黄瓜胚状体途径再生体系的建立

【目的】建立黄瓜高频胚状体再生体系,为黄瓜遗传转化体系的完善奠定基础。【方法】以黄瓜品种津研四号、长春密刺、Q8和14-1为材料,研究不同基因型材料愈伤组织的诱导情况;分别取14-1的子叶、子叶节、下胚轴和成熟胚为外植体,研究不同外植体类型的愈伤组织和胚状体产生情况;以14-1子叶节为外植体,研究不同激素及其质量浓度配比对黄瓜胚状体诱导的影响。【结果】4个不同基因型中,欧洲温室型黄瓜种质14-1可诱导出胚状体。在4种外植体类型中,14-1的子叶节可以高效诱导出愈伤组织和胚状体,其诱导率分别为100.0%和34.1%。激素及其质量浓度组合也会影响胚状体的诱导,在愈伤组织诱导阶段,以MS+1.5mg/L 2,4-D为培养基对胚性愈伤组织的诱导效果最好,其对14-1子叶节的诱导率为100%;在分化培养阶段,MS+0.1mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.2mg/L IAA有利于体细胞胚的发生,14-1的出胚率为62.5%。显微形态观察发现,黄瓜体细胞胚发育过程包括球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶期胚等时期,这些胚可以发育成正常小植株。【结论】14-1的子叶节经诱导培养基MS+1.5mg/L 2,4-D和分化培养基MS+0.1mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.2mg/L IAA培养后,可高效产生胚状体,并可萌发成正常植株。     

黄瓜胚状体高频再生体系的建立及优化

【目的】筛选适宜于黄瓜体细胞胚发生的培养条件,为完善黄瓜胚状体再生途径及建立黄瓜优良的遗传转化受体系统奠定基础。【方法】以8份不同基因型黄瓜种质Q24、Q16、9930、No.26、Gy14、No.14、S63和16F7-2-8为材料,研究基因型对黄瓜胚状体诱导的影响。以胚状体诱导率及成苗率为考察指标,以Gy14和9930为材料,探讨苗态（子叶未展开,子叶即将展开,子叶展开）对黄瓜胚状体诱导的影响;以Gy14为材料,从子叶切割方式（不保留下胚轴及保留约1,2 mm下胚轴）、无菌苗培养阶段光照与否、愈伤组织诱导培养基中2,4-D的质量浓度（0.75,1.00,1.50,2.00 mg/L）以及胚性愈伤的诱导时长（20,30和60 d）等方面,对黄瓜胚状体再生体系进行优化。【结果】基因型选择结果显示,Gy14和9930比其他基因型黄瓜种质更易诱导出较明显的胚状体。与子叶即将展开和子叶已展开2种苗态相比,子叶未展开时,Gy14和9930的胚状体诱导率较高,分别可达39.3%和38.7%。子叶节保留约1 mm下胚轴处理的胚状体诱导率最高,可达85.2%。无菌苗培养阶段每天进行16 h光照和全天暗处理2种方式,对于胚状体诱导率的影响不显著。适宜胚状体诱导的2,4-D质量浓度为1.00 mg/L,胚状体诱导率为31.6%。与诱导20和60 d相比,外植体在诱导培养基上诱导30 d的愈伤组织胚状体诱导率和成苗率较高,分别为39.6%和65.6%。【结论】黄瓜Gy14的无菌苗处于子叶未展开、仍呈抱合状态时,对其采取保留约1 mm下胚轴的切割方式,置于含1.00 mg/L 2,4-D的培养基上培养30 d后,可较为高效地产生胚状体,并获得完整的植株。     

2苹果品种叶片胚状体再生体系的建立

以苹果“富士”和“鲁加6号”为材料,建立叶片胚状体再生体系。结果表明:先经胚性细胞诱导培养基MS+BA1.0 mg·L^-1+NAA5.0 mg·L^-1+TDZ0.5 mg·L^-1诱导胚性细胞,再置于胚胎发育培养基MS+BA1.0 mg·L^-1+NAA0.1 mg·L^-1上进行暗培养,最佳时间为10 d,2品种叶片再生率分别为96.7%和100%。经胚状体不同时期形态学组织学观察,显示胚状体发育时期经历原胚、球形胚、心形胚、子叶形胚、鱼雷形胚、成熟胚等阶段。“鲁加六号”苹果最佳生根培养基为1/2MS+IAA0.1 mg·L^-1+IBA0.1 mg·L^-1,生根率达86.7%。     

