盐酸沃尼妙林预混剂在猪组织中残留消除规律研究

建立了猪肝脏、肾脏、肌肉和脂肪中盐酸沃尼妙林的高效液相色谱检测方法并研究盐酸沃尼妙林预混剂在猪体内各组织中的残留消除规律。对24头健康猪以200mg/kg的剂量混饲给药21d。在停药后0、6、12、18、24、36h分别宰杀4头猪,采集各组织进行药物残留测定。方法的检测限为0.025～0.062 5μg/g,定量限为0.05～0.1μg/g,肝脏的平均回收率为75.5%～76.4%,变异系数为2.3%～3.8%;肾脏的平均回收率为75.8%～78.5%,变异系数为4.1%～6.0%;肌肉的平均回收率为79.3%～80.0%,变异系数为3.0%～4.7%;脂肪的平均回收率为76.7%～77.3%,变异系数为3.3%～5.4%。结果表明,盐酸沃尼妙林在肝脏中残留量最高,肾脏其次;肌肉和脂肪中的残留量显著低于肝脏和肾脏,停药24h时,残留量低于定量限;停药36h时残留量均低至检测限以下。盐酸沃尼妙林预混剂在猪组织中消除迅速,建议休药期为2d。     

超高效液相色谱串联质谱快速检测猪肉中的沃尼妙林残留

建立了检测猪肉样品中新型兽药盐酸沃尼妙林残留的快速超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）确证方法。样品使用乙腈提取,在提取过程中同时加入正己烷去除脂质杂质,离心后取乙腈提取液,浓缩至干,用1 mL 0.1%甲酸水∶乙腈（60∶40,V∶V）复溶上机。以反相C18柱作为分离柱,0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水为流动相,进行梯度洗脱。方法的检测限为10μg/kg,定量限为20μg/kg;在三个浓度水平（20、50、100μg/kg）下进行添加实验,平均回收率均大于92.60%,批内相对标准偏差为1.31%~6.80%,批间相对标准偏差为3.02%~4.60%。此方法简便迅速且稳定有效,适合快速检测猪肌肉中的沃尼妙林残留。     

盐酸沃尼妙林与猪鸡兔血浆蛋白结合率的检测和比较

本试验采用超滤法结合高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定沃尼妙林与猪、鸡和兔血浆蛋白结合率,并对血浆中不同浓度沃尼妙林的蛋白结合率进行比较。结果表明,建立的液相色谱-串联质谱联用法用于沃尼妙林生物样品的测定具有简便、灵敏与选择性高的特点。沃尼妙林具有较强的血浆蛋白结合率,其在猪、鸡和兔血浆中的平均蛋白结合率分别为84.4%±1.07%,87.5%±1.83%和86.6%±1.96%。沃尼妙林的血浆蛋白结合率在0.1~10μg/m L的考察浓度范围内无显著性差异,蛋白结合呈现非浓度依赖的特性。     

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中沃尼妙林和泰妙菌素

本试验旨在建立一种高效快速测定饲料中沃尼妙林和泰妙菌素的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱方法。用甲醇提取饲料中的沃尼妙林和泰妙菌素,经过Oasis MCX固相萃取柱净化后,由C18色谱柱分离,流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱,以电喷雾离子源(ESI)正离子扫描方式,在多反应监测(MRM)模式下进行测定,外标法定量。结果表明:本试验建立的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法对饲料中沃尼妙林和泰妙菌素的检测限分别为25.0和5.0 ng/g。沃尼妙林和泰妙菌素浓度在0.01~5.00μg/m L范围内线性关系良好,相关系数(R2)均大于0.99。在3个添加水平(2.5、25.0、125.0 mg/kg)下,沃尼妙林的回收率为85.17%~94.55%,相对标准偏差(RSD)为2.56%~7.65%,泰妙菌素的回收率为84.69%~99.36%,RSD为1.57%~4.95%。结果表明,本试验建立的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法操作简单、准确度高,可应用于饲料中沃尼妙林和泰妙菌素的快速定量测定。     

