乳铁蛋白及其活性肽抗菌活性的研究进展

乳铁蛋白（Lactoferrin,LF）是转铁蛋白家族中一种天然的铁结合糖蛋白,主要包括血清转铁蛋白和卵转铁蛋白。乳铁蛋白活性肽（Lactoferricin,Lfcin）是乳铁蛋白在胃蛋白酶作用下水解下来的由25个氨基酸残基组成的小肽。乳铁蛋白及其活性肽具有多种生物学功能,这些功能大都和它的铁离子结合特性有关。文章就近年来乳铁蛋白及其活性肽抗菌活性的研究进展作一综述。     

乳铁蛋白对牛精液冷冻效果的影响

[目的]探索乳铁蛋白在牛精液冷冻中的应用效果,为乳铁蛋白在家畜精液保存中的研究与应用提供初步的参考数据。[方法]在常用稀释液(果糖-柠檬酸钠-卵黄-甘油液)的基础上,分别添加不同浓度(250、500、1000mg/L)的乳铁蛋白,观察乳铁蛋白对牛精液冷冻效果的影响。[结果]3种浓度的乳铁蛋白对精子的冻后活力、复苏率、VAP、VSL、VCL、畸形率、顶体完整率及低渗肿胀率均没有显著影响。[结论]在该试验条件下,乳铁蛋白未能显著提高牛精液的冻后质量。     

乳铁蛋白及其生理功能研究进展

乳铁蛋白作为一种天然的、具有许多特殊生理功能的糖蛋白,已经引起国际上广泛关注.本文综述了乳铁蛋白的理化性质(分子结构、酸碱和热稳定性)、生理功能(抑菌作用、抗病毒、调节免疫、促铁吸收、促进肠道及肠道内双歧杆菌生长和阻断自由基)以及分离制备(离子交换色谱法 、超滤法和亲和色谱法)等方面的研究进展,以及乳铁蛋白在食品、医药和化妆品领域的广泛应用前景,并指出如何获得高效表达的重组乳铁蛋白转基因生物,将成为今后主要的研究方向.     

常乳中牛乳铁蛋白的纯化及抗菌活性研究

[目的]研究从常乳中纯化牛乳铁蛋白的工艺条件,探讨牛乳铁蛋白的抗菌活性。[方法]选用SP sepharose HP作为强阳离子交换介质,利用AKTApurifier10高效液相色谱仪纯化牛乳铁蛋白。[结果]结果表明,牛乳铁蛋白在pH值7.5、浓度0.85 mol/L的NaCl洗脱液中可以被洗脱下来,且产品纯度为90%以上。牛乳铁蛋白浓度为5 mg/ml时对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用。[结论]该研究建立了从常乳中纯化牛乳铁蛋白的方法,为大规模生产具有活性的牛乳铁蛋白奠定了基础。     

利用转基因牛生产重组人乳铁蛋白研究

[目的]研究利用转基因牛生产重组人乳铁蛋白,为利用转基因动物生产药用或食用蛋白提供依据。[方法]对已获得的人乳铁蛋白转基因牛进行人工催乳,用乳成分分析仪分析了转基因对乳汁的影响,并利用放免法检测了重组人乳铁蛋白在转基因牛乳中的表达。[结果]重组人乳铁蛋白在牛乳中获得了高效表达,表达水平为(3.429±0.417)mg/ml。通过转基因牛乳的乳成分分析发现,转基因牛乳与常乳在乳脂、总蛋白、乳糖和干物质的含量上没有明显变化。[结论]重组人乳铁蛋白在转基因牛乳中获得了高效表达,为大规模生产重组人乳铁蛋白奠定了基础。     

免疫小鼠乳腺乳铁蛋白基因表达变化研究

研究小鼠不同生理阶段以及免疫条件下,乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量的变化.选择120只健康昆明小白鼠,于分娩后4 d进行如下制剂处理:脂肪酶蛋白(Lipase)、空免疫刺激复合物(ISCOM)和Lipase.于分娩后8和12 d(即注射后4和8 d)用间接ELISA法测定乳中和血清中的特异性IgG含量,用Real Time PCR检测小鼠乳腺中乳铁蛋白基因的相对表达量.另外,正常生理状态乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量的变化分别是在分娩后1、4、8和12 d进行检测.结果表明,正常状态下,小鼠分娩后1 d时,乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量相对较高,而在分娩后4、8和12 d时较低;免疫条件下,乳腺内乳铁蛋白显著上升.免疫刺激可以引起小鼠乳腺乳铁蛋白基因表达上调.     

