籼稻成熟胚愈伤组织诱导及不定芽分化

以不同籼稻品种的成熟胚为研究材料,通过对比实验,结果表明,采用DNB为诱导愈伤组织培养基,DMS与DNB培养基交替继代,籼稻愈伤组织诱导率高、质量较好;采用MSRc3(MS+casamino acids 500mg·L-1+gluttamine 300mg·L-1+proline 500mg·L-1+mannitol 36.4g·L-1+maltose 30g·L-1+TDZ 0.2mg·L-1+phytagel 5g·L-1pH 5.8)为分化培养基,愈伤组织不定芽分化率在90%以上,较对照MSR1提高300%～500%.     

籼稻成熟胚愈伤组织培养影响因素研究

以 7种籼稻恢复系、保持系为材料 ,研究了影响成熟胚愈伤组织诱导的相关因素。结果表明 ,适当的低、高温预处理可以明显提高出愈率 ;CC培养基是适宜于多数籼稻愈伤组织诱导的培养基 ;不同的材料要求的 2 ,4 -D水平不一致 ,但 2mg/L的 2 ,4 -D能满足多数材料的需要 ;添加一定的脱落酸 (ABA)可以改善愈伤组织质量 ;继代时间因材料而异 ,但多数以 1 2d为宜 ;适当浓度的脯氨酸 (Pro)、二甲基亚砜 (DMSO)、谷氨酰胺 (Gln)能显著的降低褐化率 ,硝酸银的作用不明显 ;通过培养基轮换、2 ,4 -D和ABA的浓度调节以及对愈伤组织干燥培养、高渗培养等逆境调节 ,可以在一定程度上控制愈伤组织的状态 ,保持良好的胚性     

籼稻Kra Dang Ngah成熟胚愈伤组织诱导及植株再生的研究

为了建立籼稻Kra Dang Ngah的再生体系,以其成熟胚作为试验材料,研究不同种类植物激素及其浓度配比对诱导愈伤率、愈伤组织形态学特征、分化及植株再生的影响。结果表明:2,4-D可诱导愈伤组织产生,但愈伤组织诱导率极低;2,4-D和其他植物激素配合使用显著提高了诱导率,在2 mg/L 2,4-D、1 mg/L NAA、1.0 mg/L 6-BA和0.5 mg/L KN的条件下可获得较高的愈伤组织诱导率,为56.3%。继代培养基中添加激素浓度为诱导培养基中的一半可获得较好的增生的胚性愈伤组织,形态学特征为淡黄色,比较致密、较硬、呈颗粒状结构,没有褐化出现,表现出很强的分化能力。再生培养中,MS培养基中添加0.5 mg/L NAA、1.0 mg/L 6-BA和2 mg/L KN可获得较高的分化率(达到75.5%)和再生率(33.3%),表明6-BA和Kn的配合使用显著提高了分化率。     

不同大麦品种成熟胚愈伤诱导与分化研究

为了筛选不受生长季节限制的大麦遗传转化受体,分析、比较了我国15个大麦品种成熟胚在1种诱导培养基和3种分化培养基上的愈伤诱导和分化率。结果表明,大麦品种间成熟胚愈伤诱导率差异非常显著,早熟3号的诱导率高达98.7%,而扬农啤2号和鄂大麦9号则低于10.0%。成熟胚在形成愈伤组织过程中,伴随胚发芽现象,但愈伤诱导与胚发芽之间没有相关性;品种间愈伤组织分化率也差异显著,早熟3号的分化率为43.3%,而其它品种的分化率均在10.0%以下;不同分化培养基的分化效率不同,在M1培养基上的平均分化率较高。     

重穗型恢复系蜀恢527成熟胚高频率植株再生及其基因转化的研究

以籼稻重穗型恢复系蜀恢527的成熟胚为外植体,研究了影响其愈伤组织诱导及植株再生频率的各种因素。结果表明。在基本培养基NMB中添加2．0mg／L的2,4-D有利于蜀恢527成熟胚愈伤组织的诱导和继代培养;MS＋6-BA2．0mg／L＋KT2．0mg／L＋NAA0．25mg／L的分化培养基有利于愈伤组织的分化;继代两次的愈伤组织分化率最高。利用本研究建立了适合蜀恢527成熟胚遗传转化的高效植株再生体系,在此基础上利用农杆菌介导法将稻瘟病抗性基因Pi-d2导入蜀恢527并获得了经PCR检测为阳性的转化植株。     