血浆中沃尼妙林HPLC-ESI-MS/MS方法的建立

为了研究血浆中沃尼妙林的检测方法,试验采用液液萃取进行HPLC-ESI-MS/MS分析。结果表明:线性范围为5～500ng/mL(r=0.9997);定量限为5ng/mL,回收率均在90%以上;批内、批间变异系数均小于15%。说明试验建立的检测方法既简便经济,又高效灵敏,且能满足沃尼妙林血药浓度检测和药代动力学研究的要求。     

高效液相色谱法测定沃尼妙林含量的研究

为建立测定沃尼妙林含量的高效液相色谱法,试验应用Phenomenex(R)Gemini-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为pH值为2.5磷酸盐缓冲液:乙腈(51.5:48.5,V/V),流速为1.0 mL/min,紫外检测波长为210 nm,柱温为25℃.结果表明:沃尼妙林在20～2000μ...     

UPLC/MS-MS结合QuEChERs检测可食性鸡组织中8-α-羟基妙林残留

为准确测定可食性鸡组织中8-α-羟基妙林的残留量,试验建立了一种高效液相色谱-串联质谱（UPLC/MS-MS）结合QuEChERs的快速检测方法。样品经酸化丙酮提取,Bond Elut QuEChERs柱净化,氢氧化钠碱溶液水解,乙酸乙酯反萃取,高效液相色谱-串联质谱仪测定。结果显示：鸡肉和鸡肝中8-α-羟基妙林在50～200μg/kg浓度范围内,方法具有良好的线性相关性,相关系数≥0.99;在可食性鸡组织中的检出限为10～20μg/kg,定量限为25～50μg/kg;8-α-羟基妙林在50、100和200μg/kg添加水平下平均回收率为65.07%～103.16%,批内、批间变异系数均≤20%。研究提示：建立的方法操作简便、结果准确,满足了兽药残留药物痕量检测方法规定要求,适用于可食性鸡组织中8-α-羟基妙林的残留量测定。     

高效液相色谱法检测蜂蜜中替硝唑药物残留研究

研究建立蜂蜜中替硝唑残留量的高效液相色谱测定方法。样品经12mL乙酸乙酯液液萃取、净化,在317nm波长下用二极管矩阵检测器检测。色谱柱为Agela Venusil ASB-C18(4.6×250mm,5μm),流动相甲醇∶水为17∶83(V/V),流速1.0mL/min。替硝唑浓度在0.10～4.00μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。平均回收率为82.3%～90.0%,相对标准偏差为2.27%～5.08%,方法的最低检测限10.0μg/kg。     

新型反相固相萃取吸附剂测定鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留量

建立了一种使用新型反相固相萃取吸附剂(PRiME HLB)的前处理净化流程,采用高效液相色谱-荧光检测器同时测定鸡蛋中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星残留量的方法。试样经乙腈∶0.2%甲酸水溶液(80∶20)提取,PRiME HLB固相萃取柱净化后进行测定,外标法定量。实验结果表明:(1)在鸡蛋中环丙沙星、恩诺沙星和沙拉沙星的检测限为0.75μg/kg,达氟沙星的检测限为0.15μg/kg;在0.005~0.5μg/mL质量浓度范围(达氟沙星在0.001~0.2μg/mL浓度范围)内线性回归关系良好(r0.99999)。(2)环丙沙星、恩诺沙星和沙拉沙星的添加量为0.005、0.05、0.5μg/mL(达氟沙星0.001、0.02、0.2μg/mL)时,方法的添加回收率在74.24%~98.78%,RSD5.15%。本方法适用于鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留量的测定。     

