应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平的探讨

为了解应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测犬狂犬病抗体水平的效果,对东莞市采集的54份犬血清应用ELISA进行检测,采用Synbiotics软件进行分析,同时将该批血清送至军事医学科学院军事兽医研究所作荧光抗体病毒中和试验(FAVN)比较.ELISA检出阳性数35份,阳性率为64.82%,与军事医学科学院军事兽医研究所的测定结果差异不显著,符合率为85.19%.证明应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平定性检测具有较高的准确率,适合在短时间内监测大批量的血清样品.     

犬血清狂犬病毒抗体调查

在狂犬病流行区貌似正常犬咬伤而引发狂犬病的病例已见一些报道,提示部分犬可隐性感染狂犬病毒,并在一段时间通过唾液排毒,呈健康带毒状态。为查明犬感染狂犬病毒状况,于1989年10月—1990年5月,对狂犬病流行区与非流行区犬血清狂犬病毒抗体水平进行了调查检测,现报告如下。     

犬细小病毒血凝抑制抗体和中和抗体的关系

对８份犬细小病毒免疫的犬血清同时进行中和（ＳＮ）抗体和血凝抑制（ＨＩ）抗体检测。结果,ＳＮ抗体和ＨＩ抗体具有正比线性关系,ＳＮ抗体近似于６倍ＨＩ抗体,其中ＨＩ抗体检测可在３ｈ内获得结果,操作简便,通过测定ＨＩ抗体效价即可推算出ＳＮ抗体的效价。     

三种ELISA方法与荧光抗体病毒中和试验检测狂犬病抗体的一致性分析

为筛选合适狂犬病抗体检测的试剂盒,该研究以荧光抗体病毒中和试验（fluorescent antibody virus neutralization FAVN）方法为参照,与3个ELISA试剂盒方法进行比对,进行一致性分析,并计算了三种试剂盒的敏感性和特异性。结果显示：三种不同的试剂盒中,试剂盒A与FAVN一致性最好,Kappa值为0.605,有较高的一致性,符合率为86%;试剂盒B次之,Kappa值为0.485,为中度一致,符合率为80%;试剂盒C与FAVN的一致性最差,Kappa值为0.310,符合率也最低,为74%。在敏感性和特异性方面,试剂盒A的敏感性最高,为92.1%,试剂盒B的特异性最高,为72.7%。本研究为临床上科学的筛选试剂盒提供了依据。     

广东省部分城市犬和猫狂犬病病毒血清中和抗体的调查分析

通过对广东省部分城市宠物犬和猫狂犬病病毒中和抗体效价现状进行调查分析,探讨其风险点及改善点,为狂犬病的防控及公共卫生安全提供参考。调查于2020-2021年期间在广东省佛山市、深圳市、东莞市、云浮市、江门市等地城区采集宠物犬、猫血清735份,并对相关个体信息进行收集,采用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对所有血清样本进行了狂犬病中和抗体效价的测定和分析。结果显示,所有样本狂犬病抗体保护水平阳性率为46.9%,低于世界卫生组织推荐的70%保护水平阳性率;深圳市血清样本抗体保护水平阳性率为55.4%,为采样城市中保护水平阳性率最高;家养猫的保护水平阳性率比家养犬的阳性率低15.5%;犬养殖场样本阳性率比家庭饲养犬样本阳性率低20.8%;流浪动物的保护水平阳性率仅有8.1%。说明广东省部分城市犬、猫狂犬病免疫阳性率偏低,尚无法形成抵御狂犬病侵袭的有效屏障,需在流浪动物管理、猫饲养管理、犬猫饲养场管理等几个方面加强狂犬病的预防管制措施,加强政策引导工作,以提升狂犬病的综合防控能力。     

上海地区犬狂犬病病毒抗体的血清学调查

狂犬病(rabies)又称恐水症，是由狂犬病病毒引起的一种人畜共患的中枢神经系统急性传染病。几乎所有的温血动物均对狂犬病病毒易感，人一旦感染，病死率几乎100％。当前，随着人民生活水平的提高及生活质量的改善，宠物热方兴未艾。人们在享受宠物带给人们欢乐的同时，却忽略了与人接触密切且数量与日俱增的宠物，特别是犬，可能是狂     

鼬獾群体中狂犬病中和抗体调查与分析

采用荧光抗体病毒中和试验（FAVN）即固定病毒一稀释血清的中和试验方法,对从我国浙江、江西、安徽和广东地区采集的外观健康鼬獾的215份血清进行了狂犬病中和抗体的检测。结果显示,鼬獾体内存在比例较高（38％）的狂犬病中和抗体,但是自不同地区或群体采集的血清样品,狂犬病中和抗体阳性率不同,有些群体样品中完全没有抗体,有些群体样品中狂犬病中和抗体阳性比例100％,但是中和抗体的水平普遍不高,说明鼬獾种群感染狂犬病几率较高,并可能存在狂犬病的一过性或隐性感染。     

