天花粉蛋白基因导入烟草获得植株的研究

天花粉蛋白基因导入烟草获得植株的研究ＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＣＳＧｅｎｅｉｎＴｏｂａｃｃｏ天花粉蛋白（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ，简称ＴＣＳ）是我国中草药天花粉的有效成分，主要应用于妊娠引产。最近在ＴＣＳ的医学研究...     

大麦核糖体失活蛋白基因与天花粉蛋白基因双价植物表达载体的构建

大麦核糖体失活蛋白(B-RIP)和天花粉蛋白(TCS)均具有广谱抗病毒作用,研究构建了分别由2×CaMV35S启动子调控的大麦核糖体失活基因(rip)和天花粉蛋白基因(tcs)双价植物表达载体pABTR,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ),适用于双子叶植物的遗传转化。并通过三亲本杂交法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,为通过农杆菌介导法将双价基因导入植物,培育理想的抗病毒转基因植物奠定基础。     

天花粉蛋白的纯化技术进展及其药理概况

天花粉蛋白是从葫芦科栝楼属植物栝楼的块根中提取出的一组有效蛋白,具有引产抗孕、免疫调节、抑制人艾滋病病毒（HIV）的复制和繁殖等功能。阐述了天花粉蛋白的生理功能及特性,并对现有的天花粉蛋白的分离纯化方法进行了综述。     

天花粉蛋白基因导入大豆的研究

为获得含有天花粉蛋白(TCS)的转基因大豆植株,提高大豆的抗病虫能力,进行了植物表达载体的构建及转入大豆的研究。首先构建植物表达载体p C-t Pro-TCS-GUS,将其转化E.coli DH5α,经SDS-PAGE结果表明:克隆得到的TCS基因可以在大肠杆菌中表达。通过根癌农杆菌介导法,将TCS基因导入大豆合丰35中,获得了19株T0代转基因大豆,转化率为1.033%。选取T0代种子种植在大田中共获得18株T1代转基因大豆,对获得的T0代和T1代转基因植株进行PCR和PCR-Southern检测,证实外源天花粉蛋白基因己经整合到大豆基因组中。     

天花粉蛋白对A549细胞增殖的影响

目的:观察天花粉蛋白对人肺腺癌细胞株A549生长增殖的影响。方法:应用MTT法检测天花粉蛋白对A549细胞生长增殖的影响。结果:经天花粉蛋白处理后A549细胞生长明显受抑,并呈一定的剂量时效依赖性。结论:天花粉蛋白在体外能抑制A549肺腺癌细胞的生长繁殖。     

天花粉蛋白对A549细胞增殖的影响

目的；观察天花粉蛋白对人肺腺癌细胞株A549生长增殖的影响。方法；应用MTT法检测天花粉蛋白对A549细胞生长增殖的影响。结果：经天花粉蛋白处理后A549细胞生长明显受抑，并呈一定的剂量时效依赖性。结论：天花粉蛋白在体外能抑制A549肺腺癌细胞的生长繁殖。     

天花粉蛋白基因的原核表达及其对病原菌抗性的研究

将天花粉蛋白基因克隆到大肠杆菌中进行表达,对原核表达产物的粗提取物进行抗百菌活性检测,发现天花粉蛋白对杨树烂皮病痛原菌、大豆疫病病原菌和大豆灰斑病病原菌均具有较强的抑制作用。     

中药天花粉蛋白防治乳牛胎衣不下及提高其受胎率的初步研究

中药天花粉蛋白是从葫芦科植物栝楼(Trichosanthes Kirilowii Maxim)的新鲜根中提取的一种植物蛋白。我们应用这种蛋白毒对乳牛产后胎衣不下进行了安全试验、预防试验和治疗试验。初步证实天花粉蛋白对乳牛是安全的;在预防乳牛产后胎衣不下方面,能使胎衣滞留明显减少(P<0.05);在治疗乳牛胎衣不下方面,观察到子宫内环境净化时间缩短1—3天,从而可提早正常发情,并提高了一次性的受胎率18.5%,对提高繁殖率起到了积极作用。在治疗过程中,从组织切片观察到天花粉蛋白能促使乳牛的胎盘绒毛变性坏死现象,其作用的时间比较缓慢。     

天花粉蛋白基因导入欧美杨108

为获得含有天花粉蛋白（ TCS）的转基因欧美杨108植株,进行了植物表达载体的构建以及导入欧美杨108的研究。将北京大学惠赠的含有TCS启动子及结构基因的质粒pT1-3经SacⅠ和BamHⅠ双酶切后与同样双酶切的载体pCambia1301用T4 DNA连接酶相连,转化大肠杆菌,构建植物表达载体pC-tPro-TCS。将构建的植物表达载体转入农杆菌LBA4404,采用农杆菌介导法,将其导入欧美杨108中。结果表明,共得到18个潮霉素抗性愈伤和抗性芽,转化效率为4．3％。抗性体经PCR和PCR-Southern检测,初步确认TCS基因已经导入到欧美杨108中。     