新疆陆地棉胚状体发生高效再生体系的建立

对新疆两个陆地棉品种胚状体发生及植株再生研究的结果表明：胚状体发生、萌发、成苗各阶段，品种问存在明显差异。新陆早1号、新陆早7号正常植株率最高分别达657％，85．7％。在胚状体发生、发育不同阶段，激素的调控作用因品种而异。异常胚是转化为正常再生植株的有效途径，异胚转化率可达47．7％。移栽基质研究表明，移栽前期选用拉卡粒，中后期转入混合土：珍珠岩=1：1的移栽基质中再生植株生长最好，再生植株移栽成活率达81．0％。建立了两个品种的胚状体发生高效再生体系。     

楤木胚状体的诱导及再生体系的建立

楤木为五加科楤木属植物,具有很高的经济价值和药用价值。以楤木嫩茎为材料进行了其胚状体的诱导和植株再生研究,结果表明:楤木愈伤诱导的最佳培养基为MS+1.5 mg/L 2,4-D,诱导率达100%;楤木胚状体诱导和增殖的最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA,胚状体分化率达50%以上,增殖倍数达11.337倍;胚状体分化成苗的最佳培养基为MS+0.5 mg/L ZT+0.05 mg/L IAA,分化率达4.069;壮苗生根的最佳培养基为1/2MS+0.1 mg/L NAA,生根率达98.6%。     

黄瓜原生质体培养再生胚状体和植株研究

】对黄瓜原生质体分离和再生条件的研究表明,７日龄初展黄瓜子叶和１５～１７日的真叶,在１％纤维素酶、０．５％离析酶和０．２５～０．３０ｍｏｌ／Ｌ甘露醇混合酶液中,均分离出大量原生质体,转入附加１ｍｇ／ＬＢＡ和０．５ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ的改良ＫＭ培养基（去除ＮＨ４ＮＯ３）中浅层液体培养,形成微愈伤组织。由成都二早子黄瓜真叶原生质体愈伤组织培养的胚状体和子叶原生质体愈伤组织诱导的不定芽,皆培育成小植株。     

宁夏水稻成熟胚离体再生体系的建立

以34个宁夏粳稻品种的成熟胚为材料,N6和MS为基本培养基,研究了基因型、激素、分化,继代对宁夏粳稻成熟胚培养特性的影响.结果表明,基因型对宁夏粳稻成熟胚培养的影响较大,参试材料中优育28的培养特性最好;诱导愈伤组织中2,4-D质量浓度以2 mg/L较好;分化培养中参试品种均表现为KT 2mg/L+NAA 1 mg/L+IAA 0.5 mg/L处理的分化效果最好;成熟胚诱导的愈伤组织继代1～2次对分化没有显著的影响,继代3次以上,其分化能力明显减弱.通过本研究,初步建立了宁夏水稻成熟胚高频再生体系.     

小麦幼胚离体培养再生体系的建立

选择不同小麦品种的幼胚作为试验材料,对影响其愈伤组织诱导及植株再生的因素进行分析。结果表明,小麦幼胚组培最适胚龄为12~14 d;在最适胚龄下,基因型对胚性愈伤组织的发生频率影响较大,对小麦幼胚培养出愈率的影响并不显著。在加有2,4-D 1 mg/L+KT 0.5 mg/L的基本培养基中进行继代培养,晋农232、晋农318和晋农234胚性愈伤组织的诱导率最高,分别达74.6%,70.3%和60.8%。此外,培养基中添加一定量的含氮有机物,也可提高胚性愈伤组织的诱导率,即晋农232添加300 mg/L Gln,晋农318添加500 mg/L Gln+300 mg/L CH后,其胚性愈伤组织的诱导率均有显著提高。分化培养中,添加ZT 3 mg/L和NAA 1 mg/L对晋农232、晋农318和晋农234等3个品种愈伤组织诱导分化的效果最好,其再分化率分别达到72.5%,57.5%和62.5%。生根培养中添加IAA 0.8 mg/L的1/2基本培养基可以诱导芽快速生壮根。     

黄瓜高频再生体系的建立

【目的】建立黄瓜的高频再生体系,为黄瓜种质的遗传转化奠定基础。【方法】分别以华北型黄瓜种质26号、欧洲型黄瓜种质14-1为材料,研究不同激素组合、AgNO3质量浓度、苗龄、子叶切割方式及外植体接种方式对黄瓜子叶节不定芽诱导的影响。【结果】华北型黄瓜种质26号再生的最适激素组合为4.0mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达85.00%和2.51;欧洲型黄瓜种质14-1再生的最适激素组合为3.0mg/L 6-BA+2.0mg/L ABA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达86.70%和2.77;5d苗龄的黄瓜子叶作为外植体时诱导不定芽的状态最佳;切除子叶端部2/3且基部附带有1mm子叶柄、以叶背向下子叶柄微插入的方式进行接种再生效率最高。【结论】建立了黄瓜种质14-1和26号材料的高频再生体系,再生率均可达85%以上。     

