南阳黄牛与奶牛胚胎移植技术综合研究

<正> 本项研究从1986年11月起至1989年11月止,历时3年。主要研究了南阳黄牛与黑白花奶牛的超排程序;南阳黄牛胚胎移植南阳黄牛;南阳黄牛胚胎贮存技术保存南阳黄牛品种基因,利用胚胎移植使南阳黄牛繁殖奶牛,应用胚胎移植使已配黄牛产同胞异种(一黄一奶)双胎的方法,胚胎冷冻保存技术。     

应用胚胎生物技术繁育高产奶牛

本项目由山东省梁山畜牧发展有限公司完成，项目技术创造性强，先后进行了受体鲁西黄牛选育、孕前及孕期的饲养管理，供体牛夏冬季超数排卵，克隆胚胎移植，胚胎规模化移植等方面的技术研究；组装成了以鲁西黄牛为受体，应用胚胎移植技术繁育高产奶牛的配套技术；开创了以鲁西黄牛为受体，应用胚胎移植技术大规模繁育高产奶牛的先例。3年来，生产高产奶牛胚胎516枚，移植受体牛500头次，鲜胚移植成功率达到54％，冻胚移植成功率达到42．8％，体细胞克隆胚胎移植成功率达到20．5％，出生犊牛163头。     

冷冻奶牛胚胎移植黄牛研究

采用国产试剂、器械超数排卵22头黑白花奶牛,超排成功率72.7％(16/22)。采集胚胎143枚,其中可用胚占70％(100/143),超排母牛采集胚数和可用胚数头均6.5枚和4.5枚,按采得胚母牛计算采集胚数和可用胚数头均8.9枚和6.3枚。胚胎移植经冷冻—解冻后68.2％(30/44)可用,胚胎移植18头同期发情黄牛受体,3头妊娠。其中两头受体双胎6个月时流产,1头受体黄牛产下1头黑白花公犊。     

以黄牛为受体的高产奶牛体外受精冷冻胚胎移植获得成功

在刘铁铮研究员主持的国家“十五”奶牛专项“中国南方奶业现代技术集成示范与产业化地区的规范”子课题“高产奶牛选育、快速扩繁及核心群建立”及省市奶牛课题等项目支持下 ,江苏省农业科学院畜牧研究所动物遗传资源与生物技术项目组暨南京市动物胚胎工程中心于 2 0 0 3年 9月底在南京市江宁区畜禽改良站黄牛养殖场选择 7头黄牛作为受体进行了高产奶牛的体外受精冷冻胚胎 (IVF胚 )移植 ,3个月后经直肠检查确认有 2头黄牛受孕。经检索这是江苏省首次高产奶牛IVF胚胎移植黄牛获得成功。以黄牛为受体的高产奶牛体外受精冷冻胚胎移植获得成…     

以产业化模式发展奶牛胚胎移植——澳西姆全力打造高产奶牛胚胎移植繁育基地

近年来，山东省平原澳西姆生物技术有限公司平原奶牛繁育基地依托雄厚的资金和技术优势，大力开展美国高产奶牛性控胚胎移植，初步形成了“胚胎生产一黄牛代孕一牛犊生产一市场销售”一条龙产业化生产模式，为迅速扩大高产奶牛群体趟出了一条新路子，并取得了良好的经济效益和社会效益，实现了企业、农民和产业“共赢”的效果。[编者按]     

鲁西黄牛胚胎冷冻解冻技术程序

<正> 1988～1991年,我们共冷冻保存鲁西黄牛胚胎278枚,先后解冻96枚,对解冻后的90枚胚胎进行了观察,将其中的36枚解冻胚胎(预备试验13枚,正式试验23枚)分别移植36头受体黄牛,有16头受体妊娠(预备试验3头,正式试验13头)。通过胚胎的冷冻、解冻、移植试验,总结出“鲁西黄牛胚胎冷冻解冻技术程序”,现介绍如下:     

奶牛胚胎移植实用技术的研究

我们于１９９６年至１９９７年进行了奶牛胚胎移植实用技术的研究。三年共移植奶牛胚胎１３７枚,受胎率为３５．７７％,移植Ａ级胚胎的受胎率为７０％,移植Ｂ级胚胎受胎率为４３．０２％,移植Ｃ级胚胎的受胎率为１２．１９％,移植Ａ级胚胎的受胎率比移植Ｂ级胚胎受胎率高２６．９８％;移植Ａ组胚胎的受胎率分别比移植Ｃ级胚胎受胎率有５７．８１％和３０．８３％。     

