两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒对疫苗免疫猪血清抗体检测的比较试验

为了比较两种猪瘟病毒抗体检测试剂盒对猪瘟疫苗免疫抗体的检测结果,本试验将27头猪瘟抗体阴性仔猪免疫猪瘟活疫苗后7、10、14、17、20、23、27、30、34 d共9个时间点采血,分别用两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测,同时采用OIE指定方法-荧光抗体病毒中和试验对检测结果进行验证。结果表明,虽然两种试剂盒均可在免疫后30 d 100%检测到免疫猪体内的猪瘟抗体,但国产试剂盒在疫苗免疫后第10天便可在6/21猪体内检测到猪瘟抗体,20 d时抗体检测全为阳性,而美国IDEXX公司的试剂盒在疫苗免疫后27 d才在11/21猪体内检测到猪瘟抗体,30 d时才全部变为阳性,而两种试剂盒对6头阴性对照猪血清连续跟踪检测34 d均为阴性。由此可以得出结论:国产试剂盒在疫苗免疫后的早期抗体检测中敏感性明显高于IDEXX公司的试剂盒。     

应用三种方法筛选猪瘟抗体阴性猪的比较试验

为了寻找筛选猪瘟抗体阴性猪更简便的方法,本试验应用猪瘟中和试验(SN)、阻断ELISA和正向间接血凝(IHA)三种方法分别对170份未经猪瘟活疫苗免疫的仔猪血清进行猪瘟抗体检测。结果显示,SN、ELISA和IHA检测出的猪瘟阴性血清分别为144份、150份和131份,表明三种检测方法有较好的符合率,其中SN与ELISA的检测符合率为90.59%,SN与IHA的检测符合率为82.94%,而ELISA法与另两种方法比较阴性符合率最高。本结果表明,ELISA法具有较高的敏感性,适合应用于猪瘟活疫苗安全检验抗体阴性猪的筛选。     

猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较试验

目前国内外的猪瘟ELISA抗体检测试剂盒种类繁多,为了给实际使用提供参考依据,用猪瘟病毒阴性、弱阳性、强阳性血清参考品为标尺,比较了14种国内外猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的符合率。结果表明,6种阻断ELISA试剂盒符合率均可达到100%,在敏感性和特异性上整体优于间接ELISA试剂盒。     

猪瘟野毒感染抗体阻断ELISA检测方法的建立与初步评价

以猪瘟野毒E2蛋白为包被抗原、辣根过氧化物酶标记的猪瘟野毒单抗作为酶标抗体,建立检测猪瘟野毒抗体的阻断ELISA方法.猪瘟野毒E2最适包被浓度为0.03 μg/mL,待检血清最适稀释度为1∶4,酶标猪瘟野毒单抗稀释度为1∶1 000.用建立的阻断ELISA方法检测369份临床阴性血清,计算阻断率,确定临界值,阻断率＞4...     

猪瘟疫苗田间免疫效果监测

为准确掌握猪瘟疫苗免疫效果,2010-2012年对投放安徽省的猪瘟疫苗免疫效果进行了监测。采用抗体阻断ELISA方法,检测了454个猪场7439份免疫猪瘟弱毒活疫苗1个月左右的血清中猪瘟免疫抗体水平。结果显示,安徽省猪瘟疫苗免疫效果总体良好,免疫抗体合格率超过了70％：脾淋组织苗和细胞苗免疫效果相当,但脾淋组织苗免疫效果稳定,细胞苗免疫效果稳定性较差：不同厂家疫苗免疫效果参差不齐。     

IHA与ELISA检测猪瘟病毒抗体的比较

应用间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪瘟病毒抗体,IHA试验以1∶16为判定孔,抗体效价大于或等于1∶16为抗体阳性;ELISA试验以抗体阻断率40%为判定标准,阻断率大于或等于40%为抗体阳性,同步检测了122份规模化猪场不同阶段免疫猪血清.结果ELISA检测抗体阳性率比IHA检测抗体阳性率低,阴性、阳性相符的血清数为92份,相关性为 75.4%,不同抗体水平分布的血清数也不同,个别血清出现较大差异,卡方检验P值为0.13(＞0.05),两种检测方法统计上无差异,研究结果为选择猪瘟病毒抗体检测方法提供参考.     

