兽药残留检测中试剂盒的验证方法研究

试剂盒是新研发出的一代药物残留检测产品,主要是应用酶联免疫技术。相对于传统的仪器分析技术,试剂盒检测方法具有简便、快速、灵敏度高以及准确性高等特点,能够最大限度的减少工作强度和操作误差。但是在使用试剂盒进行检测时,其结果往往和试剂盒已标示出的各项技术指标都存在较大差距,导致出现假阳性的概率变大,因此注重兽药残留检测中试剂盒的验证方法,确定试剂盒指标评判的具体方法和内容,会大幅提高检测结果判定的可靠性。     

定量测定蜂蜜中呋喃唑酮代谢物残留的ELISA检测试剂盒的可靠性

研究定量测定蜂蜜中呋喃唑酮代谢物残留的酶联免疫(ELISA)检测试剂盒的准确性。通过将ELISA样本前处理进行优化,计算添加平均值、回收率及变异系数,并对国标方法和ELISA检测试剂盒测定结果进行t检验。当选择0.1mol/L Tris-HCl为样品稀释液、样本稀释倍数为1、试剂盒灵敏度为0.03μg/kg时,呋喃唑酮代谢物在各蜂蜜中添加0.1～0.3μg/kg的回收率为83%～97%,变异系数均低于5%,试剂盒检测限为0.03μg/kg,ELISA检测试剂盒与国标法测定同一份蜂蜜的t0.05检验结果差异不显著。呋喃唑酮代谢物ELISA检测试剂盒经优化与仪器的符合率为100%,ELISA检测试剂盒测定蜂蜜中呋喃唑酮代谢物存在极高的准确度和精密度。     

首个核果类果树病毒RT-PCR检测试剂盒的研制与应用

以带毒(阳性)和非带毒(阴性)的GF305为试材,利用已建立的总RNA提取方法提取试材中的总RNA,根据3种病毒(ACLSV、PNRSV和PDV)外壳蛋白基因序列设计寡核苷酸引物,采用RT-PCR技术研制3种病毒检测试剂盒,以达到最优化检测.并应用该试剂盒对果园中存在的病毒进行检测.结果显示,该试剂盒检测病毒速度快(6～7h)、灵敏度高(较ELISA法高8 000倍)、专一性强、检测成本较低,是一种有推广价值的核果类果树病毒检测方法.该试剂盒已申报了国家发明专利,初步审查合格.     

6种酶抑制-比色法快速检测试剂盒对4种有机磷农药的敏感性

为商品化酶抑制-比色法快速检测试剂盒的选择提供依据,采用6种商品化酶抑制-比色法快速检测试剂盒对甲胺磷、毒死蜱 、甲基对硫磷、三唑磷进行5个浓度水平的检测比对试验,比较各试剂盒对4种农药的灵敏度。结果表明：6种试剂盒对4种农药的灵敏度均不同,测试时取用3mL的提取液和取用2.5mL的提取液根据农药的不同和试剂盒的不同存在一定差异。6种试剂盒测定甲胺磷、毒死蜱、甲基对硫磷、和三唑磷的半抑制浓度均大于3mg/kg,大于国家限量标准的规定（甲胺磷0.1mg/kg、毒死蜱1mg/kg、甲基对硫磷0.02mg/kg、三唑磷0.1mg/kg）,建议在实际的检测工作中对抑制率≥10%的样品进行复检,同时上色谱质谱进行定性定量。     

以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒

【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP抗体的ELISA方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg·mL-1;检测199份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3ABC ELISA比较,符合率为97.48%,显示极好的一致性。【结论】该合成肽ELISA试剂盒可以用以检测NSP抗体,从而鉴别FMD的自然感染与疫苗免疫,试剂盒特异性强,重复性好、稳定性高,操作简便。     

以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒#br#

【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP 抗体的 ELISA 方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA 试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg•mL-1; 检测199 份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3ABC ELISA比较,符合率为97.48%,显示极好的一致性。【结论】该合成肽ELISA试剂盒可以用以检测NSP抗体,从而鉴别FMD的自然感染与疫苗免疫,试剂盒特异性强,重复性好、稳定性高,操作简便。     

自制和进口试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体的比较研究

用自制试剂盒和美国Affinitech-IB抗体检测试剂盒检测108份鸡血清样品,共检出阳性血清69份,其中有5份血清用自制试剂盒检测为阳性血清,而用美国Affinitech-IB抗体检测试剂盒检测为阴性。这69份阳性血清经其他试验证实为阳性。与Affinitech-IB试剂盒相比,自制试剂盒的敏感性和特异性分别为100%、88.6%。结果表明:自制试剂盒是用来检测和监测鸡血清中鸡传染性支气管炎抗体水平的一个具有敏感、特异、简便等特点的良好工具。     