猪乳铁蛋白肽LFcinP基因在巴斯德毕赤酵母中组成型表达及其抑菌活性检测

为获得具有生物活性作用的猪乳铁蛋白肽LFcinP基因在巴斯德毕赤酵母中进行组成型表达,检索NCBI数据库公布的牛、羊、猪、骆驼等动物的乳铁蛋白及其抗菌肽的氨基酸序列,运用ExPASY在线网站,对猪乳铁蛋白保守区域所编码的蛋白进行理化性质分析,参照巴斯德毕赤酵母使用密码子偏好性,优化设计合成138 bp编码猪乳铁蛋白肽LFcinP基因,通过pGAPHαM酵母组成型分泌表达载体将其整合到巴斯德毕赤酵母GS115菌株,获得表达猪乳铁蛋白肽LFcinP基因重组酵母菌株GS115p/GAPHαM-LFcinP。SDS-PAGE和Westernblot分析表明,获得5.4 ku乳铁蛋白肽;分析96 h的蛋白电泳带结果表明,重组蛋白占酵母菌上清蛋白35.9%,表达量为48.5μg.mL-1;动态生长曲线法抑菌试验结果表明,重组猪乳铁蛋白肽具有一定的抑菌作用。     

乳铁蛋白牛初乳颗粒增强免疫调节作用的研究

评价乳铁蛋白牛初乳颗粒增强免疫力作用,为该产品提供功能学资料。采用SPF级雌性小鼠,设0.200,0.04,1.200 g/kg(分别相当于人体推荐量的5,10,30倍)3个剂量组,每日1次经口给予小鼠相应浓度的受试样品,连续给样1个月。检测对小鼠体重、胸腺、脾脏器官、ConA诱导的脾淋巴细胞转化、DNFB诱导的DTH、溶血空斑数、血清半数溶血值(HC50)、碳廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、NK细胞活性的影响。结果表明:细胞免疫功能、体液免疫功能、NK细胞活性均与对照组有显著差异,认为该乳铁蛋白牛初乳颗粒具有增强免疫力功能效果(P<0.05)。     

牛乳铁蛋白抗菌肽(Lactoferricin)基因的克隆与表达质粒构建

按大肠杆菌偏爱密码子设计了牛乳铁蛋白肽的3段引物序列,通过PCR合成BeL1-2-3,经双酶切后克隆入pED质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点之间,构建出牛乳铁蛋白肽的表达载体,转化至E.coliBL-2(1 DE3),获得牛的乳铁蛋白肽基因克隆菌。该克隆菌经诱导后,可表达出可观的融合蛋白,且表达量与诱导时间呈一定相关性。     

乳肽的开发和利用

母乳对婴儿来说,在营养及生理功能方面是最理想的。它具有以下优点:含有双歧乳杆菌繁殖因子和乳铁蛋白抗感染因子;所含的各种营养成份在质与量上能均衡地提供给婴儿,又不能加重婴儿未成熟的消化代谢功能的负担;不含异种蛋白质,吸乳婴儿不会发生过敏症;还可成为母子之间情感的纽带。考虑到营养及抗感染因素,在最近的婴儿奶粉中加了些DHA和双歧杆菌繁殖因子及乳铁蛋白等,除此以外,一些添加乳肽的奶粉也已上市。 从婴儿营养学的角度看,将乳肽加入到奶粉中可以提高消化吸收能力,并且降低过敏性。就生理功能方面具有母乳优点的肽奶和用于治疗低过敏性的乳肽食品的开发利用做如下介绍。     

“大通＂牦牛Lfcin基因克隆及生物信息学分析

乳铁蛋白素（Lactoferricin,Lfcin）是从乳铁蛋白（LF）上被胃蛋白酶水解下来的25个氨基酸残基的小肽,位于乳铁蛋白第二外显子,是乳铁蛋白的抗菌活性中心,其抗菌活性是LF的几百倍。Lfcin具有广谱抗菌活性,对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有效,同时具有抗真菌、抗病毒、抑制肿瘤细胞生长、参与免疫调节等多种生物学功能和维持动物肠道菌群正常生态稳定的功能,从而起到提高动物生产性能的作用。     