用ELISA检测接种猪瘟疫苗猪的血清抗体

用ＥＬＩＳＡ检测了接种猪瘟疫苗猪的血清抗体。共计４８６份猪血样,检测到血清抗体阳性者４４１份,阳性率为９０．７４％。同时对其中的１１１份血清进行了自然强毒血清抗体的检测,检测到强毒抗体阳性４份,阳性率为３．６０％。结果表明青海省猪瘟疫苗注射密度较高,但也反映出在青海省猪群中可能存在猪瘟自然强毒感染。     

禽流感病毒夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感病毒（AIV）夹心ELISA快速检测方法组装成诊断试剂盒。试剂盒由1～11号试剂、一块酶标板和一份说明书组成。对试剂盒内各组份进行了特异性、敏感性、重复性及保存期的测定。结果表明．在-10℃下能保存6个月．而且特异性强、敏感性高、重复性好，操作简单．方便．能快速、准确地检测出样品中是否带有AIV抗原。先后制备了8个批次的诊断试剂盒．于湖北、安徽及河南等地的养禽场、兽医站、农科院、农业院校等化验室应用．取得了良好的效果。     

酶联免疫检测试剂盒应用于牛奶中四环素残留的测定

为了加强牛奶中四环素残留量的监控，以四环素-卵清白蛋白为包被抗原，四环素-牛血清白蛋白免疫的产生的抗血清为抗体，辣根过氧化物酶-羊抗兔IgG为酶标记物，研制了四环素快速酶联免疫分析试剂盒，在3．9-2000ng/mL四环素标准浓度范围内，呈线性相关，相关系数为0．9882，批内误差小于批间误差，但其变异系数均在10％以下。与土霉素、金霉素的交叉反应分别为24.31％、6．22％。该试剂盒具有快速、灵敏、准确的特点，适用于牛奶中四环素残留量的快速筛选测定。     

牛奶中替米考星间接竞争酶联免疫吸附检测法的建立

本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑制浓度(IC₅₀)为2.1 ng/mL,牛奶中替米考星的最低检测限(LOD)为2 μg/L。在5、10和20 μg/L添加浓度下,回收率为79.2%~90.1%,变异系数不高于9.0%。与其他常见的大环内酯类药物无交叉反应。本研究建立的替米考星间接竞争ELISA方法灵敏度达到了残留限量标准要求,为开发可用于牛奶中替米考星的快速检测试剂盒奠定基础。     

Establishment of Indirect Competitive Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Tilmicosin in Milk

An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting tilmicosin residue in milk was developed and applied to milk samples after the determination of dilution of coating antigen and antibody to timicosin by using checkerboard method,and the optimization of coating condition,reaction time and temperature,and reaction time of enzyme-labled secondary antibody.The results showed that the 50% inhibition concentration (IC₅₀) of the indirect competitive ELISA was 2.1 ng/mL and the limit of detection (LOD) of tilmicosin in milk was 2 μg/L.The recoveries of tilmicosin added in milk at 5,10 and 20 μg/L ranged from 79.2% to 90.1% with the coefficients of variation (CV) not higher than 9.0%.The indirect competitive ELISA would not react with other common macrolide drugs.The sensitivity of indirect competitive ELISA developed in the study complied to the maximum residue limit of tilmicosin set by China,and laid the foundation for the test kit of the rapid detection of tilmicosin in milk.     

饲料中沙丁胺醇酶联免疫前处理方法的探究

为探讨酶联免疫法(ELISA)检测饲料中沙丁胺醇(salbutamol,SAL)的前处理方法,试验对提取液的pH、离子强度、有机溶剂浓度及样品稀释倍数等条件进行了考察,选取最适宜的提取液条件对2种不同类型的饲料样本进行提取,用ELISA测定样品中沙丁胺醇的残留量。结果表明,沙丁胺醇标准曲线的IC₅₀值为0.606 ng/mL,线性范围为0.221～1.658 ng/mL,R²=0.9998,提取液的pH为7.5,PBS缓冲液最优浓度为0.06 mol/L,稀释倍数为10倍,2种不同类型的饲料样本的检测限(LOD)为5.0 ng/mL。当沙丁胺醇的添加浓度为5、10 μg/kg时,该方法的添加回收率为77%～110%,变异系数<8%。     