HPLC法分析猪肉中泰乐菌素残留

建立猪肉中泰乐菌素残留量的高效液相检测方法,为保障食品安全提供数据支撑。试料中残留的泰乐菌素用二氯甲烷提取,离心分层净化,高效液相色谱(紫外检测器)测定,外标法定量。结果显示,泰乐菌素在0.20～1.00μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r≥0.997 3;在100～500μg/kg浓度水平回收率范围为71.2%～86.2%;定量限为50μg/kg。经方法学验证,本方法专属性好、简便、快速、准确,适用于猪肉中泰乐菌素残留量的检测。     

UPLC-MS/MS测定动物源性食品中3种二苯乙烯类激素残留

建立了动物源性食品中二苯乙烯类激素己烯雌酚、己烷雌酚和双烯雌酚残留的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）测定法。样品均质后,采用β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解,叔丁基甲基醚提取,硅胶固相萃取柱净化。采用UPLC-MS/MS多反应监测（MRM）模式检测,内标法定量。方法对己烯雌酚、己烷雌酚和双烯雌酚的检出限均为0.1μg/kg,定量限均为0.5μg/kg;在1.0、1.5、2.0μg/kg三个浓度添加水平,总体平均回收率为75.8%-110.0%,总体相对标准偏差为3.3%-13.2%。本法分析速度快,灵敏度高,重现性好,各项技术指标均满足国内外相关法规要求,可用于各种动物源性食品中二苯乙烯类激素己烯雌酚、己烷雌酚和双烯雌酚残留的快速检测。     

固相萃取-液相色谱串联质谱法测定猪尿中的巴氯芬

为了建立用固相萃取-液相色谱串联质谱法测定动物尿液中巴氯芬药物残留的检测方法,试验采用叔丁醇-叔丁基甲醚对猪尿样品进行提取,提取液经混合型阳离子固相萃取小柱（MCX）净化、富集后,以液相色谱串联质谱测定,外标法定量。结果表明,该方法检出限为0.2 ng/mL,定量限为0.8 ng/mL,巴氯芬在0.8~20 ng/mL的添加浓度范围内线性良好,线性相关系数大于0.9997,在低、中、高（0.8、1.6、5.0 ng/mL）三个浓度的添加水平回收率在80%~120%之间,批内、批间精密度均小于10%。该方法灵敏度高,定性、定量准确,可用于猪尿中巴氯芬药物残留的定性、定量检测。     

Growth Inhibition of Selected Aquatic Bacteria by Tannic Acid and Related Compounds

Abstract

Tannic acid, propyl gallate, methyl gallate, and gallic acid were tested for their inhibitory effects on selected aquatic microorganisms by the well assay technique. Tannic acid, propyl gallate, and methyl gallate in deionized water inhibited the growth of Aeromonas hydrophila, A. sobria, Edwardsiella iclaluri, E. tarda, Pseudomonas fluorescens, and Escherichia coli, but gallic acid did not. When 500-μg/mL concentrations of these four compounds were tested in sterilized fish pond water at pH 7.0 and with a low bacterial inoculum of 10³–10⁴ colony-forming units (CFU) per milliliter, they inhibited the growth of P. fluorescens and (except for tannic acid) E. coli. Pseudomonas fluorescens inoculated at 10³–10⁴ CFU/mL in pond water was inhibited by methyl gallate, propyl gallate, and tannic acid concentrations as low as 50 μg/mL, but a gallic acid contration of 100 μg/mL was required for inhibition. Escherichia coli was inhibited by methyl gallate and propyl gallate at 250 μg/mL and by gallic acid at 500 μg/mL, but it was not inhibited by tannic acid at concentrations up to 500 μg/mL in water of pH 7.0. Tannic acid (500 μg/mL) did inhibit E. coli growth at pH 4.5.     

