灵芝菌丝原生质体形成与再生的研究

本文探讨了灵芝 (Ganodermalucidum)菌丝原生质体的制备及再生的条件。实验结果表明 :采用MYG为灵芝菌丝培养基 ,2 %真菌溶壁酶 (Lywallzyme)作脱壁酶 ,0 6mol/L甘露醇作渗透压稳定剂 ;对培养 6d的灵芝菌丝在 30℃下进行酶解 ,酶解时间 4- 6h ,可产生约 3 0× 1 0 6个 /mL (0 1g菌丝 )原生质体 ,并在添加灵芝子实体浸出汁的双层培养基上实现了灵芝菌丝原生质体的再生。     

金顶侧耳原生质体制备与再生条件的研究

采用单因素以及正交试验法探究金顶侧耳原生质体的制备及再生条件,结果显示:加富PDA液体培养基培养5天的菌丝,在以蔗糖为渗透压稳定剂配制2%浓度的溶壁酶条件下,30℃酶解2.5 h,原生质体得率为2.36×107个/m L;选择蔗糖再生培养基,再生率可达0.71%。     

秀珍菇原生质体制备研究

对秀珍菇菌丝原生质体制备条件进行了优化。结果表明:以培养5 d的幼嫩菌丝体为材料,在1.5%溶壁酶+0.5%蜗牛酶混合酶作用下,以0.6 mol/L甘露醇作渗透压稳定剂于pH6.0,30℃酶解3.0 h,原生质体产量达到1.96×10~8个/m L。     

云芝菌丝体原生质体制备与再生条件的研究

研究了不同酶种类、酶浓度、酶解温度和时间、渗透压稳定剂、pH值及菌龄等因素对云芝原生质体制备以及不同再生培养基对云芝原生质体再生的影响。结果表明,菌龄3d的云芝菌丝体用3％溶壁酶,以pH5．5,0．4mol／L的KCl为稳定剂,30℃酶解5h获得的原生质体产量最高;用RMl再生培养基培养,原生质体再生率最高。     

灵芝原生质体的制备与再生研究

以泰山灵芝为试材,研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解pH、渗透压稳定剂对灵芝原生质体制备和再生的影响.结果表明:菌龄为7d,以甘露醇为渗透压稳定剂,采用酶浓度2.0％的溶壁酶,pH为6.0,31℃条件下酶解2.5h为灵芝原生质体制备的最适条件;并在原生质体再生固体培养基(以0.6 mol/L蔗糖为渗透压稳定剂)上,原生质体的再生率最高.     

松茸原生质体制备与再生的研究

本文针对酶种类及其浓度 ,酶解时间、渗透压稳定剂的种类及其浓度、菌龄及菌丝形态等对松茸菌丝原生质体制备与再生影响的研究。结果表明 ,采用三角摇瓶培养 3 d后、静置培养60 h的松茸菌丝体 ,在 3 0℃ ,p H6.5的条件下 ,以 0 .6M蔗糖为渗透压稳定剂 ,通过 2 .5 %溶壁酶、0 .5 %崩溃酶的复合酶进行2 .5 h酶解 ,松茸原生质体制备率与再生率最高     

梨阿太菌果腐病菌（Athelia bombacina）单核化菌丝制备及其致病力评价

【目的】建立梨阿太菌果腐病菌(Athelia bombacina)单核化菌丝制备方法,并对其致病性进行评价,为后续该病原菌的分子生物学研究奠定基础。【方法】以阿太菌果腐病菌HG-AB20170418为供试菌株,研究了菌龄、酶解时间、裂解酶等对阿太菌果腐病菌原生质体制备的影响,并比较分析了单核体菌丝与原始菌丝之间形态、生长速率以及致病力差异,最后对单核化处理前后菌丝杂合度进行了评估。【结果】以溶壁酶为裂解酶制备的原生质体产量最高,崩溃酶和纤维素酶对菌丝裂解作用极弱。溶壁酶和蜗牛酶裂解时间较短,最佳裂解时间为2.0 h,而崩溃酶和纤维素酶裂解时间较长。培养3 d菌丝经酶解后在显微镜下可观察到大量的原生质体,且在较短时间内菌丝全部裂解。单核化处理后菌丝在PDA上培养呈螺旋状生长,且生长速率显著低于原始菌株。经单核化处理的菌株接种至黄冠梨后,所有果实接种部位均在第3天产生病斑,但不同菌株间致病力差异显著。经单核化处理后菌丝杂合率为0.00%,属于简单基因组。【结论】单核化菌丝最佳制备条件为PDB液体培养3 d的A. bombacina菌丝经1.5%(w,后同)溶壁酶和1.5%蜗牛酶裂解1.5 h,该制备方法的建立为该病原菌的分子致病机制研究提供重要的方法基础。     

