枯草芽孢杆菌WHNB 02植酸酶的酶学性质研究

从118份样品中分离到1株产植酸酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WHNB 02),其发酵液经乙醇沉淀、硫酸铵分级沉淀及Sephadex G-100柱层析等步骤后分离纯化了该酶,纯化倍数约为31.5倍,回收率为13.0%.该酶为单体酶,SDS-PAGE测得的分子量约为43 KD,以植酸钠为底物的Km值为0.5 mmol/L,酶反应的最适温度为60℃,80℃作用10 min酶活保存61%,最适pH为7.0,在pH 6.0～10.0范围内稳定,酶活性及稳定性都需Ca2+存在.ED-TA,Mn2+,Ba2+(5 mmol/L)对酶活具有很大的抑制作用.     

枯草芽孢杆菌植酸酶的研究进展

 枯草芽孢杆菌通能过分泌植酸酶分解植酸，释放磷元素，促进动植物磷的吸收。主要综述了枯草芽孢杆菌植酸酶作用机理、酶学性质、分离纯化、分类地位和基因工程方面的研究进展，以便为该酶的深入研究和应用提供借鉴作用。     

枯草芽孢杆菌C-36纤维索酶的纯化及酶学性质

枯草芽孢杆菌C-36纤维素酶经硫酸铵、SephadexG-75、SephadexG-100分离纯化后,得到一个电泳纯的葡聚糖内切酶。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量约为35kD。最适反应温度和pH分别为65℃和pH6.8,Zn2+、Pb2+、Fe3+对酶有抑制作用,Ba2+、Fe2+对酶有激活作用,在50℃,pH6.8条件下,酶对CMC-Na的米氏常数Km为0.34g/L,最大反应速度Vmax为0.17mg/(min.mL)。     

枯草芽孢杆菌C-36纤维素酶的纯化及酶学性质

枯草芽孢杆菌C-36纤维素酶经硫酸铵、SephadexG-75、SephadexG-100分离纯化后,得到一个电泳纯的葡聚糖内切酶。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量约为35kD。最适反应温度和pH分别为65℃和pH6.8,Zn2 、Pb2 、Fe3 对酶有抑制作用,Ba2 、Fe2 对酶有激活作用,在50℃,pH6.8条件下,酶对CMC-Na的米氏常数Km为0.34g/L,最大反应速度Vmax为0.17mg/(min.mL)。     

枯草芽孢杆菌凝乳酶的酶学性质

对枯草芽孢杆菌凝乳酶的酶学性质进行了研究,结果表明:枯草芽孢杆菌凝乳酶作用的最适反应温度为55℃、最适pH值为5.0,在pH值为6.0时最稳定,在65℃保温60 min酶活基本丧失,Mn2+、Li+、Fe2+、Na+、K+、Mg2+、Ca2+对该凝乳酶有促进作用,Mg2+、Ca2+促进作用较为明显,而Cu2+对该酶有明显的抑制作用;酶修饰剂中β-巯基乙醇对凝乳酶活力的影响较小,EDTA可抑制该凝乳酶的活力;蛋白酶抑制剂σ-phenantroline可以明显抑制酶活性,证实该酶为金属蛋白酶类。在与商品酶对比中发现枯草芽孢杆菌凝乳酶与商品酶的酶学性质相近。     

枯草芽孢杆菌产酶规律及酶学性质研究

[目的]研究浙江建德分离得到的枯草芽孢杆菌淀粉酶的产酶规律和酶学性质。[方法]将分离得到的枯草芽孢杆菌发酵培养,研究其淀粉酶产酶击览律,并研究了温度、pH、金属离子对酶学性质的影响。利用双倒数曲线法获得该酶的米氏常数Km[结果]随着发酵时闻的延长,发酵液中淀粉酶的含量提高。在培养30h时,产酶量达到最高。该淀粉酶的最佳反应温度和pH分别为40℃和7．5。该酶具有一定的熟稳定性,对酸碱条件较敏感。Na^＋、K^＋、Ca^2＋、Mg^2＋对该酶具有激活作用,Pb^2＋、Hg^2＋对该酶具有显著的抑制作用,Cu^2＋的影响不显著。该淀粉酶的米氏常数K为2．31×10^-3mol/L。[结论]该研究对该菌株淀粉酶的开发及工业应用具有较强的指导意义。     