不同小麦品种成熟胚愈伤组织诱导及分化的研究

以长江流域及华中地区推广的24个小麦品种为材料，分析、比较其成熟胚在3种诱导培养基和1种分化培养基上的愈伤诱导和分化频率。结果表明：不同诱导培养基在愈伤诱导率上存在显著差异，添加ABA的MB5培养基诱导效果最佳；不同小麦品种对培养条件的反应不同，华9943、华9914等4个品种在3种培养基上的诱导频率相同，而其余品种在3种培养基上的愈伤诱导率差异极显著。在分化绿点和成苗率上，品种间差异十分明显，农大146、苏麦6号、扬麦158、华麦12号和华麦8号的再生力强。因此，在小麦成熟胚培养中，筛选优良的基因型培养基组合是必要的。     

小麦成熟胚高频再生基因型筛选及再生体系研究

以目前生产上主栽或主推的、具有优良农艺性状的18个黄淮麦区冬小麦品种(系)和2个西北春麦区春小麦品种为材料,对它们成熟胚再生能力进行比较,从中筛选出再生频率高的基因型,并探讨不同接种方法、麦草畏质量浓度、细胞分裂素和干燥处理等对小麦成熟胚愈伤组织诱导和分化频率的影响。结果表明,小麦成熟胚愈伤组织诱导率普遍较高,为66.7%～100.0%,而分化率普遍较低,为3.6%～35.8%。基因型间差异显著,其中愈伤组织分化率较高的基因型有泛麦8号、周麦27和邢麦6号,绿苗分化率超过30%;采用胚十字形切割法接种小麦成熟胚愈伤组织分化率较高,达到54.5%～73.3%;诱导培养基中麦草畏的诱导效果显著优于2,4-D。在麦草畏质量浓度为2～4mg/L时有利于愈伤组织诱导和分化;成熟胚愈伤组织转入不含激素或含有2mg/L 6-BA或KT的分化培养基中时,分化率分别达到38.5%,45.8%和37.0%,较其他细胞分裂素和质量浓度处理分化率高,而愈伤组织分化前干燥处理6h和未干燥处理的差异不显著,干燥12h分化率明显降低。     

小麦胚愈伤组织的诱导和植株再生

对3个小麦品种的成熟胚及幼胚进行培养，研究不同基因型、培养基对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明，不同培养基对小麦愈伤组织诱导有一定影响；不同基因型的小麦愈伤组织诱导、分化及生根的能力有一定差别。陕280愈伤组织诱导率及分化率最高。同一品种不同外植体经诱导后愈伤组织产生的能力有所不同，同一品种愈伤组织的诱导率幼胚比成熟胚愈伤组织的高。     

籼稻成熟胚遗传转化体系影响因素的优化

以5个籼稻品种为研究材料,对影响籼稻成熟胚愈伤组织培养、愈伤组织与根癌农杆菌共培养的部分因素进行了研究。结果表明:适当提高硝态氮和铵态氮比例、1.0~2.5mg/L的2,4-D浓度有利于籼稻品种成熟胚愈伤组织的诱导;愈伤组织继代12d左右共培养效果较好;愈伤组织与农杆菌液共培养3d能获得50%以上的转化率。     

胚乳对籼稻成熟胚愈伤组织诱导及分化的影响

以籼稻品种成熟种子为材料，研究了胚乳对成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明，种子胚乳量愈少，始愈期愈早；形成的愈伤组织生长速率以带全胚乳的种子为最快；愈伤组织分化率则以带半胚乳的种子最高。愈伤组织继代培养次数显著影响绿苗分化频率，以继代培养1次（约12－14d）的愈伤组织分化率最高。     

结缕草成熟胚愈伤组织的诱导及再生体系的研究

以结缕草的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。结果表明在MS+2,4-D(2.0mg/L)+VB1(4mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为43.20%,但愈伤组织质量较差。将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA,ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤。筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(2.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)中,分化率45.6%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体结缕草组织培养再生体系。     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生体系的研究

以小麦的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生.研究结果表明,在MS+2,4-D(3.0 mg/L)+VB1(1.0 mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为72.3%,但愈伤组织质量较差;在低浓度2,4-D和添加了ABA的继代培养基中,愈伤组织质量明显改善,胚性愈伤组织增加.筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(4.0 mg/L)+NAA(0.3 mg/L)中,分化率达73.18%.该研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体的小麦组织培养再生体系.     

小麦成熟胚愈伤组织诱导条件优化的研究

[目的]筛选小麦成熟胚愈伤组织诱导的最适培养条件。[方法]采用正交设计试验,以2个小麦品种扬辐2号和皖麦41的成熟胚为外植体,研究不同基本培养基和激素配比对愈伤组织诱导的影响。[结果]在MS、1/2 MS、N63种基本培养基中,1/2 MS对小麦成熟胚愈伤组织诱导效果最好。IAA对扬辐2号成熟胚愈伤组织诱导有一定的影响,KT对皖麦41成熟胚愈伤组织诱导作用显著。1/2 MS+2,4-D4.0 mg/L,愈伤组织质量最好。不同小麦品种成熟胚离体培养力存在着差异,皖麦41优于扬辐2号。[结论]该研究为小麦成熟胚离体培养提供了参考。     