白灵菇原生质体制备与再生的研究

详细研究了酶系统、渗透压稳定剂、酶解温度、酶解时间、pH值、菌龄等因素对白灵菇(Pleurotusnebrodensis)原生质体制备与再生的影响。通过单因素和正交实验确定最适条件为:采用7日龄菌丝,以0.6M甘露醇作为渗透压稳定剂,pH5.8时,在1.5%溶壁酶 0.2%蜗牛酶 0.3%纤维素酶的作用下,32℃水浴酶解2.5～3h,可得到1.7×107/mL原生质体,再用双层混合再生培养基培养,可达到1.3%再生率。     

凤尾菇菌丝原生质体的分离与再生

本文利用一种自制的真菌细胞壁溶解酶——溶壁酶(Lywallzyme),通过酶解试验比较了菌龄、渗透压稳定剂、酶解温度及酶解时间等对凤尾菇菌丝原生质体分离的影响。通过原生质体的再生试验,系统地比较了菌龄、渗透压稳定剂和酶解时间及再生培养基对凤尾菇菌丝原生质体再生频率的影响,从而找到凤尾菇茵丝原生质体分离和再生的较适条件。在适宜的酶解条件下可分离到大量有活力的原生质体,其产量最高可达3×10~7个/me以上。本试验中,原生质体的再生频率最高为4.98％。同时,本文还对凤尾菇菌丝原生质体再生过程的形态变化作了适当描述。     

姬松茸原生质体制备及再生条件优化

以姬松茸JS01为试材,通过单因素试验和正交实验,利用SPSS 22.0软件进行分析,对姬松茸原生质体的制备及再生条件进行优化,以提高姬松茸原生质体产量和再生率。首次通过在再生培养基中添加细胞壁前体物质及营养因子,进一步提高姬松茸原生质体的再生率。结果表明:原生质体最佳制备条件为菌龄7d,以0.6mol·L~(-1) KCl作渗透压稳定剂,溶壁酶浓度1.5%,酶解温度30℃,酶解时间4.0h,pH 6.0,在该条件下原生质体产量高达1.97×10~7个·mL~(-1);菌龄6d,以0.6mol·L~(-1) MgSO_4作渗透压稳定剂,溶壁酶浓度2.0%,酶解温度30℃,酶解时间3.0h,pH 6.5,再生培养基为GM时,原生质体的再生率最高,为1.12%。再生培养基中添加纤维二糖和维生素B_1后,再生率为1.17%,较优化结果提高了4.46%。该研究为姬松茸在菌种提纯复壮、原生质体诱变、原生质体融合育种、原生质体基因组重排等遗传学研究提供参考依据。     

茶薪菇原生质体制备及诱变的研究

对茶薪菇原生质体的分离及再生进行研究 ,结果表明以溶壁酶的去壁效果最好 ,不同酶组合可提高去壁效果 ,酶解液在 2 0 %时原生质体释放量很高。酶解适宜温度为 30℃ ,培养 4～ 5d的菌丝酶解 3h释放的原生质体最多。以甘露醇作为渗透压稳定剂 ,原生质体的释放量及再生率均较高 ,再生率达到 5 %左右 ,经紫外线照射 2 0s,致死率即达 70 %以上     

姬松茸原生质体的制备与分离

食用菌原生质体的制备与分离是进行食用菌菌种选育的新途径之一。本文通过探讨不同因素 :菌丝体、培养基、时间、稳定剂、酶的种类与浓度等对姬松茸原生质体制备的影响 ,确定了姬松茸原生质体制备条件为 :MC培养基、培养 6d菌丝体、 0 6mol/LKCl稳定剂、0 5 %溶壁酶和 2 %Novo2 34作用 3h。     