毛细管胶束电动色谱法检测饲料中防腐剂

建立了同时分离测定山梨酸(SA)、苯甲酸(BA)、对羟基苯甲酸甲酯(MP)、对羟基苯甲酸乙酯(EP)、对羟基苯甲酸丙酯(PP)、对羟基苯甲酸丁酯(BP)6种防腐剂的胶束电动毛细管色谱方法。以十二烷基硫酸钠(SDS)-磷酸盐-硼砂缓冲体系为缓冲液,pH为7.73,电压为20 kV,于245 nm波长下对样品进行检测。结果表明,6种防腐剂均在14 min内实现很好分离,SA、BA的线性范围分别为0.5～150μg/mL和15～200μg/mL,MP、EP的线性范围均为2～200μg/mL,PP的线性范围为5～200μg/mL,BP的线性范围为1～200μg/mL,线性相关系数为0.9987～0.9995,平均回收率为89.7%～96.7%,RSD≤5.91%,检测限为0.25～10μg/mL。     

LC-MS/MS测定猪尿中的黄曲霉毒素M1

建立LC-MS/MS检测猪尿中黄曲霉毒素M1的含量。猪尿样用超纯水稀释定容,充分漩涡振荡后经免疫亲和层析柱净化,甲醇洗脱,微孔滤膜过滤,经液相色谱分离,电喷雾离子源离子化,多反应离子监测(MRM)方式检测。外标法定量。采用0.1%甲酸:乙腈+甲醇溶液(1+1)为流动相,梯度洗脱。0.3mL/min的流速。在0.01μg/kg～0.50μg/kg范围内具有良好的线性关系,最低检测限为0.01μg/kg,回收率在70%～95%之间。此法操作简便、快速、灵敏、准确、样品处理简便易行,适用于测定猪尿中的黄曲霉毒素M1。     

从桑枝皮醇提物萃取的不同组分及其体外生物活性

为了从桑枝皮中获取有效的药用功能性成分,以不同极性的有机溶剂石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进一步萃取并分离桑枝皮醇提物(MBBEE)中的活性成分,获得的正丁醇萃取组分(n-BuOH)和剩余水相组分(Res)占MBBEE总量的94.26%(其中Res组分得率达73.72%,n-BuOH组分得率为20.54%),石油醚、氯仿、乙酸乙酯3种萃取组分的得率总共不足2%。对各种样品的活性成分检测表明,MBBEE中含有的总黄酮、总多酚和总糖3种活性成分分别为39.99、56.24和16.37mg/g,而以上3种活性成分在n-BuOH组分中分别为74.25、107.49和14.21mg/g,在Res组分中分别为262.16、118.70和75.88mg/g。对各种样品的氨基酸组成分析表明,游离氨基酸含量为n-BuOH组分>MBBEE>Res组分。各种样品的体外生物活性试验显示,MBBEE、n-BuOH组分和Res组分均具有很强的DPPH自由基清除作用以及对酪氨酸酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用,其中:对DPPH自由基清除作用以Res组分最强,抑制中值(IC50)为100μg/mL;对酪氨酸酶抑制活性以n-BuOH组分最高,IC50为5.2μg/mL;对α-葡萄糖苷酶的抑制活性以Res组分最高,IC50为2.8μg/mL。试验结果表明,从桑枝皮醇提物中萃取的n-BuOH组分和Res组分是降血糖以及抗氧化、抗衰老、美白的功能性成分。     

顶空固相微萃取—气相色谱法测定木糖发酵液中乙醇

建立了顶空固相微萃取(HS-SPME)和气相色谱(GC)联用测定木糖发酵液中乙醇的方法。针对目标组分详细研究了萃取头的种类、萃取时间、萃取温度、pH值、离子强度及解吸条件对HS-SPME的影响。GC载气(高纯氮气)流速为4.0mL/min,色谱柱为DB-ALC2毛细管柱(30m×0.53mm,2μm),柱温:40℃;在优化的条件下,以叔丁醇为内标物,内标法-校准曲线法定量,测定乙醇的线性范围为50～300μg/L;检出限(3倍噪声)为4.19μg/L,相对标准偏差小于6%;回收率为91.01%～97.90%。该方法用于木糖发酵液中乙醇的测定,结果令人满意。     

Chemical composition,antimicrobial, modulator and antioxidant activity of essential oil of Dysphania ambrosioides (L.) Mosyakin & Clemants

