豆类胰蛋白酶抑制剂活度测定方法的研究

在本研究中修必了原有测定方法（美国ＡＡＣＣ７１－１０）的测试条件：１．８０目颗粒度；２．不脱脂；３．水提取及提取液过滤后测定；４．单浓度平均值测定；５．用酶起动法；６．用猪胰蛋白酶。对大豆、菜豆和绿豆样品的测定结果表明，改进后的测定方法不但操作简便而且变异系数小，灵敏度高，抑制线性范围宽（２０％￣６５％）。     

豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性测定方法研究

利用紫外分光光度计，对豆制品中胰蛋白酶抑制剂在抑制牛胰蛋白酶活性反应前后的吸光值差异制作差值曲线，从而得出斜率与抑制剂活性之间关系的方法。并通过反复的实验对比，最终可以快速准确地测定大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性。     

测定豆类胰蛋白酶抑制剂活性和种类的电泳方法改良

以赤豆胰蛋白酶抑制剂(ABTI)及绿豆的胰蛋白酶抑制剂(MBTI)为材料,采用明胶-PAGE技术对其进行活性和种类检测。同时对影响明胶-PAGE技术体系的明胶浓度、酶解时间、脱酶液及电泳的灵敏度等因素进行探讨。结果表明:改良后的明胶-PAGE技术,鉴定胰蛋白酶抑制剂活性和种类的时间大大缩短,成本低,技术操作可行性强,重复性好,且检测ABTI的种类达7种,灵敏度达到每孔1.0 BAEE、蛋白点样量为每孔0.154μg。     

Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂研究进展

阐述Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(BBI)的分子结构、作用机制,并对其在医药领域、饲料工业及植物抗虫害等方面的研究进展进行了综述和展望.     

大豆胰蛋白酶抑制剂与大豆抗大豆胞囊线虫的关系

对大豆胞囊线虫3号小种的抗病品种Hartwig和小粒黑豆,感病品种辽豆15和中黄28分别接种线虫,检测大豆根系中大豆胰蛋白酶抑制剂的表达量对大豆抗胞囊线虫的抗性.经过胰蛋白酶抑制剂活性测定结果表明,接种大豆胞囊线虫的抗感品种的大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)表达量明显高于未接种的品种,各个品种的STI表达量也不同.说明大豆胰蛋白酶抑制剂参与抗病过程.但是各个品种的变化趋势并不相同,表明抵御线虫的抗病作用机制存在品种间差异.     

固相酶法分离大豆胰蛋白酶抑制剂研究

以硅胶-壳聚糖为载体,通过戊二醛偶联胰蛋白酶,制备固定化酶,分离纯化大豆中胰蛋白酶抑制剂.对戊二醛浓度、反应温度、酶浓度等影响固定化酶制备的因素进行了研究.戊二醛的浓度为2.0%,反应温度为20℃,胰蛋白酶与载体比为15∶ 1 000时,分离纯化的大豆胰蛋白酶抑制剂活性最高,达1872.51 U·mg-1,比粗品高46.22倍.结果表明通过该法能够获得较高活性大豆胰蛋白酶抑制剂,为大豆胰蛋白酶抑制剂的开发利用提供了依据.     

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因RNAi载体的构建

采用PCR技术扩增得到胰蛋白酶抑制剂KTi基因正义和反义片段、大豆种子特异性启动子7αP和作为内含子的GUS基因片段,将其分别连入克隆载体pMD18-T Vector中.然后以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,通过AHLG作为中间载体,根据RNAi原理将组成RNAi 结构的4个目的片段分别连入其中,成功构建了种子特异性RNAi表达载体p1301-KTiRi.研究结果为RNAi技术在大豆品质改良中的应用提供了基础.     