瓜蒌种植技术与发展前景初探

中药天花粉是由药瓜加工而成的.药瓜又称瓜蒌,其根、籽(果仁)、皮(果皮)均可入药.果仁还有极大的休闲保健食品市场.其合成药有清凉解热、消咳、消肿、治疗糖尿病等多种疾病的功效,上海中医药物研究所目前正在研究提炼天花粉蛋白,治疗世界上日趋严重的爱滋病等.     

不同苦瓜品种MAP30基因的克隆及序列分析

采用PCR法从精选白皮苦瓜(JX)、穗农牌早优苦瓜(ZY)、碧翠苦瓜(BC)、银田牌长白苦瓜(YT)和银田牌蓝山大白苦瓜(LAN)5个品种中克隆到5个长度均为861 bp的MAP30基因JX-MAP30、ZY-MAP30、BC-MAP30(Genebank accession No:DQ643967)、YT-MAP30(No:DQ643968)和LAN-MAP03。序列分析表明,BC-MAP30和YT-MAP30与已报道的MAP30基因分别存在2个和3个碱基的不同,均编码263个氨基酸残基组成的成熟蛋白,与其他葫芦科植物的Ⅰ型核糖体失活蛋白类以及天花粉毒蛋白、多花白树毒蛋白、肥皂草毒素的同源性分别为68.90%、82.75%、71.25%和66.45%,其90~220位氨基酸序列较为保守。二级结构预测表明,BC-MAP30和YT-MAP30编码的成熟肽在N端均有一个延伸的6个β片层。     

转基因技术在抗植物真菌病害方面的研究策略

重点概述酶基因、抑制蛋白基因、致病相关蛋白基因、降解毒素基因和无致病力基因的抗真菌植物病害中的研究及应用。     

新型畜禽免疫增强剂天花粉多糖的制备工艺优化

采用响应面试验优化超声波辅助水浴法提取天花粉多糖的制备工艺,并考察天花粉多糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响,为新型畜禽免疫增强剂天花粉多糖的开发利用奠定理论基础。提取试验中以超声提取时间、提取温度、液料比为自变量,天花粉多糖得率为响应值,做三因素三水平响应面回归分析,然后分析各因素的显著性和彼此的交互作用,优化得出天花粉多糖超声波辅助水浴法提取的最佳工艺是:超声时间30 min、提取温度60℃、液料比30 mL/g;该条件下多糖的得率为3.29%,与理论预测值无显著差异。对天花粉多糖进行免疫学方面的试验研究,结果表明,天花粉多糖能显著提高肉仔鸡的脾脏指数,从而提高肉仔鸡的免疫机能。     

棉铃虫α-微管蛋白基因的克隆、序列分析及表达模式检测

【目的】克隆及序列分析棉铃虫（Helicoverpa armigera）α-微管蛋白基因的cDNA序列,并检测棉铃虫α、β两种微管蛋白基因的表达情况。【方法】以棉铃虫3龄幼虫为试验材料,采用RT-PCR及RACE技术克隆棉铃虫α-微管蛋白基因（HeTubA）,采用荧光定量PCR（QRT-PCR）技术分析棉铃虫α、β-微管蛋白基因在不同生长发育阶段及成虫器官中的表达模式。【结果】克隆得到棉铃虫α-微管蛋白基因（GenBank登录号为JQ069957）。序列分析表明,HeTubA开放阅读框1 353 bp,编码450个氨基酸组成的多肽,氨基酸序列包含多个α-微管蛋白保守区。与其它一些昆虫的一致性分析表明,HeTubA与八字地老虎（Xestia c-nigrum）、柑橘凤蝶（Papilio xuthus）及家蚕（Bombyx mori）的α-微管蛋白氨基酸序列同源性最高,α-微管蛋白基因在长期进化中非常保守。荧光定量PCR表明,棉铃虫α、β-微管蛋白基因不具有生长发育阶段及成虫器官特异性,且二者均在复眼表达高,腹部表达低;HeTubA在末龄幼虫期和蛹期高水平表达,HeTubB在末龄幼虫期和成虫期高水平表达。【结论】成功克隆了棉铃虫α-微管蛋白基因,对2种微管蛋白基因的表达模式进行了检测,进一步进行了蛋白质3D结构的构建,可用于深入研究2种微管蛋白基因的功能及开发新型杀虫剂。     

