五种拘杞植物胚乳培养三倍体的诱导研究

选取宁夏农林科学院枸杞研究中心培育的5种优质枸杞品种(系),研究了不同激素配比的培养基以及胚因子对不同基因枸杞胚乳诱导及分化的影响,以选择适合不同品种枸杞胚乳植株再生的最佳条件,从而进行三倍体育种。结果表明:5种材料都诱导出了愈伤组织,在不去胚情况下,最高诱导效率达到80.0%;将愈伤组织分别转入5种激素配比的分化培养基中,MS+0.2 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA+3%蔗糖+0.4%琼脂为最适分化培养基,且宁杞3号分化率最高达10.7%;将分化出的绿色小芽转入1/2MS+0.01 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA生根培养基中诱导生根,15 d后形成再生植株。     

茄子遗传转化植株再生体系的优化

以4个茄子品种的下胚轴和子叶为外植体,通过不同外源激素种类和浓度组合筛选,对茄子遗传转化过程中外植体脱分化诱导、植株再生及生根培养基进行优化,探索建立较为通用完善的茄子遗传转化植株再生体系。结果表明,茄子下胚轴的再生能力要显著高于子叶,不同茄子品种间的分化能力差异明显;最佳愈伤诱导培养基为MS+ZT 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L,最佳植株再生分化培养基为MS+ZT 0.5 mg/L,最佳生根培养基为1/2 MS+NAA 0.1 mg/L。     

大蒜未受精子房离体诱导单倍体的研究

 以苍山大蒜品种‘糙蒜’为试材,通过花茎离体培养获得发育健壮的花器官。以其未受精子房为外植体进行离体培养,研究不同培养基（MS、B5、N6）及外源植物生长调节剂对单倍体诱导的影响,以建立大蒜单倍体诱导体系。结果表明,诱导未受精子房产生愈伤组织的适宜培养基为B5 + 2 mg · L^-1 6-BA + 1 mg · L^-1 NAA,愈伤组织及雌核发育胚总诱导率可达12.24%;诱导愈伤组织分化不定芽的适宜培养基为B5 + 3 mg · L^-1 6-BA + 1 mg · L^-1 NAA,不定芽分化频率可达46.15%;将不定芽转移至B5 + 0.05 mg · L^-1 NAA培养基中可诱导生根,发育成完整植株。以再生植株叶片为材料,采用流式细胞仪进行倍性鉴定,所得18株再生植株中有16株为单倍体植株。     

夏堇悬浮细胞培养与植株再生研究

以夏堇品种“小丑”的组培苗幼嫩叶片为试材,进行愈伤组织诱导、细胞悬浮培养及植株再生诱导的研究.结果表明:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L2,4-D的培养基能够使叶片诱导为生长迅速、质地疏松的愈伤组织.愈伤组织最适宜的悬浮培养条件为:MS+ 1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L 2,4-D液体培养基,20 g/L的起始接种量以及100 r/min的震荡培养.将继代3～4次的细胞悬浮颗粒转到1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA的固体再生培养基上培养,3周后可以诱导分化出芽,进而获得完整植株.悬浮培养有利于夏堇愈伤组织的再生,悬浮培养对提高以夏堇作为模式植物进行的相关研究具有重要的应用价值.     

葡萄原胚团的诱导、保存、扩繁及其细胞学观察

【目的】通过诱导、保存和扩繁葡萄原胚团,为葡萄外源基因转化及基因编辑研究提供受体材料。【方法】以4个欧亚种葡萄品种和1个野生种葡萄的花器官为材料,比较不同外植体在3种培养基上胚性愈伤组织的诱导率,通过二次再生途径诱导、保存和扩繁次生原胚团并利用改良苯酚品红染色法对其进行细胞学观察。【结果】‘无核白’葡萄的雄蕊接种在PIV培养基上胚性愈伤组织诱导率最高(10.8%);初生原胚团细胞核大、染色深且具有旺盛分裂能力,二次再生途径诱导的次生原胚团具有同样的细胞学特征且可以正常成苗。【结论】葡萄体细胞胚诱导受基因型、外植体类型影响显著;二次胚再生途径可以长期诱导、保存和扩繁原胚团,能为葡萄遗传转化持续提供受体材料。     

刺葡萄愈伤组织的诱导和分化培养

以刺葡萄叶片为材料,在1／2MS培养基上附加不同种类及浓度配比的植物激素,研究叶片愈伤组织的诱导及分化培养。实验结果表明：叶片愈伤组织的诱导较容易,最佳诱导培养基配方为以ZT1．0mg／L＋2,4-D2．0mg／L,诱导率可达100％,光培养条件下刺葡萄叶片愈伤组织的诱导率比暗培养的诱导率高。继代培养愈伤组织能诱导出根,但诱导出芽不易,刺葡萄叶片再生植株较难。增殖培养ZT以1．0mg／L＋NAA0．01mg／L为佳,1周增殖率可达1．292％。     

