颃体内天然激素生理作用的外源化合物会被释放到环境中,并在环境中持久存在;还会通过直接或间接的方式在动物体内蓄积、富集,与体内激素受体结合,具有模拟和干扰动物及人类内分泌功能物质的作用,从而引起人类及多种生物的神经系统失调、内分泌紊乱、免疫能力下降和生殖异常;还具有发育毒性、胚胎毒性以及致畸、致癌及引发肿瘤和免疫抑制疾病作用,这类化合物统称为"内分泌干扰物".由于内分泌干扰物是由外部环境进入机体,并产生类似内激素的作用,干扰机体内分泌系统,影响生物的生存和繁衍,也称为"环境雌激素".对环境雌激素雄性生殖毒性的作用机制进行了综述.     

雌激素对奶牛子宫内膜组织中生长因子的影响

为了使用雌激素诱导体外培养的奶牛子宫内膜组织,试验采用Western-blot法检测雌激素对奶牛子宫内膜组织中结缔组织生长因子(CTGF)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、细胞增殖抗原(PCNA)蛋白表达的影响。结果表明:与对照组比较,在雌激素诱导下CTGF、FGF-2、TGF-β1、VEGF、MMP-2、PCNA的蛋白表达水平上升,且呈现时间依赖性增高。说明雌激素能够对奶牛子宫内膜组织中CTGF、FGF-2、TGF-β1、VEGF、MMP-2、PCNA等生长因子的表达产生影响,从而为进一步研究雌激素对奶牛子宫内膜组织生长因子表达影响的作用机制提供可靠的理论基础。     

小梅山猪发情周期生殖器官雌激素受体α mRNA定位与相对定量研究

采用地高辛标记探针的原位杂交法(In situhybridization histochemistry,ISHH)测定小梅山猪发情周期第2、7、12、17天卵巢、子宫内雌激素受体α(Estrogen receptorα,ERα)mRNA的细胞定位与相对表达丰度。结果表明,卵巢中ERαmRNA杂交信号出现在各级卵泡的颗粒细胞,黄体早期部分细胞也有ERα基因微弱表达,卵母细胞未见有阳性染色存在。整个发情周期中卵巢ERαmRNA均呈低水平表达,但在发情周期第17天有上升的趋势。子宫中阳性颗粒主要出现在子宫内膜上皮腺体细胞中,基质部分很少。子宫内膜ERαmRNA丰度在发情周期第17天极显著高于发情周期第12天(P<0.01)。放射免疫测定发情周期第2、7、12、17天血浆E2水平,与子宫内膜ERαmRNA呈现同步性变化,两者显著相关(r=0.918)。     

妊娠母羊子宫易位的诊治

<正>正常情况下,子宫中的内膜覆盖在子宫的体腔中。但是在胚胎发育的过程中可能会因某个因素而导致母羊的子宫内膜在其身体的其他部位生长,进而造成子宫易位。这种易位在其组织学上不但具有内膜的腺体,而且会有内膜的间质进行围绕。临床表现严重的母羊会造成结构严重变形。如果母羊发生子宫易位,就会导致不孕。如果子宫易位到其他某个特殊的部位时,就可能出现特殊的临床表现。通常情况下,母羊出现子宫易位会引发腿部的