胚胎移植扩繁优良奶牛获成功

近日，广东湛江南翔胚胎生物工程技术研究所利用黄牛进行胚胎移植扩繁奶牛获得成功，1头雷州黄牛生下了1头黑白花奶牛。     

利用南方地区本地黄牛移植冷冻奶牛胚胎的效果研究

共选用105头江西赣南地区地方黄牛作为受体,分3批次采用不同的发情处理方法及不同的饲养管理方法,分别在夏、秋、冬3个季节开展了一次冷冻胚胎移植工作,3次移植妊娠率分别为40%,36%,53.8%。结果表明:饲养管理及发情处理方法对移植妊娠率产生重要的影响,而黄体直径大小与移植妊娠率高低并不成正比关系,分析了在南方地区选用本地黄牛作为受体时影响胚胎移植妊娠率及移植效率的因素。     

提高地方杂种黄牛移植冷冻奶牛胚胎效果的研究

本试验共选用77头地方杂种黄牛作为受体，进行高产奶牛冷冻胚胎移植。对其中的70头受体牛进行同期发情处理，经过两次PG处理后有58头牛发情，同期发情率为82．9％，移植前经直肠检查有68．6％的受体牛黄体合格。但由于子宫炎症，最后移植了33头受体牛，并达到了51．5％的妊娠率。因此在不存在子宫炎症的情况下，我们已达到比较好的胚胎移植效果。     

牛胚胎移植试验研究

本研究应用国产激素和器械对奶牛进行超数排卵，采用胚胎移植技术使黄牛繁殖奶牛。５ａ共超排供体牛１８５头，成功１５９头，成功率为８１．９５％；共获卵１２０１枚，头均７．５５±６．３７枚，其中可用胚胎８８０枚，头均５．６８±４．９６枚。同期发情处理受体牛２３６头，发情１３９头，发情率５８．９０％；鲜胚移植受体牛１７８头，受胎７８头，受胎率为４３，８２％，其中移植受体黄牛１４５头，受胎６１头，受胎率４２．０７％，移植受体奶牛３３头，受胎１７头，受胎率为５１．５２％；冷冻胚胎移植受体牛６１头，受胎２７头，受胎率为３７．７０％；５３胚胎移植产犊８５头。确立了应用国产激素垂体促卵泡素（ＦＳＨ）和前列腺素（ＰＧＧ＿（２２））诱发牛超数排卵和发情同期化处理的最佳程序和剂量，并总结出了采卵方法、胚胎鉴定、胚胎冷冻保存和移植等相应环节的技术规程。     

中国荷斯坦奶牛与鲁西黄牛线粒体DNA多态性和系统进化分析

为阐明中国荷斯坦奶牛和鲁西黄牛的线粒体DNA多态性及其起源关系.提取了2个品种牛外周血液中的线粒体DNA(mtDNA),用PCR方法将牛mtDNA全长分为4段进行扩增,并用NlaⅢ、HpaⅡ、BglⅡ等16种限制性内切酶进行酶解消化,分析2个品种牛mtDNA的多态性,最终经7种限制性内切酶片段长度多态性分析,共归纳出4种主要的单倍型.通过对2个品种牛mtDNAD环全序列的聚类分析表明:鲁西黄牛和中国荷斯坦奶牛可能均为混合母系起源,源于欧洲普通牛和印度瘤牛.该研究结果对提高动物体外受精和体细胞核移植效率等生物技术平台有一定的理论指导意义.     

猪胚胎细胞核移植

选用杜洛克２～１６细胞期胚胎卵裂球作核供体，湖北白猪卵母细胞作核受体，通过显微操作和电融合法构成重组胚。体外培养时，以融合前２ｈ，１ｈ激活及融合前不激活的卵母细胞做核受体的重组胚，发育率分别为６４．６％（３１／４８），５５．３％（２６／４７）和３４．５％（１９／５５）。６１枚重组胚移入同步发情的５头受体母猪输卵管，１头于妊娠１１７ｄ产下５头核移植仔猪。结果表明，激活卵母细胞作核受体优于未激活卵母细胞。成熟卵母细胞的胞质对于移入的核具有重排能力     