糙皮侧耳原生质体制备与再生条件

原生质体制备是通过体杂交或基因转导进行种质改良的基础。探讨了糙皮侧耳原生质体制备及再生条件。用ＭＹＧ培养菌丝，以甘露醇为稳渗剂，用１．５％溶壁酶Ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ进行酶解脱壁，在菌龄７天，酶液ｐＨＷＦＨＧ４．５，温度２８℃，酶解４ｈｒ的条件下原生质体产量最高（２０×１０＾６／ｍｌ，０．１ｇ湿菌丝），其再生率大于８％，菌丝培养前对接种物进行予切碎处理可进一步使产量提高约２倍，而再生率不并显著下降。     

灰树花原生质体制备与再生条件的研究

本文对灰树花 51 #菌株原生质体制备及再生条件进行了研究。结果表明 :液体摇瓶振荡培养 7天的菌丝 ,以 0 .6M的甘露醇作渗透压稳定剂 ,采用浓度为 2 %的真菌溶壁酶 ,在pH5 .5、30℃条件下酶解 5小时 ,原生质体制备率最高 ,可达到6 .6× 1 0 6 个 /ml,所得原生质体在两种不同的培养方式中均实现了再生。     

秀珍菇原生质体高效制备与再生研究

为建立秀珍菇原生质体的高效制备体系,以夏秀作为供试菌株,采用正交试验法研究影响秀珍菇原生质体制备和再生的条件,对菌龄等7个单因素、 4个复合因素条件和接种方式进行系统研究。结果显示,秀珍菇菌丝在改良液体PD培养基中摇瓶培养5 d,以0.6 mol·L~(-1)甘露醇为稳渗剂, 2.5%溶壁酶在30℃条件下水浴4 h,得到的原生质体浓度最大,为4.23×107个·mL~(-1)。在TB3再生培养基中采用单层混菌法接种原生质体,其再生率最大,为2.35%。     

猪苓原生质体制备与再生条件的研究

采用L16(4)正交设计,得出猪苓原生质体制备最佳条件是取菌龄7d的菌丝体,以2%溶壁酶,0.6mol·L-1甘露醇作为渗透压稳定荆,在33℃下酶解3h,原生质体数达到2.62×107个·mL-1.原生质体再生的最佳条件是取菌龄5d的菌丝体.以2%溶壁酶,0.6mol·L-1蔗糖作为渗透压稳定剂,在27℃的条件下,酶解3h.猪苓原生质体再生的最佳培养基为葡萄糖10g、麦芽糖5g、酵母粉4g、0.6mol·L-1甘露醇、琼脂5.5g,定容到1 000mL.再生率可达到0.65%.     

草菇原生质体制备与再生及诱变效应研究

研究了草菇原生质体制备与再生的最佳条件。试验结果表明,溶壁酶浓度2％,温度32℃,pH自然,以0．8mol／L甘露醇为渗透压稳定剂,用菌龄3d的菌丝酶解2h,可获得最佳原生质体再生效果。试验还分析了紫外线(UV)、^60Co-γ射线、硫酸二乙酯(DES)对草菇原生质体的诱变效应。     

厚环乳牛肝的原生质体分离与再生

探讨了外生菌根菌耳环乳牛肝（Ｓｕｉｌｌｕｓｇｒｅｖｉｌｌｅｉ）的原生质体制备及再生条件。用ＭＹＧ培养基培养菌丝７天、宋用１．５％Ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ，以０．６ｍｏｌ甘露醇为稳渗剂，在酶解液ｐＮ值５．５，温度３１℃，酶解４ｈｒ的条件下，每０．１ｇ湿菌丝的原生质体产量这６×１０￣６／ｍｌ。用ＳＯ培养基培养菌丝能提高原生质体产量，但再生率下降。综合产量和再生率考虑以ＭＹＧ培养菌丝效果较好。     

血红铆钉菇原生质体制备条件优化的研究

采用单因素法与正交试验法对血红铆钉菇原生质体制备的条件进行初步优化,筛选出其原生质体制备的最佳条件组合为:菌龄3 d,酶解时间3 h,渗透压稳定剂0.6mol·L-1 KCI,混合酶的浓度比1.5%溶壁酶 0.5%蜗牛酶,酶解温度34℃.     

亚侧耳原生质体的制备与再生研究

主要探讨了亚侧耳原生质体制备和再生条件.结果表明,以0.6 mol·L-1.的NaCI配制成浓度为2%、pH值6.5的溶壁酶溶液,32℃恒温水浴酶解菌龄8 d的亚侧耳菌丝体3 h,获得原生质体的产量最高.0.6 mol·L-1的蔗糖作为再生培养基中的渗透压稳定剂时,再生率最高为6.0×10-2.