一种简单、极快的植物叶片DNA提取方法

为了满足分子标记辅助育种中基因型鉴定、基因克隆、测序的需要,本研究借用棉签等具吸附功能的材料代替移液器,依次直接在2种DNA提取液中操作,建立了一种简单、快速、环保的水稻叶片DNA提取方法。结果表明,提取溶液通过PCR扩增,满足基因扩增对模板的要求;同时,对其进行了灵敏度测试,稀释107倍仍然能够扩增出目标片段;最后通过PCR、克隆载体连接等分子生物学手段,验证此方法也满足测序的需要。本方法能够在90s内完成植物叶片DNA的提取,解决了目前植物基因组DNA提取方法需要离心机等昂贵特殊设备、提取步骤繁锁、提取过程中刺激味大、提取时间长等问题,有利于大规模开展分子标记辅助育种中材料基因型的鉴定,具有简单、快速、廉价、环保等优点。     

富含多糖的转基因石斛基因组DNA提取方法(英文)

在石斛兰转基因研究中,需通过PCR和Southern杂交等手段检测外源基因是否转入并整合到转化植株基因组.由于转化石斛植株生长缓慢,且含有多糖,因此从转化植株中提取高质量的基因组DNA以尽快对转基因苗进行分子检测存在较大困难.本研究旨在通过改良现有的DNA提取法(CTAB法或SDS法1,克服转化石斛植株基因组DNA提取中碰到的产量低,纯度不高而导致难以进行PCR或酶切等问题.在本研究所用的3种改良法中,方法Ⅱ能从少量的转化石斛苗中提取出高产量和高纯度的基因组DNA.研究结果表明方法Ⅱ提取的基因组DNA完全适用于转基因石斛的外源基因PCR扩增,限制性酶切和Southern杂交分析.     

动物源性食品中猪源性成分检测

为探讨猪源性成分检测可行的方法,利用SYBR Green I Real time PCR对动物源性食品中猪源性成分进行测定。根据猪mtDNA保守序列设计特异性引物,对牛、羊、猪的动物源性食品进行扩增;克隆目的基因片段,并以此为标准品,优化反应条件和反应体系,提高灵敏度;反复检测不同样品,测试稳定性。结果表明SYBR Green I Real time PCR技术能够特异性的检测到动物源性食品中猪源性成分,引物特异性强、稳定性可靠,灵敏度达到1×10^-6 ng/μL,建立了动物源性食品中猪源性成分的快速、精准、经济、便捷的检测方法。     

食品中两种沙门氏菌检测方法的比较

目前，我国现行有效的食品安全国家标准中针对食品中沙门氏菌的检测主要是传统的微生物学检测法，该方法操作繁杂，检测周期较长，已难以满足国内外对食品安全检测的要求。通过使用微生物学检测法和PCR法共同检测样品中沙门氏菌，比较两种方法在检测时间和检测结果准确性上的差别。试验结果说明，两种方法都能准确检测出含沙门氏菌的阳性样本，其中PCR法具有检测时间更短、特异性更强、灵敏度更高、操作更简单、成本更低的优势，可用于快速、准确地检测食品中沙门氏菌。     

转耐盐基因水稻的PCR检测方法及其分子辅助育种

研究采用改良CTAB法和磁珠自动提取法提取水稻种子基因组DNA,通过对水稻内源SPS基因、ThST3和Ubiquit-in启动子间构建特异序列进行PCR扩增,扩增产物结合排枪凝胶电泳实现快速检测。其中PCR扩增内源SPS基因的结果表明,采用改良CTAB法和磁珠自动提取法可用于市售水稻种子和转基因种子的DNA提取。实验合成的构建特异引物以及建立的PCR扩增反应体系能特异性地检测转耐盐基因水稻Theli。该方法检测灵敏度高,绝对检测低限达17.3×10-2ng,相对检测低限为0.41%,能有效地对转基因水稻ThST 3进行鉴定;稳定性好,可完全满足转基因水稻的定性检测、监督和标识管理需要。同时可用于对转基因水稻的辅助选择(MAS)育种。     

抗旱水稻种子转基因成分检测技术研究

利用组织研磨仪快速处理水稻种子样品,采用高通量的磁珠纯化系统提取样本DNA,提取的核酸通过紫外吸收检测其纯度,应用普通PCR检测方法和实时荧光PCR方法对水稻内源基因SPS、靶基因ATAF1进行检测。结果表明,普通PCR方法和实时荧光PCR方法均表现快速、准确、特异性高的特点。     

