3龄思茅松毛虫幼虫肠道好氧细菌的分离及ARDRA多态性分析

从3龄思茅松毛虫(Dendrolimus kikuchii)幼虫肠道样品中分离得到11株好氧细菌.以细菌基因组DNA为模板,扩增16 S rDNA,并用4种限制性内切酶HaeⅢ和HindⅢ、HinfⅠ和TaqⅠ对PCR扩增产物进行ARDRA多态性分析.对聚类图谱的分析结果发现11株好氧细菌在70％的遗传相似度水平上聚成4个不同分类操作单元(OTU),表明3龄松毛虫中肠道内好氧细菌的遗传多样性水平偏低.     

饲喂抗生素前后7龄思茅松毛虫幼虫肠道细菌的变化

通过对饲喂抗生素前后7龄思茅松毛虫幼虫肠道细菌变化的研究,进一步探索肠道菌群变化对其生长发育的影响.采用传统的平板稀释涂布培养法从思茅松毛虫7龄幼虫肠道内分离纯化获得好氧细菌,对其进行多项生理生化测定,利用16S rDNA基因扩增技术对所得菌株进行多样性分析.结果显示,饲喂抗生素前获得4种不同的单菌落A 1、A2、A3...     

思茅松毛虫2龄幼虫肠道可培养细菌的多样性

以云南安宁地区思茅松毛虫(Dendrolimu kikuchii)2龄幼虫为研究对象,研究其肠道细菌多样性,以期为思茅松(Pinus kesiya var.langbianensis)等植物保护奠定基础,并为思茅松毛虫的生物防治提供数据.试验采用纯培养法对思茅松毛虫2龄幼虫肠道细菌进行分离纯化,通过对菌株形态特征观察和...     

思茅松毛虫2龄幼虫肠道好氧细菌的筛选及毒力测定

[目的]筛选思茅松毛虫（Dendrolimu.kikuchii Matsumura）2龄幼虫肠道好氧细菌并测定其毒力。[方法]将思茅松毛虫2龄幼虫中肠样品倍比稀释后涂布平板分离菌株,共分离得到5株好氧细菌。以细菌基因组DNA为模板,用细菌16S rDNA通用引物（27f和1492r）对模板扩增,并用4种限制性内切酶Hae Ⅲ和Hind Ⅲ、HinfⅠ和TaqⅠ对PCR扩增产物进行ARDRA多态性分析。[结果]聚类图谱分析发现,5株好氧细菌在95%的相似水平上聚成2个不同分类操作单元（OTU）,表明思茅松毛虫2龄幼虫肠道内好氧细菌的遗传多样性水平偏低。室内毒力试验表明,肠道细菌杀虫死亡高峰期在4～10d,菌株4杀虫效果最佳,12d时校正死亡率达到53.57%。[结论]为防治思茅松毛虫提供了参考。     

思茅松毛虫3龄幼虫肠道可培养细菌的多样性

采用纯培养法对采集自云南地区的思茅松毛虫(Dendrolimu kikuchii)3龄幼虫进行肠道细菌多样性的研究,这些研究资料与菌种数据为后研究思茅松毛虫发育奠定基础.对采自安宁市的150头思茅松毛虫3龄幼虫的肠道细菌进行分离与纯化,并且对所培养菌株的进行形态特征观察及生理生化指标测定,通过这种方法对菌株进行初步的鉴定,再结合16S rDNA分子鉴定技术进行分析,判定细菌多样性.结果显示,从3龄幼虫肠道中共分离到152株细菌,初步鉴定隶属于6个属9个类群,分别为62株芽孢杆菌属(Bacillus sp.)(3个类群)、35株微球菌属(Micrococcus sp.)(2个类群)、23株葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)(1个类群)、11株链霉菌属(Streptomyces sp.)(1个类群)、12株不动杆菌属(Acinetobacter sp.)(1个类群)、9株泛菌属(Pantoea sp.)(1个类群).其中,芽孢杆菌属具有最高的相对分离率为40.78％,为优势菌群.思茅松毛虫3龄幼虫肠道细菌的多样性丰富,通过分析细菌种类及各水平之间的相关性,为更深入研究细菌与思茅松毛虫的关系和为思茅松毛虫的防治奠定基础.     