不同栝楼品种各药用部位营养成分含量比较

以山东道地药材栝楼为研究对象,分别对仁栝楼和糖栝楼两个主要地产品种各部位可溶性总糖、总蛋白、无机元素、氨基酸、粗纤维及粗脂肪含量进行分析研究,同时对雌、雄栝楼天花粉中的对应成分进行研究。结果表明:(1)不同品种栝楼中的总糖含量不一致,总糖在仁栝楼果实中主要存在于种籽,而糖栝楼则主要存在于栝楼皮中。雌、雄栝楼天花粉中的糖含量分别达到286.39 mg/g和330.42 mg/g。(2)两个品种栝楼的Ca、Mg含量均较高,但各元素分布不一致,其中Ca主要分布在栝楼皮中,含量达到0.25%～0.28%,而其它无机元素则基本以籽中的含量较高;雌栝楼天花粉中的无机元素含量明显高于雄栝楼。(3)两个品种栝楼含有较高的氨基酸、粗纤维、粗脂肪,其中氨基酸在栝楼皮中含量较高,而粗纤维和粗脂肪在栝楼籽中含量较高。     

N-酰基高丝氨酸内酯降解酶的抗体制备与鉴定

根据已报道的aiiA基因及attM基因序列设计引物,分别从蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)和土壤根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)中PCR扩增获得aiiA基因及attM基因,构建蛋白表达载体pET30a-aiiA及pET30a-attM,在大肠杆菌BL21中诱导表达.利用AiiA解酯酶蛋白和AttM解酯酶蛋白在SDS-PAGE中对应的产物直接成兔免疫,提取血清进行ELISA和Western Blot检测.SDS-PAGE检测发现aiiA基因及attM基因能高效表达AiiA解酯酶蛋白和AttM解酯酶蛋白.ELISA检测结果表明,抗体含量高,稀释106倍依然为有效值.Western Blot 检测结果表明抗体可特异性结合目的蛋白.应用检测结果表明抗体血清能检测到N-酰基高丝氨酸内酯降解酶相关基因的产物,在验证群体感应和群体淬灭等方面将具有应用价值.     

植物细胞周期相关基因的研究进展

细胞分裂是植物生长和发育的基础，植物器官的形态和位置均取决于细胞分裂和扩展。本文就目前已克隆的细胞蛋白周期基因、依赖周期蛋白激酶基因及其它相关的细胞周期基因；周期蛋白基因及依赖周期蛋白激酶基因的结构特征以及其功能作一综述。     

烟草青枯菌FQY_4宿主特异性候选基因分析

为青枯菌与烟草的相互作用研究提供宿主特性候选基因,在烟草青枯菌FQY_4基因组测序的基础上,采用基因组及同源基因比较,分析青枯菌株系GMI1000、Po82、CFBP2957、CMR15、PSI07和FQY_4的核心基因及FQY_4宿主特异性候选基因。结果表明:FQY_4基因组中有632个宿主特异性候选基因,其中染色体、巨大质粒分别有365个和267个,包括跨膜蛋白、信号蛋白和细胞壁水解相关的基因,移动元件蛋白和许多未知功能的蛋白基因,以及宿主特异性候选三型分泌系统的42个效应蛋白因子(T3Es)。     

小麦及其近缘物种中类燕麦储藏蛋白Avenin-like基因的克隆综述

介绍了小麦的品质及品质的形成、小麦的储藏蛋白及储藏蛋白的分类.综述了近年来关于类燕麦储藏蛋白Avenin-like基因发现、Avenin-like基因的胚乳特异性表达的时空表达模式以及Avenin-like基因的启动子的作用元件和时空表达特异性研究.     

犬瘟热病毒小熊猫株核蛋白和融合蛋白基因克隆及序列分析

根据GenBank中报道的CDV核苷酸序列,设计合成了2对特异性引物,对犬瘟热病毒小熊猫株(CDVLP)核蛋白(N)和融合蛋白(F)两种主要结构蛋白基因进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,CDVLP株N蛋白基因全长1571bp,预测编码523个氨基酸;F蛋白基因全长1989bp,预测编码662个氨基酸,F蛋白氨基酸序列中含有5个潜在的N-联糖基化位点。聚类分析提示,CDVLP株是一株与CDV强毒株亲源关系很近的毒株。用DNAstar软件对CDVLP株和Onderstepoort弱毒株N蛋白和F蛋白进行了疏水性及抗原表位预测分析。抗原表位差异提示CDVLP毒株N和F蛋白的免疫原性可能要优于Onderstepoort弱毒株。在分子水平上阐明了CDVLP株的N和F蛋白基因更适合作为构建基因疫苗和重组活载体疫苗的目的基因。