狂犬病病毒中和抗体ELISA技术的建立

将狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G蛋白)中和抗原表位串联表达的重组蛋白作为抗原,建立了检测RV中和抗体的间接ELISA技术。结果表明,最佳抗原包被量为2μg/孔,被检血清最佳稀释倍数为1:200。该方法与快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的阳性符合率为88%,阴性符合率为96%。特异性试验表明,该抗原不与犬腺病毒I型、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒和犬冠状病毒阳性血清发生交叉反应,具有良好的特异性。板内和板间重复性试验的平均变异系数分别为2.7%和4.2%,具有良好的重复性,为动物RV中和抗体检测提供了简单快捷的检测方法。     

东莞地区犬接种狂犬病疫苗后抗体水平的检测

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对东莞市采集的809份犬血清进行检测,采用SYNBIOTICS软件进行分析.结果表明,抗体阳性数265份,抗体阳性率32.76%,其中检测免疫狂犬病多联苗的血清493份,抗体阳性数55份,抗体阳性率11.16%,检测免疫狂犬病单价疫苗的血清316份,抗体阳性数210份,抗体阳性率66.46%.     

云贵川三省部分地区警犬狂犬病血清中和抗体调查

为评价警犬的狂犬病免疫效果,了解影响免疫效果的因素,2017年在云南、贵州、四川三省部分地区免疫狂犬病疫苗的警犬中随机抽样,采用荧光抗体病毒中和试验(FAVN),检测血清中狂犬病病毒中和抗体效价。结果显示,共抽检187只警犬,中和抗体阳性127只(≥0.50 IU/m L),总体免疫合格率为67.91%,其中云南、贵州、四川3省的免疫合格率分别为57.14%、68.33%、76.06%。结果分析表明,警犬狂犬病免疫合格率与犬的年龄、免疫次数、疫苗类型等因素有关,而与性别和品种无关。建议完善警犬免疫程序,加大血清中和抗体监测力度,对不合格警犬及时加强免疫;对每个影响因素进行连续性分析,以确定影响警犬狂犬病免疫合格率的具体因素。     

测定狂犬病病毒中和抗体的微量免疫酶试验

在Kazuakz等报道的微量免疫酶技术(MIET)的基础上,以健康细胞对照孔OD值均数加3倍标准差作为间接ELISA判定标准,进而建立了求中和剂量的新方法.通过用中和99%病毒的一致判定标准同经典的小鼠中和试验(MNT)比较看,本试验所建立的方法可代替MNT.     

酶联免疫吸附试验检测狂犬病抗体的实际应用探讨

为探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测狂犬病免疫抗体水平的应用价值,检测了深圳市10个行政区的290份犬血清,以荧光抗体病毒中和试验（FAVN）法作为金标准,分析检测结果的一致性、符合率及定量检测有效性等指标。结果显示：Kappa值为0.545,一致性评价为中度一致;总符合率为87.59%,中和效价0.51~ 2.00 IU/mL的样品出现假阴性的概率较大;相同中和效价的样品S/CO值呈多区间分布现象。建议在基层应用于免疫效果评价的实际检测时,ELISA方法可用于定性检测的初步筛查,不建议用作定量检测的方法。     

Advances in Biological Function of Rabies Virus Glycoprotein

Rabies is a lethal zoonotic infectious disease caused by rabies virus (RABV), which infected the central nervous system. The RABV glycoprotein exists on the surface of the virus particles, it is a major protective antigen which stimulate the body to produce the humoral immunity and cellular immunity;It is the identification of structure of the cell receptors;It plays an important role in the viral pathogenicity and tropism in the nerve, directly related to the virulence of virus.In this review,we summarized research progress of structure and function of RABV glycoprotein,and also reviewed the detection and evaluation of the neutralizing antibody. All these fundamental studies are important for the control and elimination of the RABV,to provide research basis for further revealing the biological function of RABV glycoprotein.     