思茅松毛虫成虫肠道细菌多样性

【目的】 研究野外采集的思茅松毛虫（Dendrolimu kikuchii）成虫的肠道细菌多样性,为思茅松毛虫的防治和云南松（Pinus yunnanensis）等树木的保护奠定基础。【方法】 分别提取思茅松毛虫雄蛾和雌蛾的肠道总DNA,基于Illumina NovaSeq（PE250）平台运用高通量技术对肠道细菌16S rDNA基因V3~V4区进行测序和分析,分析雄虫和雌虫的肠道菌群的结构多样性。【结果】 从思茅松毛虫成虫中共获得1 278个操作分类单元（OTUs）,涵盖28个门75个纲173个目296个科550个属。在门水平上,雄蛾和雌蛾的优势菌为变形菌门（Proteobacteria,雌81.27%/雄81.17%）;在科水平上,雄蛾的优势菌科是鞘脂单胞菌科（Sphingomonadaceae,49.16%）和丛毛单胞菌科（Comamonadaceae,19.09%）,雌蛾的优势菌科是欧文氏菌科（Erwiniaceae,34.09%）和丛毛单胞菌科（Comamonadaceae,16.68%）;在属水平上,雄蛾的优势菌属是鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas,48.09%）,雌蛾的优势菌属是泛生菌属（Pantoea,31.58%）。思茅松毛虫雌蛾肠道细菌的物种多样性比雄蛾丰富。雄蛾肠道中丰度差异显著性最高的菌群为α-变形菌纲（Alphaproteobacteria）,雌蛾肠道中丰度差异显著性最高的菌群为γ-变形杆菌纲（Gammaproteobacteria）。【结论】 思茅松毛虫成虫肠道具有丰富的细菌资源。     

紫茎泽兰乙醇提取物对五龄思茅松毛虫肠道细菌的抑制作用

以思茅松毛虫五龄幼虫肠道细菌为供试菌,采用牛津杯法测定紫茎泽兰不同部位乙醇提取物的抑菌效果。结果表明:紫茎泽兰不同部位乙醇提取物除茎提取物外,对5种思茅松毛虫肠道细菌(共10株)均有不同程度的抑制作用,抑制作用大小顺序为叶>根>茎。在相同质量浓度下,叶提取物对5种肠道细菌的抑菌作用大小顺序为雷金斯堡约克氏菌(Yokenella regensburgei)>弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)>产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiella oxytoca)>克雷伯氏杆菌(Klebsiella peneumoniae)>苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis),其对雷金斯堡约克氏菌、产酸克雷伯氏杆菌以及弗氏柠檬酸杆菌的最低抑菌质量浓度为0.125g/mL,对其余2种细菌的最低抑菌质量浓度分别为0.25g/mL、0.5g/mL。根提取液对雷金斯堡约克氏菌和克雷伯氏杆菌无抑制作用,在相同质量浓度下,其对其余3种细菌的抑制作用大小顺序与叶提取液相同,最低抑菌质量浓度为0.25g/mL。紫茎泽兰乙醇提取物具有良好的抑菌效果,可用于开发新型的植物源生物农药。     

柿子叶提取物对思茅松毛虫肠道细菌抑制作用的研究

目的:对柿子叶提取物对思茅松毛虫肠道内细菌的抑制作用进行研究。方法:采用文献分析方法,对关于柿子叶提取物对思茅松毛虫肠道细菌抑制作用的文献进行详细分析,分别利用5种不同的溶液对柿子叶内的有效成分进行萃取,其分别是乙酸乙酯、乙醇、正丁醇、氯仿以及石油醚。观察这5种提取物样本对思茅松毛虫肠道内细菌的抑制作用,并进行对比分析。结果:经过对文献中实验结果的分析可以看出,利用5种提取物分别对5种思茅松毛虫体内细菌进行抗菌性测验,其中除石油醚组样本无效外,其余4种均对细菌有不同的抑制作用,按照对细菌活性抑制能力从大到小的顺序分别是乙酸乙酯组、氯仿组、乙醇组、正丁醇组。结论:柿子叶中所含有了有效成分经过提纯萃取后对于思茅松毛虫体内的细菌有着极好的抑制作用,能够破坏其新陈代谢系统,进而起到防虫作用,值得加大其被应用于农业防治病虫害工作中的应用力度。     