奶水牛新型可视孕检技术的应用

为了缩短奶水牛的产犊间隔,提高繁殖效率和养殖效益,利用酶联免疫反应原理采用一种快速可视孕检试剂盒对配种后28 d以上的试验母牛进行检测。对429例已配种母牛进行检测,其中阴性(空怀)265例,阳性(怀孕)164例,验证检查阴性265例,阳性160例,试剂盒检测的阴性准确率为100%,阳性准确率为97.56%,可见该试剂盒可用于水牛的早期孕检。     

新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒的应用

[目的]研发一种成熟稳定的新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒.[方法]在新孢子虫病rELISA检测方法建立的基础上,组装检测新孢子虫病的rELISA抗体检测试剂盒,对试剂盒的敏感性、保存期、特异性和重复性进行评价,并与两种商品化试剂盒进行对比试验,应用自制的试剂盒检测来自新疆各地州新孢子虫疑似病例区血清,共1329份.[结果]成功组装了新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒,且该试剂盒敏感性高、保存期长、特异性强、重复性较好.与两种进口商品化诊断试剂盒比较,其符合率均在90;以上.在1 329样品血清中157份是阳性,其平均阳性率为11.8;.[结论]该试剂盒可以取代商品化试剂盒进行新孢子虫病诊断,为新孢子虫病的防治工作提供技术和产品支撑.     

ELISA方法检测动物源性食品中卡那霉素研究

为评价卡那霉素检测试剂盒的现场应用效果,结合仪器检测方法,对现场采集的样品同时进行HPLC-MS检测和ELISA检测,然后进行统计分析。结果表明,卡那霉素HPLC-MS检测和ELISA检测动物组织和肝脏样品816份,ELISA检测试剂盒检出率较高,与仪器的符合率达98.99%,卡那霉素ELISA检测试剂盒敏感性好、时间短,不存在假阴性。卡那霉素ELISA检测试剂盒可以用于动物源性食品的检测工作,适用于现场、大范围的快速筛选。     

兽用快速诊断技术应用展望

试剂盒作为一种特异、敏感、快速而且操作简便的检测手段在疾病诊断中占有非常重要的地位。其在人体外检测试剂市场所占的份额已达到35%,仅次于临床化学制剂所占市场份额。但在国内兽用体外检测市场上,试剂盒所占市场份额远未达到这一数字。故兽用试剂盒在我国仍有及其巨大的发展空间。基因芯片技术作为一项新技术在检测通量以及灵敏性、特异性上有着无可比拟的优势。其在畜禽疾病检测中的潜力同样很大。与此同时,由于我国兽医人才相对匮乏,正因如此广大农牧户对畜禽疾病的快速检测需求非常之高,这使得胶体金免疫层析快速诊断技术的大规模开发利用具备了良好的市场前景。     

酶抑制-比色法农残速测试剂盒检测蔬菜农药残留的结果分析

为了解商品化酶抑制-比色法试剂盒的检测效果,将6个品牌的试剂盒检测蔬菜中农药残留的结果和用色谱、质谱检测其中50种有机磷及10种氨基甲酸酯类农药的结果进行比对分析,根据不同的判定阈值对试剂盒检测结果进行评价,得出各试剂盒的假阳性率、假阴性率和符合率,由此对商品化酶抑制-比色法试剂盒的检测效果进行比对分析.结果 表明:在...     

2种猪繁殖与呼吸综合征抗体ELISA检测试剂盒的比较分析

选取2种猪繁殖与呼吸综合征抗体ELISA检测试剂盒进行符合率、敏感性(D_se)、特异性(D_sp)、批内重复性(Re)比较分析，以期了解国产试剂盒与进口试剂盒在试验结果上的差异性。结果显示：通过对45份临床样品进行检测发现金诺试剂盒检测敏感性(D_se)为84%,检测特异性(D_sp)为100%,2种试剂盒总符合率为91.11%。该研究结果为实验室检测猪繁殖与呼吸综合征抗体提供了试剂盒选用参考。     

苹果中克百威残留快检测定及方法评估

【目的】提高苹果中克百威残留快速检测方法的灵敏度与准确度,确保苹果产品中克百威农药残留抽查的高效和准确性。【方法】以新疆阿克苏当地6个点位市售苹果为检测样品,采用行业标准NY/T 761-2008第3部分的液相色谱法为参比方法,分别选择3家快检试剂盒,根据《食品快速检测方法评价技术规范》对其快检适应性进行评估。【结果】利用参比方法和快检试剂盒均未从苹果样品中检出克百威残留。3家快检试剂盒可在0.01 mg/kg以上呈阳性显色反应,低于GB/T 2763-2019《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中的限量要求;试剂盒灵敏度均为100%、特异性均为50%、假阴性率均为0、假阳性率均为50%、相对准确度均为90%。【结论】所测试剂盒适用于苹果中克百威残留量的快速筛查。     