重组枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的纯化和性质研究

研究嗜热枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组酶的纯化和性质。该基因序列全长723bp,编码240个氨基酸。根据基因同源性分析,该壳聚糖酶与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168的壳聚糖酶前体基因的同源性最高,为98%。粗酶液经Ni-IDA亲和层析得到电泳级纯酶,比活力高达1 051.8U/mg。经测定,该酶反应最适温度为45℃,最适pH为6.0,在40℃和pH 4.5～8.0下稳定。该酶为内切壳聚糖酶,能够高效降解壳聚糖,生成一系列的壳寡糖,在壳寡糖的制备生产方面具有广阔的应用前景。     

产植酸酶枯草芽孢杆菌ZX-29产芽孢条件的优化

试验研究了产植酸酶枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZX-29的芽孢产率及芽孢数量,采用单因素试验和正交试验对该菌产芽孢条件进行了优化。结果表明,该菌摇瓶发酵生产芽孢的最佳条件为:培养基成分:0.5%可溶性淀粉、2.0%蛋白胨、0.10%KH2PO4和0.05%MnSO4·H2O;培养条件:pH 8.0、种龄20 h、装瓶量30 mL(250 mL三角瓶)。在此优化条件下,发酵液中该菌株的芽孢数量达到6.4×109个/mL,芽孢产率达到97.61%。     

枯草芽孢杆菌P1果胶酯酶酶学性质研究

对枯草芽孢杆菌(Bacillus sp.)P1所产果胶酯酶的酶学性质进行了研究.结果表明,该酶反应的最适温度为55 ℃,热稳定性较强,55 ℃保温1 h后还有70%左右的相对酶活;适宜pH值范围为8.8～10.5,最适pH值为9.2;金属离子Ca2 ,Mg2 对其有较强的激活作用,Na 也有一定的激活作用.K 对其无明显的作用,Hg2 ,Ba2 ,Zn2 ,Fe3 ,Cu2 ,Al3 ,EDTA等对果胶酯酶有抑制作用.     

利用原生质体融合技术构建植酸酶、纤维素酶枯草芽孢杆菌工程菌的研究

以产植酸酶枯草芽孢杆菌(A5)复合诱变的再生突变株Z56和产纤维素酶枯草芽孢杆菌(B6)复合诱变的再生突变株X57为亲本,利用双亲灭活原生质体融合技术进行种内融合,构建可同时产植酸酶、纤维素酶的工程菌。结果表明,从构建的385个融合子中筛选到6株两种酶活性相对较高的工程菌,其中R4、R5的纤维素酶产量高于亲本,植酸酶产量也相对较高;粗酶液用90℃处理10min后,纤维素酶剩余酶活分别为对照的62%和58%,植酸酶剩余酶活分别为对照的73%和71%。     

2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究

对黑曲霉A3214及其诱变株N14所产植酸酶进行分离纯化并研究各种酶学性质,表明A3214植酸酶和N14植酸酶的最适pH均为2．5,最适温度均为50℃,60℃保温10min后酶活保留均在80％左右,用胃蛋白酶处理后酶活均保留80％左右,分子量均为47．4KD,等电点均在4．5到5．0之间,K^＋,Na^＋,Ca^2＋,Mg^2＋．Fe^2＋在高浓度时对A3214植酸酶和N14植酸酶都有抑制作用,而Zn^2＋,Cu^2＋,Mn^2＋却几乎没有抑制作用,A3214植酸酶对植酸钠的Km值为0．0005mol／L,N14植酸酶对植酸钠的Km值为0．0004mol／L,A3214植酸酶的比活为135777．5u／mg,N14植酸酶的比活为148447．5u／mg。     

在缺磷条件下诱导分泌植酸酶的研究

运用透析膜水培收集作物分泌性酶蛋白，进而运用抗体及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ技术，证明番茄和热带牧草ＣＩＡＴ６０６在缺磷条件下分泌植酸酶。活性测定结果表明，实验所用１０种作物在缺磷条件下分泌性植酸酶活性均比适磷对照增加，其中番茄和热带牧草ＣＩＡＴ６０６增加率较高，分别比对照增加１０．３和３．９倍。可以认为，分泌性植酸酶对促进某些作物有效利用土壤有机磷最多的形态——植酸态磷有重要生物学意义。     

枯草杆菌B1菌株对大白菜软腐病的生防作用

从80多个枯草杆菌(Bacillus subtilis Ch)拮抗菌株中选出3个菌株进行田间试验,结果B_1菌株的防病效果最好。根据1985～1987年的田间试验,B_1菌株的防病效果可达64％～76％,大白菜贮藏4个月后的防病效果达80％。温室和大田试验表明,浸种处理的大白菜在苗期有显著促进生长作用,收获期产量比对照提高14.9％。跟踪检测结果,B_1菌株可以在大白菜幼根上定殖,减少软腐细菌从根系侵入,厌氧处理后能延缓发病。     