沙门氏菌和金黄色葡萄球菌DNA提取方法的比较

采用水煮法、试剂盒法、改良CTAB法、DNA提取液法及TEX裂解液法提取沙门氏菌和金黄色葡萄球菌基因组DNA,比较5种方法提取的DNA品质,选取适用于农产品中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌多重PCR检测的DNA提取方法。结果表明,TEX裂解液法提取的DNA纯度高、操作简单、省时省力、成本低,提取的沙门氏菌基因组DNA纯度为1.88,质量浓度为412.6 ng/μL;金黄色葡萄球菌DNA纯度为1.84,质量浓度为366.7 ng/μL。以TEX裂解液法提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增,电泳检测扩增产物有清晰的目的条带。     

基于PCR技术快速检测食品微生物的原理 方法与应用

传统的食品微生物检测方法费时、操作复杂,因此,针对食品中的致病和致腐微生物的快速检测方法已成为国内外学者的研究热点。PCR(聚合酶链反应)方法应用于微生物检验,具有快速、特异性强、灵敏度高等突出优点,因此越来越得到学术界的重视。详细阐述了基于PCR技术进行食品微生物快速检测的原理、方法及应用。     

PCR技术检测食品与饲料中动物源成分

利用多重PCR和单重PCR技术对部分市售肉制品、宠物食品以及饲料等进行检测,以确定产品中是否含有动物源性成分以及动物源性成分的种类.利用SDS细胞裂解法提取样品DNA,用琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物的种类.上述方法具有操作简便,快速准确,节省费用等特点.     

一种适于PCR检测病毒诱导基因沉默番茄植株的微量DNA提取方法

【研究目的】为了寻找一种适用于病毒诱导的基因沉默番茄叶片PCR检测的快速、简单、成本低的DNA提取方法。【方法】笔者根据PCR反应的要求,用改良的CTAB法,实现了微量番茄叶片基因组DNA的快速提取。【结果】提取基因组DNA所用的组织量虽少,所得的DNA经过电泳检测虽有降解,但足以用于PCR检测,以其作模板扩增中国番茄黄化曲叶病毒诱导的硫黄素酶(Su)基因沉默植株中病毒组分中的DNAmβ和1.7A,片段大小分别为500bp、1300bp。测序结果证明是相应基因的部分片段。【结论】该方法的材料不需要使用液氮,可以单人大批量提取,并在基因沉默的番茄植株中能稳定而准确的规模化PCR检测。     

基于天然可视化气敏材料的猪肉腐败变质检测

食品腐败变质是引起食品安全问题的重要原因之一,为了探索绿色、快速的食品腐败变质检测和监测方法,提出以天然色素为新型气敏材料的气味可视化检测方法。以桃花、映山红、紫薯、黑米为原料,采用无毒无害方式提取其中的天然色素(桃花色素、映山红色素、紫薯色素和黑米色素),并研究了4种天然色素在不同pH值条件下的显色特性;选取对pH值显色敏感的天然色素作为气体敏感材料,固定于基底材料制成可视化传感器;并用于检测猪肉变质过程中产生的气味。结果表明,以天然色素为气敏材料的可视化传感器能够检测食品腐败变质产生的气味。该新型传感器与文献已报道的可视化传感器相比,具有不包含对人体有害的化学成分,检测过程中不会污染检测样本等优点,但应用时应避光。     

免疫分析技术在农药残留快速检测中的应用及研究进展

为解决色谱法等常规方法在农药残留检测中耗时长、成本高等问题,提出了基于免疫分析的简便快捷、高选择性和高灵敏度的农药残留快检分析方法。综述了常用的农药残留快速检测技术,包括酶联免疫吸附测定、荧光免疫分析、免疫层析、免疫磁珠、仿生免疫分析及生物条形码技术等的作用原理、特点及研究进展。不同的方法有着各自的优缺点和适用范围,而分子印迹、纳米技术和基因检测技术的快速发展,为农药残留免疫分析提供了较高的灵敏度和准确度。建议基于免疫分析技术的自身优势,结合新技术并不断完善,进而在农药残留快检领域发挥重要作用。未来在农产品质量安全检测和控制上,开发简单便携的小型化和集成化检测手段,提高方法和仪器的稳定性和灵敏度成为农药残留快速检测的发展趋势。     

ELISA对动物性食品中恩诺沙星残留的快速筛选

应用竞争酶联免疫法(ELISA)能够快速对动物性食品中的恩诺沙星残留进行检测筛选。与其他检测方法相比,ELISA具有适用范围宽、样品预处理简单、批处理量大、检测速度快、准确性高和重复性强的特点,特别适用于基层大规模筛选和现场监控。     

