甘蓝型油菜小孢子培养子叶形胚发育成苗研究

甘蓝型油菜小孢子细胞诱导胚状体以子叶胚和非子叶胚如球形胚、心型胚和类似于胚的结构形态存在.子叶胚在成苗培养基上能够快速生长成植株,但是非子叶胚难以一次成苗,容易褐化死亡,因此减少非子叶状胚、培育高质量子叶胚是提高油菜小孢子再生成植株效率的关键步骤.为了提高甘蓝型油菜小孢子培养过程中诱导子叶胚的数目,对3个甘蓝型油菜品系...     

甘蓝型油菜小孢子子叶胚的高频发生

用移栽在普通温室的甘蓝型油菜杂交后供做接种材料，进行小孢子悬浮分步培养，获得了绿色子叶胚的高频发生，平均每蕾最高可获１１０．８个，并直接成苗或形成芽丛。     

春性甘蓝型油菜小孢子培养技术研究

对一批春性甘蓝型油菜(Brassica napus)杂种F1及其亲本进行小孢子培养的结果表明,不同组合(基因型)出胚率差异比较大,2006年22份材料(基因型)中有21份出胚,其中40.91%的材料每蕾出胚数在5个以上,31.82%的材料每蕾出胚数在10个以上;杂交组合的出胚率大部分高于其亲本,主枝的产胚率绝大部分都高于其分枝;秋水仙碱不同处理中以0.6 g/L浓度处理5.0 h和3.4 g/L浓度处理1.5 h,植株成活率和加倍率最高;经秋水仙碱加倍后可育的植株大部分花粉活力较高,结实指数较高;而半可育的植株花粉活力低,并有50%的植株结实指数低于1。     

甘蓝型油菜游离小孢子培养技术研究

利用小孢子培养技术对 78个甘蓝型油菜材料进行了离体小孢子培养 ,其中 5个材料获得了再生植株 ;再生植株自然加倍率只有 1 6 .1 %左右 ,而人工加倍率可达 6 0 %以上。获得遗传稳定的纯合材料 47个 ,并对其进行了农艺性状鉴定及杂交转育和组合配制工作     

甘蓝型油菜小孢子培养的胚诱导和加倍效率的研究

以大田甘蓝型油菜为材料，对小孢子培养不同取样时间和不同开花时期接种的胚状体诱导频率和不同加倍方法的加倍效率进行了研究，结果表明：大田甘蓝型油菜小孢子培养最佳取样时间是上午7：00时，此时取样出胚率达4．31枚／蕾；接种最佳开花时期是单株开第一朵花后6～20d的2周时间，此开花时期接种出胚率为4．08～4．34枚／蕾。在不同加倍方法中，以50mg／L秋水仙碱处理游离小孢子48h为最佳，并且能够获得76．47％最高加倍效率。     

甘蓝型油菜NER游离小孢子培养能力研究

本试验对甘蓝型油菜新胞质不育恢复系(NER)进行游离小孢子培养,对小孢子培养的影响因素作了初步研究,结果表明:不同遗传背景下的甘蓝型油菜NEA不育胞质恢复系(NER)胚产量差异显著,即表明在相同的试验条件下基因型的差异是造成胚产量差异的重要原因.提高小孢子胚发生能力试验表明:在诱导培养基上添加适当的6-BA和NAA有利于小孢子胚的发生;固液双层培养优于液体单层培养;在诱导培养基中添加秋水仙碱加倍处理小孢子胚产量与对照差异不明显.在诱导直接成苗前对子叶型胚进行12h/12h弱光照1～2 d、在生根培养基中添加一定浓度的NAA等处理能提高小孢子胚成苗率.建立了一套新胞质不育材料的小孢子培养优化体系.本文还讨论了提高小孢子胚发生能力的一些有效措施.     