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SKTI)研究进展

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂（SKTI）是一种典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂，主要集中在大豆的子叶中，近60年来，对其生化特性及结构已有较多研究，通常认为这种蛋白酶抑制剂具有贮藏，调节内源蛋白酶活性及植物防御等作用，研究表明，这种蛋白酶抑制剂抗虫谱广，能显著抑制幼虫的生长发育不易产生抗性，对人畜无害，因此对其进行研究及开发利用具有重要的经济和社会效益。迄今为止，至少已有4种基因被克隆，通过转基因技术在烟草，水稻，小麦等作物获得了抗性植株，本文从SKTI的类型，基因克隆及生理功能等方面作一简单综述。     

大豆胰蛋白酶抑制剂对饮食肥胖小鼠的减肥作用

采用断乳ICR小鼠为实验动物,第一阶段小鼠分为2组,正常小鼠组(NM)与肥胖模型小鼠组(FM),建立饮食肥胖小鼠模型;第二阶段NM作为肥胖预防组,FM作为肥胖治疗组,分别灌胃大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsininhibitor,SBTI)。实验结束时,称体重,血液离心取得血清,测定甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、高密度脂蛋白(HDL-C)、总胆固醇(TCH)等指标,研究SBTI对饮食肥胖小鼠的减肥作用。结果表明:与预防对照组相比,肥胖预防组SBTI高剂量组的体重极显著降低(P<0.01),TG和FFA显著降低(P<0.05),HDL-C显著升高(P<0.05);与模型对照组相比,肥胖治疗组SBTI高剂量组的体重极显著降低(P<0.01),TG和FFA显著降低(P<0.05),HDL-C显著升高(P<0.05);2组的TCH与相应对照组相比,差异均不显著(P>0.05)。因此,SBTI对饮食肥胖有一定的预防和治疗作用。     

即墨野生大豆胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及序列分析

为了从分子水平上解析野生大豆胰蛋白酶抑制剂的特异性,应用RT-PCR方法从即墨野生大豆(Glycine soja Sieb.et Zucc)中扩增出胰蛋白酶抑制剂两种编码基因Kunitz型(KTI,654 bp)及Bowman-Birk型(BBI,357 bp)的基因全长序列,并对两个基因序列做生物信息学分析。分别登录到Gen Bank Accession No.AB112031.1和Accession No.AB081833.1并进行同源性鉴定,证明这两个基因为丝氨酸蛋白酶抑制剂基因家族中的成员。结果表明:即墨野生大豆的KTI基因与野生大豆(Glycine soja,No.AB308134.1)、大豆(Glycine max,No.EF541136.1)的KTI基因序列同源性都为99%,具有6个保守基序;BBI基因与野生大豆(Glycine soja,No.AB081834.1)、大豆(Glycine max,NM_001250058.3)BBI基因序列同源性均为99%,具有5个保守基序,通过二级、三级结构分析发现与栽培大豆有着明显的差别。     

缺失SBTi—A2大豆杂交后代品系籽粒化学成分分析

对一个杂交组合后代１０个稳定缺失胰蛋白酶抑制剂（ＳＢＴｉ－Ａ２）品系及其亲本籽粒化学成分组成进行的分析比较表明，大豆籽粒中缺失ＳＢＴｉ－Ａ２对其蛋白质含量及天门冬氨酸、甘氨酸和丙氨酸含量有一定影响，表现为缺失ＳＢＴｉ－Ａ２品系显著低于高亲和双亲平均值；而对其他氨基酸和脂肪含量及脂肪酸组成基本没有显著的影响。     

大豆凝集素、脲酶和胰蛋白酶抑制剂的分离纯化

采用硫酸铵盐析、羟基磷灰石柱层析以及Sephadex凝胶过滤等方法,同时从大豆中分离纯化大豆凝集素、脲酶和胰蛋白酶抑制剂。三者的蛋白质回收率分别为0.39％、0.23％和0.13％。本方法与DEAE—Sephadex A_(50)柱层析及酸化—Sepharose 4 B、胰蛋白酶—Sepharose 4 B、卵类粘蛋白—Sepharose 4 B亲和层析分离纯化方法作了比较。本法简便易行,效果较好。     