The oil presented the α-Terpinene as the major compound with 54.09% presence. Antibacterial activity demonstrated significant MIC against Staphylococcus aureus (256 μg/mL) and moderate against Pseudomonas aeruginosa (512 μg/mL). The modulating effect of antibiotics was significant against P. aeruginosa potentiating the effect of all the antibiotics tested. The IC₅₀ observed for CT LM 23 was clinically relevant (19.3 μg/mL), similar to that obtained for CA INCQS 40006 (25.2 μg/mL). The combined effect with fluconazole also showed significant results, 0.1 and 22.7 μg/mL, for CT LM 23 and CA INCQS 40006, respectively. For CA LM 77 the IC₅₀ was 101.9 μg/mL and for CT INCQS 40042 a value of 53.3 μg/mL. Regarding the modulation, both were considered of clinical relevance, 3.3 and 6.4 μg/mL. OEDA has low antioxidant activity (>1024 μg/mL). Therefore, the popular use against infections was corroborated by this work.     

生长激素和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚卵裂的影响

本研究探讨了生长激素(STH)和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后卵裂的影响。结果表明:在mNCSU-23液中,添加0.15μg/mLSTH组的成熟率(73.83%)和卵裂率(64.76%)显著高于对照组和添加0.01、0.05、0.1、0.2μg/mLSTH组(P<0.05);添加5μg/mL和8μg/mL胰岛素组的成熟率(66.25%、60.64%)显著高于添加0、0.5、2μg/mL及10μg/mL组(P<0.05);添加5μg/mL胰岛素组的卵裂率(61.63%)显著高于添加0、0.5、2、8、10μg/mL组(P<0.05);最佳的联合添加组为0.15μg/mLSTH+2μg/mL胰岛素,其体外成熟率为79.37%、卵裂率为72.31%。     

In vitro antimicrobial efficacy of β‐defensin 3 against Staphylococcus pseudintermedius isolates from healthy and atopic canine skin

β‐Defensins (BDs) are highly conserved antimicrobial peptides important in innate defence against bacteria. β‐Defensin 3 has a specific role in protecting the skin. This study quantified the minimal inhibitory concentration (MIC) of human (h)BD3 against Staphylococcus pseudintermedius isolates from atopic and healthy dogs. Single colony isolates (1 × 10⁵ colony‐forming units/mL log phase) were cultured with doubling dilutions of hBD3 in sodium phosphate buffer from 0.8 to 50 μg/mL at 37 °C for 2 h, before adding 100 μL of tryptone soy broth and incubating for a further 20 h. Bacterial growth was assessed as the mean optical density at 540 nm corrected for background. The median MIC was 12.5 μg hBD3/mL (range 3.125–25 μg/mL; n = 22). Forty‐five percent of the isolates were inhibited at ≤6.25 μg hBD3/mL, and 90% were inhibited at ≤12.5 μg hBD3/mL. Bacterial growth was not inhibited at ≤1.6 μg hBD3/mL. There were no significant differences in the inhibition by hBD3 of isolates from atopic (median MIC 12.5 μg/mL, range 6.25–25 μg/mL, n = 14) and healthy dogs (median MIC 9.4 μg/mL, range 3.125–12.5 μg/mL, n = 8); from noninfected colonized sites (median MIC 12.5 μg/mL, range 3.125–25 μg/mL, n = 16) and infected lesions (median MIC 9.4 μg/mL, range 6.25–12.5 μg/mL, n = 6); or between sample sites (nose median MIC 12.5 μg/mL, range 6.25–25 μg/mL, n = 5; perineum median MIC 12.5 μg/mL, range 3.125–25 μg/mL, n = 7; ear median MIC 6.25 μg/mL, range 6.25–12.5 μg/mL, n = 4; lesions median MIC 9.4 μg/mL, range 6.25–12.5 μg/mL, n = 6). In conclusion, hBD3 inhibited the growth of canine S. pseudintermedius isolates in vitro irrespective of origin.