甘蓝型油菜小孢子胚状体诱导的主要影响因素研究

对基因型、小孢子发育时期、高温起始培养、培养基等甘蓝型油菜游离小孢子培养诱导胚状体的主要影响因素,研究表明：基因型和小孢子发育时期起决定性的作用,不同品种间甚至同一品种内的个体间,诱导频率差异显著;适宜培养的小孢子发育时期为单核晚期;培养基中加入活性炭可提高胚状体诱导频率;起始培养高温热击促进胚状体诱导。成熟胚状体在无激素Ｂ５培养基中,直接再生出植株或经次生胚继代培养再生植株。     

人工合成甘蓝型油菜游离小孢子培养及其植株再生研究初报

利用游离小孢子培养技术对5个人工合成甘蓝型油菜品系进行了离体小孢子培养。从大田非控温控光条件下生长的供体植株第一朵花开后3～12d,取长度2．5～3．5mm的花蕾分离小鬼子,在NLN13液体培养基中进行薄层培养诱导成胚状体,然后用无激素的MS培养基诱导植株再生。对不同的供试材料、取蕾时期和培养基蔗糖浓度对小孢子胚胎发生能力的影响作了初步研究。供试的5个材料中有4个对培养有反应,但不同材料的小孢子胚胎发生能力有较大的差异。小孢子取样的时期以主花序第一朵花开后6d左右为宜,培养基蔗糖浓度以13％的效果最好。     

甘蓝型油菜小孢子培养技术优化

为了优化甘蓝型油菜小孢子培养技术,提高胚诱导率及成苗率,以油菜N14009为试验材料进行小孢子培养,研究变温预处理、活性炭浓度、培养基类型和琼脂浓度及秋水仙碱浓度对小孢子培养的影响。结果表明：4℃、32.5℃变温预处理各1 d的处理效果较好,胚诱导率为4.23胚/蕾;活性炭质量浓度为0.5 g/L时,胚诱导率达到4.23胚/蕾,效果最好; MS、B5培养基中琼脂质量浓度为12 g/L时,成苗率均最高,分别达51.16%、46.67%;把再生植株转到含有不同质量浓度秋水碱的MS培养基上培养,质量浓度为80 mg/L时,N14009的加倍率最高,为43.47%,并且成苗率达到76.67%。     

供体材料和培养基成份对甘蓝型油菜小孢子胚状体产量的影响？

以甘蓝型油菜品种（系）和杂种Ｆ１代为材料，研究了供试材料和培养基成分对小孢子胚产量的影响。不同材料胚产量有显著差异，变化范围为０－１２．８６。通常，杂种Ｆ１代胚产量较品种（系）高。同一材料不同单株间胚产量亦有差异。     

甘蓝型油菜小孢子培养影响因素的研究

本实验对四川成都生态区甘蓝型油菜进行游离小孢子培养,对小孢子培养的影响因素作了系统研究,结果表明：小孢子形成阶段的温度及昼夜温差、花蕾消毒液、小孢子培养浓度及株龄都是影响小孢子胚产量的因素,小孢子形成阶段的温度以10-15℃,昼夜温差5℃左右胚产量最高达到300枚/蕾,温度低于5℃或高于20℃胚产量都较低甚至不出胚;花蕾消毒液以0.1%的Hgcl2效果较好,培养浓度以3-4蕾/皿较好;2009年成都生态环境下,株龄从125天到150天,胚产量随着株龄增加而增加,到141天达到最高,后逐渐下降。     

用EMS诱变和小孢子培养快速获得甘蓝型油菜高油酸种质材料的研究

用EMS(甲基磺酸乙酯)溶液诱变甘蓝型油菜的小孢子，离心去除EMS，用秋水仙碱溶液对诱变后的小孢子进行染色体加倍。再离心去除秋水仙碱，用NLN-13培养基进行小孢子培养。当小孢子发育成完整的试管植株后，用幼叶氧化法定性、快速地筛选高油酸突变材料。筛选获得的材料经移栽定植，用气相色谱法精确地分析其种子的脂肪酸组成，得到了一份油酸含量为80．3396％的高油酸突变材料。本研究提高了油酸改良工作中诱变频率，降低测试分析费用。     

提高甘蓝型油菜下胚轴愈伤组织诱导率的研究

采用油菜幼苗下胚轴作为外植体,分析不同品种、苗龄以及激素配比对愈伤组织出愈率的影响。结果表明:相同条件下,扬油6号的出愈率最高;扬油6号在5d苗龄、预培养3d以及加入0.1mg·L-1 2,4-D、1.0mg·L-1 6-BA、5.0mg·L-1 AgNO3条件下的愈伤组织诱导率最高。     

双低油菜浙双72的小孢子培养与植株再生研究

研究了甘蓝型双低油菜品种浙双72及其F1代杂种的小孢子培养.结果表明,浙双72对小孢子培养有较好的反应能力,通过换培养液等方法,小孢子胚状体产量明显提高,达27.1胚/花蕾,而F1代杂种(浙双72×高油605)的胚状体产量为4.4胚/花蕾,胚状体的质量也有明显改善.正常胚状体经过冷击、萌发、生根,获得了大量的再生植株.对再生植株倍性检测表明,浙双72及其F1代杂种中,单倍体占56%左右,自发双单倍体(DH)约占37%,其余约7%是多倍体和嵌合体.     

