用重组抗原与商品化试剂盒对比检测牦牛的新孢子虫与弓形虫感染

用纯化的特异性重组抗原NcSRS2和TgSAG2作为包被抗原,经rELISA方法和商品化试剂盒,对采自新疆部分山区牦牛血清样品分别进行了新孢子虫和弓形虫抗体检测.rELISA检测结果显示,新孢子虫阳性率为5.4％(16/192),弓形虫阳性率为1.7％(5/192),与IDEXX公司新孢子虫试剂盒和北京永辉公司试剂盒符合率分别为98.9％、100％,未发现交叉感染的样品.表明建立的rELISA方法特异性好、重复性良好.     

巴州部分地区黑头羊新孢子虫病的循环抗体检测

运用新孢子虫重组抗原-P36蛋白和P43蛋白作为包被抗原,对采自巴州部分地区的180份黑头羊血清样品进行新孢子虫病rELISA方法检测。结果表明：P36抗原检出率为15.56%（28/180）;P43抗原检出率为18.33%（33/180）。两种抗原平均检出率为16.94%,阳性符合率为84.85%。通过本次试验,基本掌握了巴州地区部分地区黑头羊新孢子虫感染情况,为今后对当地新孢子虫病的调查和预防提供了科学依据和理论支持。     

牛新孢子虫病在新疆地区流行情况调查

为了调查新疆各地区牛新孢子虫病的流行情况,试验应用地方虫株重组蛋白NcSRS2t作为包被抗原建立了rELISA方法,对新疆16个地区41个牛场1 613份牛(包括牦牛)血清样品进行了血清学调查。结果表明:在所采集的1 613份血清中检出阳性血清212份(应用美国IDEXX公司等的商品化试剂盒进行了验证);其中具有流产史的奶牛新孢子虫病感染率为20.4%;不同地区的感染率为4.0%～41.0%,平均感染率为13.1%。说明新疆地区的牛类动物均不同程度地感染了新孢子虫,应该加强综合防治措施。     

青海省平安县羊群中的新孢子虫病的调查

用纯化的GST-NcSAGlt作为ELISA诊断抗原,用于青海省平安县羊群中犬新孢子虫N.caninum 抗体的检测.经过对196份血清样品的检测,检出N.caninum抗体阳性血清10份,阳性率为5.10%.结果初步说明我省平安县的羊群中存在N.caninum感染.     

应用间接ELISA法检测牛（牦牛）原虫病感染的试验报告

为了防治牛（牦牛）细胞内寄生的原虫病——新孢子虫病,我们随机采集了流产牛和非流产牛的血样共91份。用新孢子虫rELISA试剂盒对91份被检样品进行了检测。结果显示,在91份样品中,新孢子虫感染的有13份阳性,其阳性率为14.3％,说明在被检血来源区的牛类动物均感染新孢子虫病,应该加强防范。     

奶牛新孢子虫病的血清学诊断

1984年,犬新孢子虫(Neospora caninum)第一次在挪威的一条狗体内被发现并被报道[1].目前,犬新孢子虫病已经是世界范围内的一种牛和狗的严重疾病[2].欧洲、美洲、澳大利亚、新西兰等国家都有发生,我国周边的日本、韩国等国家和我国台湾地区都有报道.刘群等[3]对北京地区的30头有流产史的奶牛进行调查,结果表明血清中N.caninum的抗体阳性率为26.67%.目前新孢子虫病的研究已成为国外兽医寄生虫学界的热点问题,研究报道较多,其检测试剂已经商品化.     

青海牦牛新孢子虫病的血清学诊断

使用新孢子虫（Neopora caninum）的全虫体速殖子或来自速殖子的抗原出现一些无法避免的问题，由于这些抗原与它相近虫体T．gondii间存在交叉反应，容易产生假阳性。因此，需要建立一个可靠的、敏感的和特异性的诊断方法用来检测N．caninum的特异性抗体。在本研究中进行了ELISA诊断方法的建立，并且用纯化的重组抗原GST-NcSAGlt作为ELISA诊断抗原，进行了牦牛N．caninum抗体的检测。     

奶牛新孢子虫重组蛋白NcSRS2t间接ELISA方法的建立及初步应用

以纯化的犬新孢子虫(Neospora caninum)重组蛋白 NcSRS2t为抗原包被酶标板,通过对间接ELISA 各反应条件的优化,确定了最佳反应条件.采用已建立的间接ELISA反应条件,对218份阴性血清的检测结果进行统计学分析,确定了间接ELISA的判定标准,即OD450nm值大于等于O.32为阳性,小于O.32为阴性.应用建立的间接ELISA方法对128份阴性血清和50份阳性血清(经IDEXX公司新孢子虫抗体检测试剂盒证实)进行检测,结果表明,闻接ELISA方法的特异性为93.0%,敏感性为90.0%.采用本试验建立的新孢子虫间接ELISA 诊断方法对黑龙江省克山、海林、双城、甘南、克东、富裕、牡丹江、大庆等8个县(市)奶牛场的540份奶牛血清进行了检测.结果表明,被检的540份奶牛血清样本中奶牛新孢子虫的抗体阳性率为13.33%.该间接ELISA 诊断方法的建立及初步应用为新孢子虫病诊断试剂盒的研制和新孢子虫病的预防研究奠定了基础.     