芽孢杆菌纤溶酶的纯化及其生物活性研究

芽孢杆菌2^#（Bs-2）的发酵液经过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤层析、Q-Sepharose阴离子交换层析、电泳制备和电源洗脱。获得一种具有纤溶性的蛋白酶;该蛋白酶由3个亚基组成,分子量分别为23KD,SSKD,19KD,全酶分子量约为64KD;经纤维蛋白平板测定表明,该酶既具有纤溶酶作用,又具有激活纤溶酶原的作用。     

枯草杆菌溶血纤维蛋白酶发酵培养基配方的确定

采取有交互作用的正交试验设计了枯草杆菌HL986菌株溶血纤维蛋白酶发酵的培养基成分 ,用试管表面培养法和摇瓶培养法进行发酵 ,利用牛血纤维蛋白琼脂平皿法测溶血纤维蛋白酶的活性 ,分析确定的最佳培养基配方为 :进口酵母浸出粉OXOID2 % ,麦芽糖 0 .2 % ,NaH2 PO4·2H2 O 0 .7%。     

植酸酶基因工程菌的发酵研究

对植酸酶基因工程菌(E-22)发酵产植酸酶条件作了初步研究。研究结果表明,接种龄36 h,接种量10%,增菌时间72 h,发酵液pH 6.0,甲醇添加量1.5%,装液量10%,诱导表达120 h能很好的提高产酶,测得酶活164 416.7U/mL。发酵培养基中添加抗生素或表面活性剂对发酵产酶有一定的抑制作用。     

从土壤中分离的410株苏云金芽孢杆菌的鉴定

对从中国２０个省（区）采集的１５４２个土壤样品中分离的４１０株苏云金芽孢杆菌进行了血清学鉴定。结果表明，２１８株（５３．２％）属于已知３０个标准Ｈ－血清中的１５个Ｈ－血清型，即Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７、Ｈ２２和Ｈ２６。其余的１９２株中，除１７５株为无鞭毛或自凝菌株无法进行血清学鉴定外，１６株（３．９％）的Ｈ－抗原不与已知２７个标准Ｈ－抗     

植酸酶对蛋鸭磷生物学利用率的研究

目的研究植酸酶对蛋鸭磷生物学利用率的影响.方法选取200日龄产蛋鸭1000只,随机分为5个处理,每个处理4个重复,每个重复50只.处理AP 0.45%为对照组,有效磷水平为0.45 %;处理AP0.38%+Phy、AP0.32%+Phy、AP0.25%+Phy和 AP 0.18%+Phy有效磷水平依次为0.38 %、0.32 %、0.25 %、0.18 %,同时添加植酸酶500 FTU/kg.结果结果表明:日粮有效磷水平从0.45 %降低到0.25 %,同时添加500 FTU/kg植酸酶,不会影响蛋鸭的料蛋比和产蛋率(P>0.05);蛋鸭血清ALP活性、P含量及胫骨灰分和P含量与对照组相比差异不显著(P>0.05);对蛋鸭磷生物学利用进行综合评定,日粮中AP水平从0.45%降低到0.25%,同时添加500 FTU/kg植酸酶,能够提高P的利用率(P <0.05),并使蛋鸭粪尿P排泄量降低4.86%～19.24%(P<0.05),说明0.25%以上的日粮AP能够改善蛋白质和P、Fe的平衡,有利于环保.     

植酸酶和柠檬酸对肉鸡生产性能的影响

以正常营养水平饲粮为对照,研究了在低营养水平饲粮中添加植硬酶(0,300g／t)、柠橡酸(0,0．5％)对肉鸡生产性能和钙、磷利用率的影响。试验用225只1日龄黄羽肉鸡随机分为5个处理,每处理3个重复,每重复15只鸡进行6周试验。结果为饲粮营养水平降低6％可导致肉鸡日增重(ADG)和饲料利用率下降(P＜0．05);在低营养水平日粮中,添加300g／t植酸酶、0．5％柠橡酸的ADG和料肉比(F／C)与正常营养水平饲粮组差异不显著(P＞0．05);各处理组的血清Ca,P,AKP活性及胫管Ca,P差异不显著(P＞0．05);腿病发生率各处理组差异不显著(P＞0．05)。添加300g/t植酸酶、0．5％柠橡酸的处理组P排泄量显著低于对照组(P＜0．05)。植硬酶与柠橡硬合用能进一步提高生产性能和钙、磷利用率,能达到正常营养水平饲粮的效果。植酸酶与柠橡酸合用存在协同效应。