高质量丝栗栲基因组DNA的提取方法

为了促进丝栗栲分子生物学的研究,采用尿素法、柠檬酸钠法、改良CTAB法和SDS法4种方法提取丝栗栲叶片基因组DNA,并对提取效果进行了比较和分析。结果表明,改良CTAB法较适合丝栗栲基因组DNA提取,其提取的DNA产率高,凝胶检测条带整齐清晰,杂质少、无明显降解,OD260/OD280比值在1.8左右;而尿素法难以提取基因组DNA,SDS法提取的DNA得率较低,柠檬酸钠法有蛋白质、多糖等杂质污染均不太适用丝栗栲基因组DNA提取。采用改良CTAB法提取得到丝栗栲幼叶、老叶、嫩芽和幼茎基因组DNA,产率分别为177.3、167.1、242.0和156.7μg/g。酶切分析也证明,改良CTAB法提取的不同组织DNA适用于进行后续分子生物学研究。     

乌桕基因组DNA提取方法研究

以改良CTAB法和SDS法提取乌桕基因组DNA,对提取条件进行了正交试验,优化出乌桕基因组DNA提取的适宜条件,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及限制性内切酶进行了检测。结果表明:改良CTAB法的A1B2C2D2组合提取的基因组DNA纯度高,无拖尾现象,OD260/280值在1.8～2.0,OD260/230在2.0。     

槭属树种DNA提取方法比较研究

采用3种DNA提取方法对8种槭属树种基因组DNA进行质量、浓度和纯度对比研究,结果表明,3种方法提取的基因组DNA差异较大,浓度由高到低依次为改良CTAB法TIANGEN试剂盒法改良SDS法;提取的基因组DNA纯度为TIANGEN试剂盒法CTAB法SDS法。3种方法中TIANGEN试剂盒法提取的槭属树种基因组DNA含有的杂质最少,但成本较高;改良CTAB法提取的基因组DNA质量、浓度和纯度均优于改良SDS方法,适用于槭属树种的后续研究。     

无患子总DNA提取方法研究

针对无患子富含多酚、多糖、蛋白质及其他次生代谢物质的特点,以无患子叶片为材料,分别采用改良的CTAB法和CTAB与SDS相结合法提取不同种源无患子的总DNA。结果显示,改良的CTAB法提取的总DNA,得率较高,纯度好,可用于酶切、PCR扩增等后续试验,并能获得清晰、稳定的扩增产物。而采用CTAB与SDS相结合的方法得到的基因组DNA效果不稳定,无法检测出DNA。改良的CTAB法具有简单、经济的特点,可用于无患子总DNA的提取,成功地进行SRAP分子标记分析,为研究无患子遗传资源多样性奠定基础。     

灰毡毛忍冬DNA不同提取方法的比较试验

以灰毡毛忍冬新品种——金翠蕾为试验材料,比较分析了SDS法、CTAB法、改良CTAB法对金银花总DNA提取的效果。结果表明：利用以上3种方法均能提取出完整的金银花基因组DNA,而DNA提取量从大到小依次为SDS法、改良CTAB法、CTAB法,DNA纯度依次为CTAB法、改良CTAB法、SDS法。CTAB法是灰毡毛忍冬DNA提取的适宜方法。     

4种不同广玉兰基因组DNA提取方法的比较

采用常规CTAB法、常规SDS法、改良CTAB法、改良SDS法4种方法对广玉兰（Magnolia grandiflora）叶片基因组DNA的提取进行比较,并进行ISSR—PCR检测,结果表明：改良的CTAB法提取的基因组DNA效果比常规CTAB法、常规和改良SDS法都好,提取DNA的浓度和纯度高,无蛋白质和RNA等杂质影响,并且可以很好的应用于ISSR分子标记分析,ISSR—PCR反应体系中模板DNA的最佳浓度是30ng／20μl．     

柳树DNA提取改良方法研究

高质量的DNA是进行林木分子生物学研究的基础与关键。该研究利用改良的CTAB法提取垂柳基因组DNA,并与常规CTAB法、CTAB-硅珠裂解法、SDS法和试剂盒法进行了比较。琼脂糖凝胶电泳检测显示,改良CTAB法提取的DNA浓度和纯度较高,质量优于其他4种提取方法。同时利用改良CTAB法提取了柳树16个自然种及杂交种基因组DNA,并经SSR-PCR扩增反应验证,表明改良CTAB法可作为一种柳树基因组DNA提取的通用方法。     

两种方法提取杏基因组DNA的比较

以改良CTAB法和改良SDS法提取辽杏等6个杏品种的基因组DNA。经检测,结果表明:两种方法均可提取到较高质量的杏基因组DNA,可用于SSR-PCR扩增,满足后续分子生物学研究需要。改良CTAB法提取的各品种DNA产率和纯度具有更高的稳定性,因此,更适用于杏基因组DNA的提取。     