新孢子虫dNcSRS2重组蛋白间接ELISA的建立及其应用

利用新孢子虫体外重组表面蛋白dNcSRS2蛋白作为包被抗原，对各项条件进行优化，确定判定标准，建立了检测新孢子虫血清抗体的间接ELISA方法。经对多例血清检测表明，所建立的诊断试剂盒重复性好、特异性强、灵敏度高，与进口的IFAT及两种商品化ELISA试剂盒的检测结果相比较，符合率均达到92％以上。应用建立的ELISA方法对236份奶牛血清的新孢子虫抗体进行检测，阳性率为22％。这是国内首次利用重组蛋白建立的诊断试剂盒，该方法的建立将为牛新孢子虫病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。     

绒山羊犬新孢子虫病的血清学调查

自从1984年第一次在挪威的犬身上认识犬新孢子虫（Neospora caninum）以来，人们又把它描述为一个新的孢子属和种，N．caninum已经在世界范围内广泛流行，并呈现为一种严重的牛和犬的疾病。同时，新孢子虫病已经在羊，山羊，鹿，犀牛和马等动物广泛流行，并且在水牛，红和灰狐，北美草原小狼，骆驼和猫科动物中已经报道发现了N．caninum血清抗体。关于山羊N．caninum相关的流产和新生羔羊死亡率已经在美国的矮型山羊上进行了报道。为了摸清青海省改良绒山羊犬新孢子虫病的感染情况，笔者于2004年12月，进行了青海省海西州乌兰县改良绒山羊犬新孢子虫病的血清学调查，报道如下。     

柴达木地区黄牛新孢子虫病的ELISA检测

牛新孢子虫(N.caninum)感染是一种主要引起妊娠牛发生流产和狗的神经肌肉麻痹的致病病因。N.caninum的表面抗原1(NcSAG1)是一个重要的诊断抗原。为了建立有效的诊断方法,纯化的GST-NcSAG1 t作为ELISA诊断抗原被用在黄牛N.caninum抗体的检测中。经过对221份柴达木黄牛血清样品进行检测,检出N.caninum抗体阳性35份,阳性率为15.84%,说明青海省柴达木黄牛群中存在N.caninum感染。     

温泉县部分奶牛的新孢子虫病和布氏杆菌病血清学调查

为了探究温泉县奶牛流产病因,对采自温泉县4个不同地区的81份血清样品分别进行新孢子虫病和布氏杆菌病检测,其中新孢子虫病应用rELISA方法检测,布氏杆菌病的检测参照国标,被检的81份血清样品中8份血清呈新孢子虫抗体阳性,阳性率为9.88%。其中安格里格乡感染率为18.75%,哈日布呼镇感染率为7.14%,蒙进感染率为0%,塔秀乡感染率为13.04%。没有检出布氏杆菌阳性血样和新孢子虫和布氏杆菌病二者混合感染的流产奶牛血样。检测结果表明:新孢子虫是导致该地区奶牛流产的重要原因之一。     

新孢子虫病与奶牛生产性能关系的研究

1984年Bjerkas等在患脑膜炎和肌炎的幼犬体内发现了一种外被包囊的原虫,形态与龚地弓形虫（Toxoplasma gondii）相似.Dubey等对诊断为弓形虫病的23只患犬的器官标本进行了重新诊断,也发现了这种与T gondii相似但形态结构不同的原虫,并命名为犬新孢子虫（Neospora caninum）.Dubey等从美国墨西哥州一个持续发生流产牛场的胎牛脑组织中分离到类似T gondii的组织包囊,这种组织包囊与抗N caninum的抗体发生反应,而不于T gondii抗体发生发应,认为其为牛流产的病原.Mc Alister在犬粪便里检出N caninum卵囊,证实犬是N caninum的终末宿主.迄今为止,研究报道最多的是奶牛新孢子虫病,它广泛发生于世界各地.     

川西北牦牛新孢子虫感染血清流行病学调查

目的 了解川西北牦牛新孢子虫的感染情况.方法 采用间接ELISA方法对川西北阿坝州8个县1 070份待屠宰牦牛血清中新孢子虫抗体进行检测.结果 被检1 070份血清样品中65份血清新孢子虫抗体呈阳性,样品来源的8个县都检测到了新孢子虫抗体,被检牦牛的血清抗体平均阳性率为6.1％,其中理县(12.2％)的抗体阳性率显著高于平均水平(p＜0.01),马尔康的最低为2.7％.结论 川西北阿坝州各县广泛存在牦牛新孢子虫感染.     