"大通牦牛"Lfcin基因克隆及生物信息学分析

[目的]克隆“大通牦牛”Lfcin基因,为将该基因应用于饲料工业和养殖业提供依据。[方法]利用PCR技术从“大通牦牛”基因组DNA中获得乳铁蛋白素（Lactoferricin,Lfcin）基因序列;将Lfcin基因连接于pGEM-T easy载体,送至生物公司测序;将“大通牦牛”与奶牛的Lfcin基因序列进行比对;同时,对牦牛、奶牛、人、小鼠等物种的Lfcin蛋白进行序列分析和进化树分析。[结果]克隆获得了含“大通牦牛”LF（Lactoferrin）第二外显子的DNA序列,共778bp,其中Lfcin基因编码区长75bp,编码25个氨基酸;序列分析显示,克隆获得的牦牛DNA序列与奶牛该序列存在11个碱基的变异;牦牛和奶牛的Lfcin蛋白质序列完全相同,各物种Lfcin蛋白具有较高的同源性;进化树分析表明Lfcin进化树符合物种进化规律。[结论]该研究为Lfcin基因在原核或真核细胞中的表达研究以及进一步研究Lfcin蛋白的生活活性奠定了基础。     

天祝白牦牛Lfcin基因克隆及生物信息学分析

利用PCR技术从天祝白牦牛基因组DNA中获得乳铁蛋白素(Lactoferricin,Lfcin)基因序列,将Lfcin基因连接于pGEM-T easy载体进行测序后,与奶牛的Lfcin基因序列进行比对;对牦牛、奶牛、人、小鼠等物种的Lfcin蛋白序列进行比对和进化树分析.结果表明:克隆获得了含天祝白牦牛乳铁蛋白第二外显子的DNA序列,共778 bp,其中Lfcin基因编码区长75 bp,编码25个氨基酸;序列分析显示,克隆获得的牦牛DNA序列与奶牛该序列存在9个碱基的变异,其中Lfcin基因编码区内有1个变异,为同义突变;牦牛和奶牛的Lfcin蛋白质序列完全相同,各物种Lfcin蛋白具有较高的同源性.     

“大通”牦牛Lfcin基因克隆及生物信息学分析(英文)

[Objective] This study was to clone Lfcin gene from Datong yak, so as to provide reference for applying this gene in feed industry and breeding industry. [Method] Using PCR technology, the lactoferricin(Lfcin)-encoding gene was obtained from genome of Datong yak; then it was cloned into pGEM-T easy vector, and then sequenced; the sequencing results were subsequently aligned with the sequences of dairy cow accessed in GenBank. Moreover, amino acid sequences of Lfcin gene from various species including yak, dairy cow, human and mouse were used for sequence alignment and phylogenesis analysis. [Result] The second exon of lactoferrin(LF) from Datong yak, which is 778 bp in length, was obtained, within which the coding region of Lfcin gene is 75 bp (25 amino acid residues); sequence analysis showed that there is discrepancy of eleven bases between Datong yak and dairy cow; Lfcin proteins from various species shared high homeology, of which that from Datong yak and dairy cow were completely identical; phylogenesis analysis showed that cladogram based on Lfcin was consistent with species evolutionary law. [Conclusion] This study laid a foundation for the prokaryotic or eukaryotic expression of Lfcin gene and further understanding the activity of Lfcin protein.     

牛乳铁蛋白素-马盖宁杂合抗菌肽的设计、合成及抑菌活性

根据抗菌肽牛乳铁蛋白素(Lfcin B)与马盖宁(Magainin)的核心功能序列,将Lfcin B(1-15)和Magainin(1-12)二者连接起来,设计一种新型杂合抗菌肽LFB15-MA12,采用固相化学合成法合成获得纯度大于95%的LFB15-MA12.微量肉汤稀释法测得LFB15-MA12对金黄色葡萄球菌A...     

杂合肽基因的合成及在大肠杆菌中的表达

将LfcinB15-Ma12杂合肽基因克隆到载体pET32a上,构建抗菌肽LfcinB15-Ma12杂合肽基因,并在大肠杆菌中表达融合蛋白。根据已报道的抗菌肽LfcinB和Magainin基因的氨基酸序列,推导出其cDNA序列,将两者连接为杂合基因并克隆到载体pET32a上,IPTG诱导表达。构建了LfcinB15-Ma12杂合肽基因重组质粒,经PCR扩增和DNA测序分析,成功构建了LfcinB15-Ma12杂合肽基因重组质粒,经IPTG诱导,成功表达了杂合肽LfcinB15-Ma12。这为利用基因工程表达其他抗菌肽奠定了基础。     