相思基因组DNA提取及其RAPD初步分析

以马占相思、大叶相思、厚荚相思幼苗的叶片为材料,采用SDS法、改良SDS法和改良CTAB法进行了基因组DNA的提取并对DNA提取方法作了比较,结果表明改良CTAB法提取效果最好。同时利用改良CTAB法提取出的DNA为模板进行了RAPD分析,鉴别了不同树种之间的多态性。其中有11个引物共扩增出117条谱带,树种间多态性比率为54.7%,遗传多态性明显高于种内。     

山核桃基因组DNA提取方法的比较研究

植物体内所含的蛋白质、单宁、酚类、多糖及色素等次生代谢物质影响TaqDNA聚合酶的活性,是导致PCR扩增反应失败的主要因素。以山核桃嫩叶为材料,对分别用经过改良的SDS法、改良的CTAB法、简易CTAB法及改良的高盐低pH法提取的基因组DNA进行检测比较,结果显示,改良的SDS法更适合于山核桃基因组DNA的提取,此方法提取的DNA能很好地用于PCR扩增。     

八角基因组DNA的提取方法

采用4种植物基因组DNA提取方法(CTAB法、SDS法、高盐法、试剂盒法)对八角基因组DNA进行提取试验.结果表明,对传统CTAB法稍加改良可以得到较为理想的提取效果,改良的内容包括①在加入CTAB提取缓冲液之前,先用CTAB-free缓冲液抽提1～2次;②将CTAB提取缓冲液中CTAB的用量从2％提高到3％;③提取缓冲液的用量由样品干重的10倍增加到60倍.用改良CTAB法提取的DNA经RAPD-PCR扩增,条带清晰,其质量能够满足分子标记的要求.     

Methodological comparison of DNA extraction from Holcocerrus hippophaecolus (Lepidoptera: Cossidae) for AFLP analysis

Amplified fragment length polymorphism (AFLP) is a powerful DNA fingerprinting technique for studying genetic rela-tionships and genetic diversity in insects. However, the crucial prerequisite for AFLP analysis is to extract DNA of high quality. In this study, we evaluate four different protocols (SDS method, improved SDS method, CTAB method and a complex method with SDS and CTAB) for isolating DNA from the seabuckthorn carpenter moth (Holcocerrus hippophaecolus (Lepidoptera: Cossidae)). The results indicate that the CTAB method does not produce DNA suitable for AFLP analysis. The SDS method and the complex method with SDS and CTAB are comparatively time-consuming and resulted in low yields of DNA and were therefore not used for AFLP assay. The improved SDS method is recommended for preparing DNA templates from H. hippophaecolus for AFLP analysis.     

Methodological comparison of DNA extraction from Holcocerrus hippophaecolus （Lepidoptera： Cossidae） for AFLP analysis

Amplified fragment length polymorphism （AFLP） is a powerful DNA fingerprinting technique for studying genetic relationships and genetic diversity in insects. However, the crucial prerequisite for AFLP analysis is to extract DNA of high quality. In this study, we evaluate four different protocols （SDS method, improved SDS method, CTAB method and a complex method with SDS and CTAB） for isolating DNA from the seabuckthorn carpenter moth （Holcocerrus hippophaecolus （Lepidoptera： Cossidae））. The results indicate that the CTAB method does not produce DNA suitable for AFLP analysis. The SDS method and the complex method with SDS and CTAB are comparatively time-consuming and resulted in low yields of DNA and were therefore not used for AFLP assay. The improved SDS method is recommended for preparing DNA templates from H. hippophaecolus for AFLP analysis.     

五唇兰基因组DNA提取方法的优化

五唇兰组织内含有大量的酚类、多糖以及此生代谢产物,DNA提取较为困难。为获得高质量的五唇兰基因组DNA,文中采用传统十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、常规十二烷基硫酸钠(SDS)法和改进的CTAB法对五唇兰基因组DNA的提取进行比较。结果表明:改进的CTAB法比传统CTAB法和常规SDS法都好,可以得到质量较好的DNA,电泳条带清晰,通过紫外分光光度计检测,A260/A280为2.0以上。     

红花木AFLP指纹图谱的构建

为了获得红花檵木的清晰AFLP指纹图谱,以进一步研究红花橙木种质资源的鉴别与分类问题, 、以红花檵木的嫩叶、成熟叶、果实为材料,采用改进后的CTAB+Tris-HCI洗涤法、CTAB法、SDS+Tris-HCI洗涤法、SDS法,获得了HMW基因组DNA,其中以CTAB+Tris-HCI洗涤法提取的成熟叶片的DNA的纯度和浓度都很高,且获得了清晰的AFLP指纹图谱,这为AFLP技术在红花橙木种质资源的研究与应用奠定了基础.