人工合成甘蓝型油菜的花药培养

对20个基因型的人工合成甘蓝型油菜进行了花药培养.结果表明,在Keller培养基上可以直接诱导出胚状体,胚状体的诱导率与基因型、培养基的添加物等有关.基因型不同,胚状体的诱导率也不同;在培养基中加入活性炭降低胚状体的诱导率,加入0 1mg·L-1的6 BA和0 1mg·L-1NAA能提高胚状体诱导率.     

影响青花菜游离小孢子培养的因素

以10份不同类型的F1代青花菜为试材,研究了基因型、小孢子发育时期的细胞学观察、培养基类型及pH值等对青花菜游离小孢子培养因素的影响.结果表明:基因型是影响青花菜小孢子胚状体产量的主要因素,不同品种间胚胎诱导频率差异显著;花蕾大小与小孢子发育时期有一定的关系,不同基因型之间最适花蕾的长度也有一定的差异;1/2 NLN+130 g蔗糖是青花菜小孢子培养的最佳培养基;培养基最佳pH值为6.2;子叶胚在液体培养基中停留25d为最佳时间;MS培养基中琼脂含量为7.0 g·L-1时胚状体苗的成活率最高.     

影响花椰菜游离小孢子培养因素的研究

以胚胎发生能力不同的花椰菜自交系、双交种及三交种为试验材料,进行了提高小孢子培养效果的研究。结果表明:通过花椰菜高胚胎发生能力的材料与胚胎发生能力低的材料进行有性杂交,能够明显提高胚胎发生困难材料的胚胎发生能力;花蕾长度及花瓣/花药长度比都可以作为确定小孢子发育时期的标准,但花蕾长度会因植株开花时期的不同而变化;植株开花时,10～30℃的生长环境是小孢子胚胎发生的最适宜条件;NLN培养基中添加0.2～1.0 mg/ml的活性炭可以促进胚胎发育。     

EMS对甘蓝型油菜离体小孢子胚胎发生能力的影响

EMS(甲基磺酸乙酯)是烈性致癌物质，对育种者而言，它又是很好的诱变剂。本试验用不同的EMS浓度(0，1．0．1．5．2．0，2．5，3．0mmol／L)和不同时间(12，24，36h)处理甘蓝型油菜的离体小孢子，通过统计每花蕾产胚的数量．观察到随着EMS浓度的增高和处理时间的延长．每花蕾产胚的数量减少，即小孢子的胚胎发生能力减弱。研究得出当EMS浓度为2．5mmol／L．处理时间为24h，每花蕾产胚的数量接近对照产胚数量的一半．根据半致死剂量(LC40)原则，这一浓度和时间对EMS诱变甘蓝型油菜离体小孢子具有重要的应用价值。     

甘蓝型油菜小孢子培养研究

1材料与方法 1．1材料与培养基以甘蓝型油菜NER为试材,分别于2006年9月、2007年9月、2008年9月种植于四川省农科院郫县农场。提取液（B5）：B5大量（KN032500mg／L＋MgSq250mg／L＋CaCl2·2H2O150mg／L＋NaH2PO4·H2O150mg／L）＋B5微量Ⅰ＋B5微量Ⅱ＋KI1000mg／L＋B5有机＋Fe—Salt肌醇100mg／L＋蔗糖130g／L（高压灭菌,置4℃冰箱中备用）。诱导基本培养基（NLN·13）：NLN-13大量＋MS微量Ⅰ＋NLN-13微量Ⅱ＋Fe—EDTA40．0mg／L＋甘氨酸2．0mg／L＋烟酸5．0mg／L＋VB60．5mg／L＋VB．0．5mg／L＋肌醇100．0mg／L＋生物素0．5mg／L＋叶酸0．5mg／L＋L-丝氨酸100．0mg／L＋谷氨酰胺800．0mg／L＋谷胱甘肽30．0mg／L＋蔗糖13％＋NAA0．5mg／L＋6-BA0．05mg／L。分化培养基MS：MS＋蔗糖2％＋琼脂粉6g／L。