自制间接法猪瘟抗体ELISA检测试剂盒性能研究

为了评价实验室自行研发的间接法猪瘟抗体ELISA检测试剂盒的性能,我们用调试后的ELISA试剂盒和两个进口试剂盒(法国LSI公司及美国IDEXX公司产品),分别对184份临床样品进行了检测。结果显示:实验室初步建立的检测体系与LSI公司试剂盒符合率为83.6%、特异性100%、敏感性80.6%,与IDEXX公司试剂盒符合率为76.7%、特异性62%、敏感性93%。     

市售农药残留快速检测酶试剂盒对有机磷和氨基甲酸酯类农药灵敏度的测定

了解农药残留快速检测酶试剂盒对不同农药的灵敏度。通过4种市售酶试剂盒对克百威等5种农药分别进行5个浓度的测定,来比较试剂盒的优劣。4种酶试剂盒不是对所有的有机磷农药和氨基甲酸酯类农药都敏感; 4种试剂盒优劣为:试剂盒A试剂盒C试剂盒B试剂盒D。在日常检测中需要对所购买的快检产品进行一定的实验验证,选取适合的产品。在条件允许的情况下对于抑制率超过50%的样品不仅需要复测,还需要采用色谱、质谱定性、定量等方法进行检测。     

化学发光微粒子免疫法检测虾肉中磺胺类药物的残留

[目的]通过对比化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)和高效液相色谱-质谱法对虾肉中磺胺类药物检测结果的差异,验证公司自研的磺胺类药物化学发光免疫试剂盒的检测效果。[方法]以虾肉为检测原料,采用直接竞争CMIA法对试剂盒进行灵敏度、特异性、精密度、准确度试验。[结果]试剂盒检测灵敏度为1.04μg/kg、加样回收率为95.25%~104.50%,变异系数(CV)均小于15%;试剂盒检测结果与仪器分析的阴、阳性结果接近。[结论]该方法检测结果稳定、可靠,达到国家相关标准,表明该款试剂盒可满足动物组织中磺胺类药物的快速检测需求。     

山羊接种小反刍兽疫疫苗后不同检测试剂的检测效果田间试验

为了切实掌握山羊小反刍兽疫疫苗免疫状况,评估免疫效果。通过用不同厂家的试剂盒来评估小反刍兽疫疫苗的大田效果,其中一种是由青岛立见诊断技术发展中心生产的小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测抗体试剂盒,另一种为法国ID-VET生产的ID Screen誖PPR Competition小反刍兽疫抗体检测试剂盒。结果表明,其检测结果一致,只是法国ID-VET生产的试剂盒检测的OD值较青岛立见的高0.07。说明国产试剂盒与进口试剂盒效果一致,但青岛立见的试剂盒经济实惠许多。     

酶抑制-比色法农残速测试剂盒检测效果及贮存条件的研究

为探讨商品化农残速测试剂盒的贮存条件及检测效果,将某一品牌试剂盒在28℃室温下存放30 d,用农残快速检测仪测定其3 min的吸光度;同时用6种商品化酶抑制-比色法农残速测试剂盒测定蔬菜中的农药残留,与使用气相色谱-FPD、液相色谱-质谱联用仪定量检测蔬菜中甲胺磷等50种有机磷及涕灭威等10种氨基甲酸酯类农药残留的测定结果相比,得出各试剂盒检测样品的假阳性率、假阴性率及符合率.结果 表明:未配制的试剂在28℃室温下存放30 d及配置后试剂在12℃冰箱中存放15d不影响使用;6种试剂盒检测样品均有一定的假阳性、假阴性样品产生,与色谱、质谱检测结果相比符合率有所差异,D品牌试剂盒检测结果与色谱、质谱检测结果符合率最高.综合而言,酶抑制-比色法农残速测试剂盒作为现阶段的主流检测手段,在检测结果的准确性方面存在较大偏差,不同品牌试剂盒检测效果存在一定差异,这不仅取决于试剂盒的质量,还受制于样品的选取,广大生产者、销售者和使用者应引起重视.     

农业部948项目“新型农产品农药残留快速检测技术的引进”2004年1月通过验收

该项目由我校资源与环境学院李季教授主持,通过引进国外技术并经改进与创新,构建了农药残留快速检测技术研发平台,并自主制备了对硫磷、甲基对硫磷、克百威、甲萘威和2 ,4 -滴5种农药的抗体,开发出了对硫磷、甲基对硫磷和克百威的酶联免疫检测试剂盒以及克百威的检测试纸条,技术均达到国内领先水平。课题组已具备了小规模生产试剂盒和试纸条的能力,并成功地小批量推向了市场。此农药残留酶联免疫检测试剂盒及试纸条在我国食品安全检测和环境监测中具有良好的应用前景农业部948项目“新型农产品农药残留快速检测技术的引进”2004年1月通过验…