中国大豆品种资源种子Ti电泳分析

对4,410份中国大豆品种资源种子的胰蛋白酶抑制剂进行了电泳分析,栽培大豆100％材料是Ti~a型,野生大豆89.3％材料是Ti~a型,有6.6％材料是Ti~b型,还有49份材料为Ti~a和Ti~b双带混合型;Ti~a型分布广泛,Ti~b型多分布在106～108°E的我国东部省分,Ti类型具有遗传变异;野生大豆单粒间的Ti类型存在差异。     

中国大豆种子蛋白中胰蛋白酶抑制剂等位基因的频率及分布

我国１．９万份大豆（栽、野）种质资源的胰蛋白酶抑制剂（ＳＢＴＩ）等位基因电泳分析结果指出，９８．２％的材料具有Ｔ型，１．３％的材料具有Ｔ型。在野生材料中发现有Ｔ类型。三种基因型出现的频率比例为１００：１．３：０．２。未发现不含胰蛋白酶抑制剂的ｔｉ型材料．栽培种Ｔｉ类型单一，野生种Ｔｉ类型变异较大。     

大气CO2浓度升高对大豆根瘤量及其固氮活性的影响

通过开顶式气室控制CO2浓度，对盆栽大豆进行试验测定，研究了大气CO2浓度升高对大豆根系，重点是根瘤量和根瘤活性的影响。结果表明，大气CO2浓度升高，促进了大豆根系生长，大豆根体积、主根长、根鲜重均呈增长趋势，根冠比增加。CO2浓度为450、550、650和750μmol／mol时，与大气CO2背景浓度相比，在初花期，大豆根瘤数分别增加6．1％、15．9％、19．2％和26．5％，其中主根根瘤数增加较为显著，至鼓粒期，根瘤数增加幅度为7．8％～48．0％，增幅较初花期大，其中侧根根瘤量增加更多。同时，高CO2水平下，根瘤鲜重的变化与根瘤数基本一致。4种高CO2浓度下，初花期根瘤比固氮活性提高10．1％～24．0％，大于鼓粒期的6．0％～13．4％的增加幅度；单株根瘤固氮活性初花期增加10．6％～55．7％，鼓粒期则提高了20．0％～73．9％。     

不同大豆品种田间结瘤固氮有效性的评价

利用相关和通径分析对田间种植的４０份大豆品种（系）的结瘤固氮性状（结瘤分级，有效瘤数，有效瘤干重，有效结瘤指数，植株干重和植株全氮含量）的研究表明：有效瘤数，有效瘤重和有效结瘤指数可以有效地作为对大豆固氮种质的评价指标，其相对重要性为有效瘤重＞有效瘤数＞有效结瘤指数。在此基础上并结合籽粒产量因子筛选出２份结瘤固氮及产量较高的种质。研究同时也获得了七份在有效瘤重与有效瘤数或有效瘤重与效结瘤指数上表现     

咖啡和橡胶叶片硝酸还原酶活性诱导的研究

用体内法测定中粒种咖啡橡胶品系88—13叶片的硝酸还原酶活性,结果表明:低温干旱季节不经诱导叶片基本上不具有可测定的酶活性,但雨后则有。KNO_3诱导浓度以50毫克分子为最好。连枝叶片酶活性,橡胶以诱导36小时为最强,咖啡直到48小时酶活性仍未见下降。在室内自然光照强度和光周期条件下,酶活性随光强增加而提高,但连续光照并不能促使酶活性进一步提高。酶活性以成龄叶为最高,幼叶较低,衰老叶常不表现酶活性。100ppm 钼酸铵对咖啡和橡胶叶片酶活性都有明显的促进效应。中粒种咖啡叶片的酶活性远比橡胶品系88—13大。     

芝麻主要性状与籽粒产量之间的相关及通径分析

本文对30个品种(系)的主要性状与籽粒产量间进行了相关通径分析。结果表明单株蒴果数和千粒重对单株产量的直接效应值较大。因此,在培育高产品种时,应以株高适中、单株结蒴多、结蒴密、千粒重高的类型作为主要选择目标。