狂犬病病毒糖蛋白生物学功能研究进展

狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus,RABV）感染中枢神经系统引起的致死性人畜共患传染病。RABV糖蛋白存在于病毒表面,它既是病毒的主要保护性抗原,诱导体液免疫产生中和抗体和刺激T细胞产生细胞免疫,又是病毒与细胞受体结合的结构,在病毒致病性和嗜神经性中发挥重要作用,与病毒毒力直接相关。作者归纳总结国内外RABV糖蛋白结构与功能研究进展,并对糖蛋白中和抗体的检测与评价进行阐述。将为进一步揭示RABV糖蛋白生物学功能奠定基础,为糖蛋白中和抗体的诊断提供理论参考,为控制和消灭狂犬病做出相应贡献。     

应用夹心阻断ELISA测定血清中抗狂犬病抗体的研究

本研究建立的检测狂犬病抗体的夹心阻断ELISA,直接利用未经提纯的病毒悬液代替提纯的抗原,并仅用一种酶标抗体,测定了9种动物的血清.本方法敏感度的95%可信限为0.0013～0.0071IU/mL,比小鼠中和试验和微量免疫酶试验均敏感.按阻断50%判定血清ELISA的阴阳性,9种动物的1134份血清中有91份阳性,其中发病点的牛、猪、犬、家鼠血清的阳性率均在10%以上.根据对一定量的抗原阻断率相同时,抗体浓度一致的原理,测定了7种动物的185份血清效价,结果狂犬病抗体浓度在0.01IU/mL以上的为63份.利用夹心阻断ELISA和小鼠中和试验测定了7种动物的23份血清,阳性份数分别为12和11.两种方法均证明家鼠血清中有狂犬病抗体.本研究表明,测定狂犬病抗体的夹心阻断ELISA,简便、敏感、快速,可用于流行病学调查.     

蓝舌病Ⅰ型灭活疫苗免疫绵羊后中和试验和cELISA检出抗体的特点与关系

为比较蓝舌病病毒(BTV)cELISA和血清中和试验(SNT)检测方法的特点与关系,通过灭活、浓缩,制备抗原含量为1、5、10、50、100μg/mL的BTV-1型灭活疫苗。每个含量为1组,并设对照组,每组6只绵羊,分别在0、3周免疫。每周采血1次,共采血6次。对所采血样分别用cELISA和SNT方法进行抗体检测。cELISA检测结果显示,免疫后第1周,抗体阳性率达到80.00%,第4周全部免疫羊转为抗体阳性,抗体产生较为迅速;SNT检测结果显示,中和抗体阳性率从免疫后第1周的6.67%持续上升至第3周的36.67%,至第4周达到70.00%,中和抗体产生持续而缓慢。随着时间延长,2种检测方法的符合率由23.33%增加到76.67%。当绵羊同时产生中和抗体和cELISA抗体时,中和抗体效价与cELISA抑制率间有显著的线性相关关系(r=0.63),相关方程为y=0.38+0.05χ。分析认为,中和抗体出现的时间之所以晚于cELISA抗体,可能是因为与宿主细胞识别并吸附的主要部位VP7蛋白位于病毒衣壳的中间位置,其主要表面抗原位点暴露需要时间。     

Antigenic Characterization of Rabies Virus Isolates from Vaccinated Dogs in Plateau State,Nigeria

Rabies isolates (genotype 1 lyssaviruses) from vaccinated dogs that died of rabies infection in the Plateau area of Nigeria were characterized using monoclonal antibodies (MAbs). The isolates were examined for rabies (genotype 1) and rabies-related (genotypes 2, 3 and 4) viruses by the indirect fluorescent antibody test carried out with MAb 502-2, which recognizes the nucleocapsid protein of all known lyssaviruses, and with MAb 422-5, which identifies only rabies-related viruses. All three isolates showed positive immunofluorescence with MAb 502-2 and were negative with MAb 422-5, indicating that they were all rabies (genotype 1) viruses.Characterization with a panel of 36 anti-nucleocapsid monoclonal antibodies showed that all three isolates reacted positively with 35 of the anti-nucleocapsid MAbs, including MAb 102-27 and MAb 377-7. Characterization using a panel of 44 anti-glycoprotein MAbs differentiated the isolates sharply from LEP Flury and PM vaccine viruses. The pattern of anti-glycoprotein reactivity of the isolates showed them to belong to one distinct viral subtype, except for a minor variation in one isolate that was not neutralized by MAb 1101-3. None of the three isolates was identified as the Flury low egg passage (LEP) vaccine strain used for vaccinating dogs in Nigeria. In fact, all the three isolates had the typical pattern of reactivity of isolates from unvaccinated dogs, including MASS 83, a rabies virus isolated in Nigeria and characterized at the Wister Institute before this study.     

上海市犬只狂犬病认定免疫点主要管理做法分析

强化犬只狂犬病免疫工作是从源头控制狂犬病的最有效措施.近年来,上海市按照《上海市养犬管理条例》的要求,通过严把免疫资质准入、规范内部管理、落实疫情报告责任、推进免疫质量考核等举措,使犬只狂犬病认定免疫点的布局日趋合理,文明服务更加规范,这已成为上海市民犬只狂犬病免疫的主渠道,免疫数量和质量逐年提升,构筑了良好的免疫屏障...