牛乳素Lfcin B基因的合成及其在酵母菌中的表达研究

[目的]为临床研究和治疗某些病原微生物引起的感染提供依据。[方法]参照LfcinB的氨基酸序列,利用化学合成法合成LfcinB基因并克隆到pPIC9K载体中,转化到酵母菌GS115感受态细胞中,用抗性选择标记G418筛选出高拷贝酵母菌转化子。利用甲醇诱导表达重组LfcinB,经Tricine-SDS-PAGE电泳检测目的蛋白牛乳铁蛋白素的表达情况,同时通过体外抑菌试验检测表达产物的抑菌活性。[结果]提取的酵母菌DNA扩增出1条预期的560bp左右的特异性条带。目的基因已经成功克隆到pPIC9K载体中,并转到酵母菌GS115中而且获得了表达。重组酵母表达上清中牛乳铁蛋白素抗菌肽对沙门氏肠炎杆菌的抗菌活性为42.857IU/ml,表明LfcinB基因的酵母表达载体构建成功。[结论]该研究证明利用化学合成法直接合成编码LfcinB的DNA构建真核表达载体、通过生物发酵工程来制备LfcinB是可行的。     

Double-stranded ribonuclease coinduced with interferon

Double-stranded (ds) RNA and many viruses are inducers of interferon (IFN), the latter presumably because they contain, or can form, dsRNA. Concomitant with the induction of IFN in chicken embryo cells was the induction of a novel double-stranded ribonuclease (dsRNase), which was released into the medium and continued to accumulate long after IFN production ceased. Only avian cells (chicken, quail, turkey, or duck) expressed high levels of this dsRNase; mammalian, turtle, or fish cells did not. Production of the nuclease was inducer dose-dependent. Optimum pH and cation requirements distinguished it from other dsRNase activities. Degradation of dsRNA was endonucleolytic. Activity resided in a molecule of an Mr of approximately 34,500. Low levels of a single-stranded (ss) RNase activity were inseparable from the dsRNase. The role for a dsRNA-inducible dsRNase released from cells is unknown.     

Morphological and physiological traits of large-panicle rice varieties with high filled-grain percentage

Understanding the morphological and physiological traits associated with improved filling efficiency in large-panicle rice varieties is critical to devise strategies for breeding programs and cultivation management practices.Information on such traits,however,remains limited.Two large-panicle varieties with high filled-grain percentage(HF) and two check large-panicle varieties with low filled-grain percentage(LF) were field-grown in 2012 and 2013.The number of spikelets per panicle of HF and LF both exceeded 300,and the filled-grain percentage(%) of HF was approximately 90,while that of LF was approximately 75 over the two years.The results showed that when the values were averaged across two years,HF yielded 12.91 ha~(-1),while LF yielded 11.01 ha~(-1).HF had a greater leaf area duration,biomass accumulation and transport of carbohydrates stored in the culm to the grains from heading to maturity compared with LF.HF exhibited a higher leaf photosynthetic rate,more green leaves on the culm,and higher root activity during filling phase,especially during the middle and late filling phases,in relative to LF.The length of HF for upper three leaves was significantly higher than that of LF,while the angle of upper three leaves on the main culm was less in both years.Meanwhile,specific leaf weight of HF was significantly higher when compared with LF.In addition,the grain filling characteristics of HF and LF were investigated in our study.Our results suggested that a higher leaf photosynthetic rate and root activity during filling phase,greater biomass accumulation and assimilate transport after heading,and longer,thicker and more erect upper three leaves were important morphological and physiological traits of HF,and these traits could be considered as selection criterion to develop large-panicle varieties with high filled-grain percentage.     

乳铁蛋白对早期断奶仔猪血清和粪便中金属元素含量及抗氧化性能的影响

选用21日龄断奶仔猪96头,根据日粮中乳铁蛋白的添加量250、500、750mg/kg设置处理,每个处理4个重复,每个重复6头仔猪.试验为期21d.试验结果:各乳铁蛋白添加组断奶仔猪平均日增重显著提高(P＜0.05),腹泻率显著降低(P＜0.05),血清中铁含量显著提高(P＜0.05); 500、750 mg/kg添加组仔猪粪便中铁含量显著降低(P＜0.05),粪便中铜、锌、锰含量均低于对照组,且随乳铁蛋白添加量的增加而降低;500 mg/kg添加组的料肉比最低,血清中MDA含量比对照显著降低(P＜0.05),SOD活力和GSH-Px活力比对照显著提高(P＜0.05).结果表明:在基础日粮中适量添加乳铁蛋白(500 mg/kg)能在一定程度上提高断奶仔猪的生产性能,提高血清中微量元素的含量,降低粪便中金属元素的含量,提高机体的抗氧化性能.