ATP检测方法研究进展

摘 要：三磷酸腺苷(ATP)和其水解化合物(ADP、AMP)在动物和植物体研究中应用价值突显,目前广泛用于临床医学研究、食品等领域。为更好的掌握ATP在动物和植物体中的含量检测方法的研究进展,本文分析了国内外现有ATP的各种提取、检测方法以及应用情况,并归纳总结了各种检测方法的优缺点,其中涉及目前国内外ATP最新检测技术,指出在相当一段时间内利用高效液相色谱技术检测ATP仍然是主流。为日后进一步开发出更准确、方便快捷的检测方法奠定基础,最后展望能运用各种研究方法和手段为ATP的检测开发出高效稳定的检测技术方法。     

转基因玉米转化体特异性寡核苷酸芯片测试方法的研制

根据7种转基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和NK603的重组DNA结构,利用Primer premier 5.0引物设计软件分别设计转化体特异性引物,优化PCR反应条件,对引物特异性及灵敏度进行验证。结果表明,所设计引物特异性强,灵敏度达0.1%。在植物基因组与外源基因的连接区域,利用Primer premier 5.0和Oligo 6.0软件分别设计和筛选7种转基因玉米40mer oligo转化体特异性探针,制备转基因玉米的寡核苷酸芯片,并对芯片检测的特异性、重复性及检测灵敏度进行检验。证明所设计探针特异性强,灵敏度达0.01%。与PCR检测方法相比,基因芯片检测法灵敏度高、特异性强,可有效检测及鉴定多种转基因玉米,大大提高检测的准确率和效率。     

高职食品检测技术学习领域课程的改革与探索

新课程开发是高职教育改革的难点,根据食品检验相关工作岗位的技术要求,食品检验学习领域必须开发新的课程,以适应其发展需要。就食品检验学习领域的食品安全快速检测技术、动植物源食品检疫技术及食品检测质量控制与管理等新课程的定位、开发进行了探讨。     

噬菌体展示技术在食品科学领域的应用进展

分析概括了噬菌体展示技术在食品科学领域的几个热点应用方向。在食品安全检测领域,噬菌体展示技术可作为一种高效的抗体（或其它亲和配体）制备技术应用于免疫学快速检测技术的建立;也可以用于抗原表位筛选,制备有毒检测对象的替代品,进而建立食品安全无毒检测技术。在食品加工领域,噬菌体展示技术除可以通过制备抗体应用于食品加工干扰物质的检测与消除外,还可以用于酶的定向进化改造,进而为食品工业提供适宜的酶制剂。此外,噬菌体展示技术在食品功能因子制备、新型食品防腐剂生产等领域也同样可以发挥其优势。     

SPR生物传感技术在农产品安全检测中的应用

表面等离子共振作为近几年在国内发展起来的一种检测技术,具备检测样品用量少、灵敏度高、检测速度快等优点,已被用于环境检测、医疗诊断、药物筛选、蛋白质组学、基因组学等诸多领域。随着技术的发展,广大学者将其与生物技术结合起来,在传感芯片表面修饰不同的特异性抗原抗体及信号放大因子,将表面等离子共振技术不断应用到农产品安全的检测中。通过介绍该技术在农产品中农残药残、动物疾病、微生物、食品添加剂、重金属及转基因检测的应用情况,以期使读者深入了解表面等离子共振技术在食品安全检测的发展现状,为其在该领域的进一步发展提供可以借鉴的资料。     

水仙花叶病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

旨在建立水仙花叶病毒(Narcissus mosaic virus,NMV)的分子快速检测方法。根据已公布的NMV基因序列,设计一对特异性引物,以提取的水仙样品总RNA为模板进行RT-PCR,并对该方法的特异性、灵敏度、重复性及实际检测效果进行测定。从感染NMV的水仙样品中成功扩增出预期大小（约483 kb）的特异性目的片段,而健康水仙上未扩增到相应的片段。特异性、灵敏度及重复性测定结果表明,本研究建立的RT-PCR方法特异性强、灵敏高、重复性好。应用该方法成功检测了一批口岸送检的水仙样品。本研究建立的RT-PCR方法可为水仙上NMV的检测提供可靠的技术支持。     

一种快速提取小麦基因组DNA的改良CTAB方法

旨在寻求一种微量、快速提取小麦DNA的方法。以小麦幼叶为材料,用改良CTAB法、改良SDS法、沸水浴法提取小麦叶片总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳法、紫外吸收法和PCR检测DNA完整性和纯度。改良CTAB法提取小麦基因组DNA质量和纯度高、无降解,每人每天可以轻松提取200个DNA样品,对转基因植株的PCR检测显示扩增目标条带清晰一致,无假阳性,试验结果理想。改良SDS法所提DNA纯度和浓度虽略不如改良CTAB法,但仍然符合实验要求。沸水浴法提取量少且杂质多,PCR无有效扩增,结果不理想。改良CTAB法提供了一种简便、快速微量小麦DNA提取方法,适用于PCR和其他分子生物学研究。