野生细叶百合组织培养体系的建立

以细叶百合为试材,采用组织培养的方法,研究细叶百合不同部位、不同激素配比及不同发生途径对获得细叶百合再生植株的影响。结果表明:以鳞茎为外植体,通过器官发生途径获得再生植株,其最佳分化及增殖培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L;以花器官、幼嫩叶片为外植体通过体细胞发生途径获得再生植株,其愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D2.0mg/L+NAA 1.5mg/L,不定芽诱导培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.1mg/L,最佳增殖培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L,生根培养基为1/2MS+NAA 0.1mg/L。     

紫花苜蓿组织培养高频再生体系的建立

以紫花苜蓿品种“甘农1号”的子叶为外植体,研究了不同培养基和不同浓度激素对紫花苜蓿愈伤组织诱导、分化及生根的影响.结果表明:最佳愈伤组织诱导培养基为NSH+2,4-二氯苯氧基(2,4-D)4 mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.4 mg/L+3％蔗糖+0.7％琼脂;最佳诱导愈伤组织分化培养基为MS+2％蔗糖+0.7％琼脂;最佳诱导无根苗生根培养基为1/2MS+萘乙酸(NAA)0.2 mg/L+1％蔗糖+0.7％琼脂;再生植株适宜的移栽基质为营养土∶草炭∶蛭石=1∶2∶1.该研究建立了一个紫花苜蓿稳定的高频再生体系,为其作为转基因受体奠定了基础.     

麻江红蒜茎尖愈伤组织诱导及植株再生研究

采用不同激素配比对麻江红蒜茎尖愈伤组织诱导及植株再生进行研究.结果表明:茎尖愈伤组织诱导的适宜培养基为:B5+2,4-D 2.0 mg/L;不定芽诱导的适宜培养基为:B5+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L;不定芽增殖的适宜培养基为:B5+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L;适宜的生根培养基配方为B5+6-BA 0.01 mg/L+NAA 0.1 mg/L.     

丽格海棠叶片培养胚状体发生和植株再生

 利用丽格海棠盆栽植株叶片培养, 成功地诱导出胚状体并获得再生植株。具体步骤如下: Ⅰ. 在MS + BA 1 mg/L + NAA 4 mg/L + 2 ,42D 1 mg/L 培养基上预诱导10 d ; Ⅱ. 在MS + BA 1 mg/L 培养基上胚性细胞发生胚状体; Ⅲ. 在MS + IBA 0. 5 mg/L 培养基上小植株生根。组织切片观察表明, 胚状体起源于叶片上表皮细胞。     

紫叶挪威槭再生体系建立

以紫叶挪威槭2年生枝条水培后展开1~2片小叶的萌发芽为试验材料,采用无菌条件下组织培养的方法,研究了紫叶挪威槭外植体材料不同的消毒方法和时间,不同的不定芽和不定根分化培养基对再生体系建立的影响,以期低污染、高效的建立紫叶挪威槭的再生体系。结果表明:萌发芽经2%洗涤灵溶液洗涤,无菌水冲洗,去除残留,70%乙醇处理30s,无菌水冲洗5~6次,1%次氯酸钠消毒液处理20min,无菌水冲洗5~6次,接种到不定芽分化培养基MS+0.05mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+0.3g/L CH(水解酪蛋白)+2.0g/L PVP+30g/L蔗糖(pH5.5)诱导并产生不定芽。不定芽继代至不定根分化培养基MS+0.4mg/L IBA+0.05mg/L NAA+0.3g/L CH+2.0g/L PVP+25g/L蔗糖(pH 5.5)诱导形成不定根,建立了紫叶挪威槭的植株再生体系。     

大岩桐腋芽丛生的诱导及植株再生

用大岩桐茎段为外植体,以MS为基本培养基,对添加不同浓度和比例的外源激素对大岩桐腋芽丛生的诱导、增殖及植株再生的影响进行探讨.结果表明:腋芽丛生诱导培养基以MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.2 mg/L效果最佳;腋芽增殖培养基以MS 6-BA 3.0 mg/L N从0.2 mg/L效果最佳;生根培养基以1/2 MS NAA 0.2 mg/L效果最佳.     

辣椒子叶高效植株再生体系的建立

 以双丰等17 个辣椒品种为试材, 探讨了不同基因型、激素组合、有机成分及AgNO3 等因素对子叶再生的影响。观察到DJ 添加物(辣椒幼苗茎叶提取汁液∶卡那霉素= 500∶1) 对不定芽的分化及伸长有明显的促进作用, 比对照分别提高10. 0 %～11. 1 %和90. 5 %～133. 3 %。筛选出高效芽分化培养基为MB+ IAA 1. 0 mg/L + 62BA 5. 0 mg/L + DJ 5 000. 0 mg/L + AgNO3 10. 0 mg/L , 17 个品种平均芽分化率达92. 3 %;高效芽伸长培养基为MB + IAA 1. 0 mg/L + 62BA 5. 0 mg/L + DJ 5 000. 0 mg/ L + AgNO3 10. 0 mg/ L + GA3 2. 0 mg/ L , 17 个品种平均芽伸长率达57. 8 %; 高效生根诱导培养基为MS + IAA 0. 2 mg/ L + NAA 0. 1 mg/ L ,生根率达90 % , 建立了辣椒子叶高效植株再生体系。     