酶联免疫分析技术及其在进出口动物产品兽药残留检测中的应用

进出口动物产品兽药残留对食品安全的影响越来越明显,日益成为阻碍国际间贸易的重要因素,这对食品兽药残留的快速检测提出了高要求。作者主要介绍酶联免疫分析技术的基本原理、分类和技术要点,并对其在动物产品兽药残留检测中的应用、问题和前景进行综述。     

ELISA测定乳中磺胺甲基嘧啶残留

以牛血清白蛋白（ＢＳＡ）为载体,合成２种不同的物质的量的比值（约１∶１３和１∶４２）的磺胺甲基嘧啶抗原,并比较了两者的免疫原性;以卵白蛋白（ＯＡ）为载体,合成１种包被抗原;用辣根过氧化物酶标记羊抗兔ＩｇＧ,工作浓度１∶１０００;建立的乳中磺胺甲基嘧啶残留ＥＬＩＳＡ测定法,抗原亲和常数分别为１．２８×１０７（１∶４２）和３．２１×１０７（１∶１３）,磺胺甲基嘧啶检测质量浓度为５～２２０μｇ／Ｌ（１．８７×１０－８～８．２×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）,检测限为２．４μｇ／Ｌ,回收率为８８％～１１８％,与磺胺二甲基嘧啶和磺胺噻唑交叉率分别为６．０％和０．８４％,与磺胺二甲氧嘧啶和磺胺脒无交叉反应     

Quantitative and Qualitative Study of Enzyme-linked Immunosorbent Assay to Detect IgG against Japanese Encephalitis Virus in Swine Sera

This study was designed to investigate the application of indirect enzyme-linked immunoassay (ELISA) in detecting IgG against Japanese encephalitis virus in swine sera and the qualitative nature of this test. The attenuated strain SA14-14-2 of Japanese encephalitis virus (JEV) was inoculated into 9-day-old chicken embryos and virus was harvested, purified and suspended in 0.9% saline as JEV antigen. The control antigen was prepared by the same method as for the antigen. In the ELISA, the optimal concentrations of antigen coated and dilution factor were selected using chi2 test. Ninety-two swine sera negative to haemagglutination inhibition (HI) were tested by this assay and the positive threshold was determined. The results of this study indicate that indirect ELISA has high specificity, sensitivity and reproducability. Simultaneous testing of 74 serum samples from nine pig farms was carried out to compare the existing HI test and the indirect ELISA. The coincidence rate of the two assays was 85.1% (63/74) and no significant difference was observed between them (p > 0.05). This ELISA test can detect 46 swine serum samples qualitatively and the titre of eight swine serum samples through endpoint dilution quantitatively within one 96-well plate.     

猪肉和鸡肉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素酶联免疫吸附检测方法的建立

为保障动物源性食品安全,本研究建立了分别检测猪肉和鸡肉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和T-2毒素残留的间接竞争酶联免疫吸附法.结果显示,该方法在猪肉和鸡肉样本中DON的检测限分别为34.9和43.5 μg/kg,添加回收率为72.7%~97.1%,变异系数小于8.7%;T-2毒素的检测限分别为33.7和28.7 μg/kg,添加回收率为72.1%~95.0%,变异系数小于11.3%.该方法灵敏度高、准确、简便,适用于猪肉和鸡肉中DON和T-2毒素残留的快速检测.     

动物源性食品中红霉素残留的ELISA检测

本试验采用间接竞争酶联免疫分析法（ELISA法）测定了动物源性食品中红霉素的残留,结果显示：猪肉、猪肝、牛肉、鱼肉、虾肉、蜂蜜和牛奶中的红霉素检测限分别为4.13、8.23、0.78、3.75、7.94、3.09μg/kg和1.87μg/L,样品添加回收率范围为69.0%~107.5%,批内变异系数为5.7%~11.4%,批间变异系数为8.7%~14.0%;与硫氰酸红霉素的交叉反应率为114%,与琥乙红霉素的交叉反应率为67.4%,与其他药物的交叉反应率均小于0.1%。试验表明,采用ELISA法测定红霉素准确灵敏、重复性好、特异性高,适用于检测动物源性食品中的红霉素残留。