奶牛新孢子虫病血清流行病学调查

本研究用酶联免疫吸附试验（ELISA）对采集自北京地区的94份奶牛血清（随机采集）和河北地区的55份奶牛血清（有流产史奶牛），进行Neospora caninum血清抗体检测。结果发现，北京地区随机采集的奶牛血清N．caninum抗体阳性率为18．1％（17／94），河北地区有流产史的奶牛N．caninum血清抗体阳性率为23．6％（13／55）。采用牛奶记录体系（DHI）对北京地区17头N．caninum血清抗体阳性牛进行了日产奶量、乳中蛋白率和乳脂率的测定，并与同群牛中134头阴性牛比较。结果表明，N．caninum血清抗体阳性牛日产奶量比阴性牛降低9．7％，乳中蛋白率和乳脂率分别降低20％和15．4％。初步证明N．caninum血清抗体阳性奶牛产奶量降低及奶品质的下降。对不同N．caninum抗体滴度阳性牛的泌乳期主要生产性能比较发现，其生产性能的变化与抗体滴度无明显相关性。     

西藏不同地区牦牛新孢子虫病血清流行病学调查及防控措施

为了调查西藏不同地区牦牛新孢子虫病的流行情况,试验采用酶联免疫吸附法(ELISA)对西藏四个地市(拉萨市、林芝市、那曲市、昌都市)牦牛进行血清流行病学调查,并用SPSS 21.0软件对不同地区的抗体阳性率进行显著性分析。结果表明:牦牛新孢子虫病抗体总阳性率为14.95%(68/455)。其中昌都市阳性率最高,为29.12%(53/182);其次是林芝市,为16.48%(15/91);拉萨市和那曲市未检测到阳性样品。从不同地区来看,西藏牦牛新孢子虫病血清抗体阳性率差异显著(P0.05)。说明新孢子虫病在西藏不同地区有不同程度的流行,需要引起相关部门的关注。     

新孢子虫和弓形虫ELISA及western blot检测方法的建立及应用

为建立牛新孢子虫和弓形虫的免疫学检测方法,并调查新疆部分地区牛新孢子虫和弓形虫的感染情况,本研究应用纯化的新孢子虫重组蛋白SRS2(NcSRS2)和弓形虫重组蛋白SAG2(TgSAG2)作为包被抗原,分别建立新孢子虫和弓形虫的ELISA和western blot血清学检测方法,并进行特异性和重复性试验,以其检测662份疑似样品,并与商品化试剂盒检测结果比较验证。特异性和重复性试验结果表明,建立的方法特异性强、重复性良好。采用建立的两种ELISA方法对662份临床样品的检测结果表明,新孢子虫和弓形虫的抗体阳性率分别为13.44%(89/662)和5.29%(35/662);与IDEXX试剂盒和永辉试剂盒的符合率分别为94.11%和95.92%。此外,western blot检测的新孢子虫和弓形虫抗体阳性率分别为5.14%(34/662)和3.17%(21/662);与建立的ELISA检测方法的符合率分别为91.69%和97.89%。本研究为分析奶牛流产的原因提供了一定的依据。     

福建省部分地区奶牛新孢子虫病血清学抗体检测

新孢子虫是造成怀孕母牛流产等繁殖障碍和新生犊牛运动障碍的重要寄生虫之一,目前尚未有有效的药物和疫苗来治疗和预防牛新孢子虫病。本研究使用新孢子虫抗体检测试剂盒对采自福建省漳州、南平、三明和龙岩4个地区规模化奶牛场的1 472份奶牛血清样品进行抗体检测,并通过SPSS 22.0软件进行生物统计学分析。结果表明,血清样品新孢子虫抗体总阳性率为7.47%,4个地区样品阳性率分别为5.57%、5.12%、7.41%和12.97%;不同年龄阶段奶牛阳性率范围为2.93%～9.56%,不同胎次阳性率范围为4.83%～9.50%。经统计学分析,不同年龄阶段奶牛阳性率差异显著（P<0.05）。这表明福建省奶牛普遍存在新孢子虫感染,奶牛场应采取综合防控策略和制定有效的管理措施控制奶牛新孢子虫病。     

牦牛新孢子虫病ELISA检测

牛新孢子虫病是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄生于犬、牛、绵羊、山羊、马等动物的中枢神经系统、肌肉、肝及其他内脏引起的一种原虫病,可使孕畜发生流产或死胎,新生胎儿发生神经系统和运动障碍等[1-3]。犬和郊狼是其终末宿主。新孢子虫隶属顶复门、孢子虫纲、真球虫目,现已广泛分布于北美、欧洲、澳大利亚和新西兰等国家或地区,在羊、山羊、鹿、犀牛和马上广泛流行,且在水牛、红狐、灰狐、北美草原小狼、骆驼和猫科动物中已经报道发现了N.caninum血清抗体。新孢子虫对牛的危害主要是妊娠母牛流产或产死胎、弱胎、木乃伊胎,     

青海省格尔木市乳牛新孢子虫病的血清学调查

用重组蛋白GST-NcSAG1t作为ELISA诊断抗原,对格尔木市乳牛犬新孢子虫病进行了调查.结果,从 35份乳牛血清样品中检出犬新孢子虫抗体阳性血清4份,阳性率为11.42%.检测结果说明,青海省格尔木市饲养的乳牛牛群中存在犬新孢子虫感染.