利用细胞筛选方法获得番茄抗晚疫病突变体的研究

以番茄品种Alpatieva 90 5a和品系Line 1的子叶、下胚轴为外植体诱导愈伤组织进行细胞育种 ,培养基中附加不同浓度的制霉菌素 (Nystatin)用于突变体的筛选 ,结果表明 :两个品种制霉菌素的临界致死浓度 (仅存活 2 %微型愈伤组织时的浓度 )分别为 14 0mg/L和180mg/L。再生植株分别在培养皿内 (试管苗 )和温室等条件下进行了抗晚疫病鉴定 ,其突变体抗病性明显高于对照     

果用香蕉薄片外植体植株再生的研究

 利用薄片培养方法, 通过直接和间接器官发生途径分别获得了‘广东631’香蕉的再生植株。该途径受多种因素影响。通过正交试验和单因子试验确定了最佳培养条件: (1)直接器官发生培养基为Ma (MS modified) + BAP 10μmol/L + KT 50μmol/L + IAA 1μmol/L ; (2)愈伤组织诱导培养基为Mb (B₅ modified) + Dicamba 10μmol/L + IAA 1μmol/L + 2 ,4-D 0. 7μmol/L + NAA 0. 5μmol/L + BAP 4. 4μmol/L + 活性炭1 g/L ; (3) 愈伤组织继代培养基为Mb + Dicam-ba 5μmol/L + IAA 1μmol/L + 2 ,4-D 0. 4μmol/L + BAP 22μmol/L + KNO₃ 500 mg/L + 维生素B₁ 40 mg/L + 活性炭0. 5 g/L ; (4) 分化培养基为1/ 2 Ma + BAP 1μmol/L + IAA 0. 5μmol/L + 活性炭1 g/L ; (5) 成苗培养基为Ma + BAP 1μmol/L + KT 4. 6μmol/L + NAA 1μmol/L。愈伤组织诱导和继代培养需在黑暗中进行。     

美人指葡萄不定芽离体诱导再生植株的研究

6-BA、TDZ与IBA不同浓度组合对美人指葡萄叶片、叶柄和茎段不定芽离体器官发生途径诱导再生植株有不同的影响。以茎段为外植体在MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L培养基上分化效果最好,再生率75.00%;叶片、叶柄分别在MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.10mg/L和MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.05mg/L培养基上分化效果较好。TDZ和IBA研究的几种组合都能诱导不定芽再生,但再生率不高。     

水芋体细胞胚胎发生及植株再生体系的建立

以水芋幼叶为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基,建立了水芋体细胞胚胎发生体系。对不同阶段培养材料的形态结构及超微结构的观察证明了水芋体细胞胚胎的发育过程。结果表明：水芋叶片胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜培养基为：LS＋6-BA0．5mg／L＋2,4-D2．0mg／L,诱导率为98．5％;体胚发育及植株再生最适宜的培养基为：IS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．5mg／L＋IAA 10mg／L,体胚萌发率为96％,萌发的体胚在发育培养基上继续培养25d后全部发育成完整植株。     

三个基因型黄瓜品种未授粉子房胚状体诱导及植株再生研究

以3个品种黄瓜的未授粉子房为外植体,进行胚状体诱导和植株再生研究.结果表明:3个品种都获得了再生植株.不同品种、不同热处理时间和不同TDZ浓度以及外植体的切割方式对胚状体诱导率都有影响.不同品种及不同6-BA和NAA浓度组合对植株的再生率有影响.热处理3 d,外植体为条状,TDZ浓度在0.06～0.08 mg/L时这3个品种的胚状体诱导率较高.NAA浓度为0.05 mg/L,6-BA浓度为0.4～0.6 mg/L时有利于胚状体分化植株.     

茄子的组织培养和植株再生体系研究

以2个茄子品种：红茄和紫长茄的子叶和下胚轴为外植体,探讨了不同生长调节物质对外植体分化的影响和不同品种、不同外植体的分化能力差异,并建立了茄子的高频率离体再生体系。结果表明：培养基MS＋2,4-D 1.0 mg/L＋6-BA 0.5 mg/L诱导愈伤组织效果最好;诱导不定芽方面,培养基MS＋4-PU 0.1 mg/L诱导效果最好;1/2MS培养基较MS培养基更适合植株生根。     

彩色马蹄莲的离体快繁技术研究

以彩色马蹄莲的叶片和块茎作为外植体进行离体快繁研究,研究外源激素6-BA、NAA对彩色马蹄莲不同外植体诱导愈伤组织和分化的影响,筛选出适宜的培养基配方,建立彩色马蹄莲离体快繁体系.结果表明:MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L是适宜的继代增殖培养基;在培养基1/2 MS+0.5 mg/L NAA上可诱导无根系植株产生大量根系,形成完整植株.