紫云英体细胞胚再生体系的建立

研究了外植体种类、植物激素以及水解酪蛋白(casein hydrolysate,CH)浓度等因素对紫云英体细胞胚诱导及植株再生的影响,建立了紫云英体细胞胚的再生体系。结果表明:子叶柄在MS+4 mg/L 2,4-D+1 000 mg/L CH的培养基上,体细胞胚诱导率最高,达到58.3%;体细胞胚分化和植株再生培养基为1/2MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+1 g/L CH,再生率达到60.0%。研究结果为紫云英品种的选育及改良提供了新思路。     

半夏胚状体诱导及植株再生的研究

以采自甘肃省西和县的野生半夏为试验材料,以MS为基础培养基,观察了不同的激素配比及不同外植体对愈伤组织诱导、胚状体分化及植株再生的影响.结果表明,最佳培养基为MS+2,4-D(0.5 mg/L)+6-BA(1.5 mg/L),外植体以叶柄、株芽和块茎为好.     

小麦成熟胚高频再生体系的建立

以甘春24成熟胚为外植体,研究消毒方式、浸种时间、接种方式、2,4-D质量浓度等处理对愈伤组织诱导与分化的影响,旨在建立一套有效的小麦高频再生体系。结果表明,不同消毒处理、2,4-D质量浓度和接种方法对成熟胚愈伤组织分化有极显著影响,不同浸种时间对成熟胚愈伤组织分化的影响差异不显著。采用25%NaClO初次消毒25min,浸种后用25%NaClO消毒10min,对愈伤组织的诱导较好,对成熟胚伤害小,且污染率低;浸种15～21h,对成熟胚愈伤组织的诱导无明显差异,但浸种18或21h有利于胚性愈伤组织的分化;成熟胚刮碎处理,有利于愈伤组织的诱导与分化,其诱导率与绿点率分别为98.33%,62.04%;当2,4-D质量浓度为2.5mg/L时,甘春24胚性愈伤组织品质较好。     

黄瓜未授粉子房的胚状体诱导研究初报

对3个黄瓜品种未授粉子房的胚状体诱导试验结果表明,不同基因型品种、采样时期、培养基附加物和处理温度都能影响胚状体的诱导率和诱导效果.鲁黄瓜9号开花前一天取样胚状体诱导效果最佳;培养基附加40 g/L蔗糖,0.06 mg/LTDZ,35 C黑暗处理4 d,胚状体诱导率最高;附加0.1 mg/LNAA、0.8 mg/L6-BA、40 g/L蔗糖,在25 C、4 500 lx、16 h/d光照条件下继续培养,胚状体生长健壮.     

大豆未成熟子叶诱导胚状体发生再生植株

本文以大豆未成熟子叶为外植体，进行了大豆胚状体发生和再生植株的研究。结果表明；ＭＳ基本培养基附加高浓度的生长素，可成功地诱导胚状体发生。２．４－Ｄ比ＮＡＡ具有更强的诱导效果；２．４－Ｄ与ＮＡＡ配比所诱导的正常胚率高于其单用；未成熟子叶不同的放置方式对胚体发生影响极大。畸型胚进行了改良并获得了完整小植株。     

大豆未成熟子叶诱导胚状体发生再生植株

本文以大豆未成熟子叶为外植体，进行了大豆胚状体发生和再生植株的研究。结果表明：ＭＳ基本培养基附加高浓度的生长素（２．４—Ｄ或ＮＡＡ或２．４—Ｄ与ＮＡＡ的配合），可成功地诱导胚状体发生。２．４—Ｄ比ＮＡＡ具有更强的诱导效果；２．４—Ｄ与ＮＡＡ配比所诱导的正常胚率高于其单用；未成熟子叶不同的放置方式对胚状体发生影响极大。对畸型胚进行了改良并获得了完整小植株。     

黄瓜再生体系和遗传转化的建立

以黄瓜（Cucumis sativus L.）哈研3号为试验材料,采用组织培养技术系统探讨以子叶或子叶节为外植体时不定芽的诱导效率,最终确定以子叶节作为再生体系及遗传转化体系的试验材料;并系统探讨了不同PGRs浓度对不定芽诱导、不定芽伸长及生根阶段的影响;建立了哈研3号黄瓜的高频再生体系;并在子叶节根端膨大阶段进行了抗生素（Km）浓度的摸索,建立了较为适宜的遗传转化体系,为转基因工作打下坚实的基础。