小麦成熟胚再生体系影响因素的研究

[目的]研究小麦离体培养的影响因素,探索小麦成熟胚愈伤组织诱导、继代、分化和植株再生的有效方法,建立一套成熟的植株再生体系,为进一步转基因研究奠定基础。[方法]采用河南的5个不同小麦品种,经小麦种子消毒,无菌取胚,然后接入诱导培养基进行愈伤组织诱导,愈伤组织再经继代培养、分化培养以至小麦植株再生。通过对它们浸种时间和成熟胚离体培养过程的观察,研究了不同预处理时间和植物激素,如2,4-D、ABA、KT、IAA和NAA,对小麦成熟胚愈伤组织在诱导、继代、分化和植株再生方面的一些影响。[结果]15h的浸种时间效果好;4.0mg/L2,4-D有利于愈伤组织形成;在继代培养基中添加0.3mg/LABA有利于小麦致密愈伤组织的诱导及再生能力的保持;KT和6-BA对提高芽的分化有显著作用;附加浓度1.5mg/LNAA和0.2mg/LIAA的1/2MS培养基可有效促进生根。[结论]浸种时间、基因型对小麦愈伤组织的继代、分化和再生有很大的影响,添加一定的外源激素有利于提高其植株的再生频率。     

黑麦草成熟胚离体培养技术研究

以黑麦草成熟胚为外植体材料,对外植体的灭菌、愈伤组织的诱导、继代及植株再生及其过程中部分影响因素进行了研究。结果表明:用75%酒精对外植体处理60 s后,用75%NaClO原溶液(有效氯为7%~10%)灭菌25~30 min,灭菌效果最佳。基本培养基类型、植物生长调节剂对愈伤组织诱导均有影响,采用MS为基本培养基,添加2,4-D浓度为2.0~3.0 mg/L,6-BA浓度为0.1 mg/L时最高诱导率达86.67%。     

宁夏水稻成熟胚离体再生体系的建立

以34个宁夏粳稻品种的成熟胚为材料,N6和MS为基本培养基,研究了基因型、激素、分化,继代对宁夏粳稻成熟胚培养特性的影响.结果表明,基因型对宁夏粳稻成熟胚培养的影响较大,参试材料中优育28的培养特性最好;诱导愈伤组织中2,4-D质量浓度以2 mg/L较好;分化培养中参试品种均表现为KT 2mg/L+NAA 1 mg/L+IAA 0.5 mg/L处理的分化效果最好;成熟胚诱导的愈伤组织继代1～2次对分化没有显著的影响,继代3次以上,其分化能力明显减弱.通过本研究,初步建立了宁夏水稻成熟胚高频再生体系.     

白皮松成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导研究

[目的]建立白皮松体细胞胚胎发生快速繁殖体系,诱导出胚性愈伤组织。[方法]以白皮松成熟合子胚为外植体,以DCR作为基本培养基,研究不同浓度激素对外植体发育和胚性愈伤组织得率的影响。同时在不同激素浓度下对培养4周的外植体外形以及胚性愈伤组织进行了观察与分析。[结果]培养基中加入2,4-D可以使得外植体生长减慢,并出现愈伤组织,6-BA则使外植体的子叶变长,膨大并玻璃化。当2,4-D浓度为8mg/L、6-BA浓度为2mg/L时,胚性愈伤组织的诱导效果较好,诱导率平均为40.625%,该愈伤组织为白色半透明状,细胞小而细胞质浓,说明高浓度2,4-D和低浓度6-BA有利于白皮松成熟胚的胚性愈伤组织的获得。[结论]合适的激素种类和浓度是诱导白皮松成熟胚产生胚性愈伤组织的关键因素。     

不同培养基及激素配比对小麦成熟胚离体培养的影响

[目的]建立适于优良小麦品种遗传转化的高效组织培养再生体系。[方法]以小麦品种豫麦18和豫麦70成熟胚为外植体,探讨了2种培养基和4种激素配比对小麦成熟胚离体培养的影响。[结果]L3培养基的平均愈伤组织诱导率和分化率都明显高于MS培养基,供试2个品种平均出愈率达91.0%以上,平均分化率达46.4%。不同激素及其配比均可诱导小麦成熟胚愈伤组织分化,但不同处理分化率差别很大(10.5%~50.0%);以L3为分化培养基,同时添加2,4-D 0.1mg/L,6-BA 1.5 mg/L的激素配比更有利于愈伤组织的分化,平均分化率达到50.0%。[结论]MS、L3两种基本培养基对小麦成熟胚愈伤组织诱导率均比较高,且差别不大。不同激素配比对小麦成熟胚愈伤组织分化率影响很大。