现场分割奶牛胚胎产生同胚双犊的研究

采用简易徒手胚胎分割法,一分为二分割奶牛胚胎。应用非手术方法,每头受体移植成对二分胚。移植4头受体,2头妊娠,其中1头产公犊1头,1头产母犊2头。该母犊为同胚双犊,健康,发育正常。     

秦川牛胚胎冷冻保存效果

为探明秦川牛胚胎冷冻保存技术的可行性,将48头秦川牛母牛进行多次超数排卵处理、人工授精,并于授精后第7天非手术法获得胚胎,把获得的A级胚用不同浓度甘油(1.0~5.0 mol/L)和乙二醇(1.0~5.0mol/L)进行处理,并采用常规冷冻法和快速冷冻法进行冷冻,解冻后进行体外培养和不同发育阶段胚胎(桑椹胚、囊胚和扩张囊胚)移植,统计其存活率、孵化率和妊娠率等。结果表明:秦川牛7日龄胚胎能耐受甘油的浓度为2.0~4.0mol/L,乙二醇为1.0~3.0mol/L;常规冷冻法解冻后胚胎的存活率和孵化率显著(P0.05)高于快速冷冻法,胚胎移植妊娠率和产犊率差异不显著(P0.05);常规冷冻桑椹胚的冻后存活率、孵化率极显著(P0.01)低于囊胚和扩张囊胚,移植妊娠率和产犊率显著(P0.05)低于囊胚和扩张囊胚。     

荷斯坦奶牛产奶量遗传力的估计

[目的]探究新疆呼图壁种牛场荷斯坦奶牛主要经济性状的遗传力.[方法]收集呼图壁种牛场1996～2010年15年间荷斯坦牛泌乳期的生产性能记录,其中包括9 901条奶产量记录.采用SAS(8.1)最小二乘分析过程分析场、年度、季节、胎次四个非遗传因素对新疆呼图壁种牛场荷斯坦牛产奶量的影响.[结果]场、年度、季节、胎次四个非遗传因素对产奶量均有极显著影响(P＜0.01).[结论]根据各因素的显著情况进行了固定效应划分,利用MTDFREML软件对荷斯坦牛进行遗传参数估计,估计了产奶量的方差组分和遗传力,产奶量的遗传力为0.4.     

Studies on Nuclear Transplantation in Mammalian Embryos

A series of experiments were conducted to study the major procedures in nuclear transplanation such as oocyte enucleation and activation,electrofusion and developent of the nuclear transplant embryos in the mouse,rabbits and sheep.The important results are as follows:1.In the mouse,only 35% of the oocytes collected 15-16h after hCG had a notable first polar body(FPb) and those without FPb were enucleated by removing cytoplasm from the PVS-wider side and the enucleation rate was similar to that in the oocytes with FPb,and the enucleation rate of removing 1/3 cytoplasm was remarkably higher than that of removing 1/4 cytoplasm.2.Among the three fusion media tested;mannitol and sucrose solutions produced better results than M2 in electrofusion of mouse 2-cell embryos.Under favorable pulse conditions,the osmotic pressure of fusion medium had no motable effect on electrofusion,but as the conditions became so unfavorable that some embryos began to lyse,the fusion rates in hypertonic mannitol solution were significantly higher than those in isotonic or hypotonic solutions.A wide range of pulse strengths (0.31-2.04kv/cm) and durations(10-1280us) were used and 100% of fusion were obtained in many cases.Optimal pulse durations were plotted for field strengths to obtain high fusion rates(96%-100%)in mouse2-cell embryos.3.With one pulse of 0.45kv/cm,satisfactory results of mouse oocyte activation were obatined only when the duration increased to 160us or longer,The activation rate increased as the oocytes got older.Some of the oocytes ar.rested at metaphaseⅢ after electrical stimulation and their proportion to the number of oocytes not activated increased with egg age.4.10% and 31% of the nuclear transplant embryos developed to morula or blastocyst stage in sheep and rabbits,respectively,with Chinese-made hormones and chemicals.     

西德高产奶牛胚胎引进移植试验

解冻西德高产奶牛冻胚16枚,其中可用胚13枚,3枚为部分变性胚。将其分别移植给16头受体牛,3头妊娠产犊,二母一公,犊牛健康活泼,毛皮细薄光亮。