板栗苞壳提取物对思茅松毛虫肠道细菌的抑菌作用

[目的]研究板栗苞壳提取物对思茅松毛虫肠道细菌的抑菌作用,为害虫防治及新型植物源生物农药开发提供理论依据.[方法]以10株思茅松毛虫3龄和5龄幼虫肠道细菌为供试菌种,采用牛津杯法测定不同有机溶剂板栗苞壳提取物的抑菌效果.[结果]不同有机溶剂板栗苞壳提取物对思茅松毛虫肠道细菌均有一定的抑菌作用,且随着质量浓度的增大抑菌作用逐渐增强,各提取物的抑菌作用大小顺序为乙酸乙酯>乙醇>氯仿>正丁醇>石油醚,其中以乙酸乙酯提取物对思茅松毛虫肠道细菌的抑菌作用最强,最低抑菌质量浓度(MIC)为6.250 mg/mL,石油醚提取物的抑菌作用不明显或无抑菌作用.[结论]板栗苞壳提取物可作为新型植物源生物农药在思茅松毛虫防治中加以开发利用.     

青蒿乙醇提取物对5龄思茅松毛虫肠道细菌的抑制作用

以思茅松毛虫5龄幼虫肠道细菌为供试菌种,采用牛津杯法测定青蒿不同植株部位乙醇提取物的抑菌效果.结果表明:青蒿乙醇提取物对10株供试菌种均有一定抑制作用,且随着浓度增大抑菌作用增强,不同植株部位乙醇提取物抑菌作用顺序为叶＞茎＞根.在相同浓度下青蒿乙醇提取物对10株供试思茅松毛虫5龄幼虫肠道细菌抑菌作用大小顺序为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)＞雷金斯堡约克氏菌(Yokenella regensburgei)＞苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)＞产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiella oxytoca)＞克雷伯氏杆菌(Klebsiella peneumoniae).雷金斯堡约克氏菌和弗氏柠檬酸杆菌的叶乙醇提取物最低抑菌浓度为0.125 g/mL,茎乙醇提取物最低抑菌浓度为0.250 g/mL;产酸克雷伯氏杆菌、克雷伯氏杆菌、苏云金芽孢杆菌的叶乙醇提取物最低抑菌浓度为0.250 g/mL,茎乙醇提取物最低抑菌浓度为0.500 g/mL.因此,青蒿乙醇提取物可作为防治思茅松毛虫新型植物源生物农药进行开发.     

思茅松毛虫发生期预测预报研究初报

绘制了思茅松毛虫化蛹及成虫羽化的发育进度“S”形曲线,统计计算出了各虫态的平均发育历期和各主要虫态间的期距及其标准差。测定了各虫态的发育起点温度和有效积温提出了思茅松毛虫发生期初步预测预报模型。     

思茅松毛虫生物学习性及取食量研究

[目的]研究思茅松毛虫生物学习性及取食量。[方法]在室内和林间条件下,系统饲养思茅松毛虫,以林间定株定期系统调查和不定期调查相结合的手段,观察思茅松毛虫的生物学习性、生活史,测定取食量等指标。[结果]在2种饲养条件下,无论是第一代幼虫还是越冬幼虫,其取食量均随着龄期的增加而增加。在林间饲养条件下,第二代幼虫进入5龄期后食量迅猛增加,5龄期是4龄的3．8倍,5～6龄的取食率占所有龄期总和的81．8％;第一代幼虫也从5龄后开始猛然增加,5龄是4龄的2．1倍,5～7龄占85．3％。[结论]2代思茅松毛虫的防治最佳时期都是在4龄以前。     

禄丰县思茅松毛虫成灾与林分因子相关性调查研究

对思茅松毛虫成灾与14个林分因子进行逐步回归分析，从中筛选出主层林郁闭度、林木生长势、坡向和海拔高度4个关键因子，并用这4个因子建立多元回归模型，从中总结出了虫源地林分和有虫不成灾林分的特点。     

ARDRA方法在荧光假单胞菌分离鉴定中的应用

【目的】探索荧光假单胞菌的分类方法，分离筛选拮抗性较强的荧光假单胞菌。【方法】利用紫外下产生荧光的特性，采用梯度稀释及鞭毛染色的方法，对采自云南、海南、山东和新疆的488份植物根际土壤进行分离筛选，分离菌株进行ARDRA分析，采用室内平板对峙法筛选对植物病原真菌具有较强拮抗作用的菌株，并对其进行生理生化分析和分子鉴定。【结果】分离筛选到102株紫外下产生荧光的杆状单极生鞭毛菌株。ARDRA分析产生荧光假单胞菌类型、恶臭假单胞菌类型以及一个未知的谱带类型。以油菜立枯病菌作为靶标菌，筛选到25株具有拮抗作用的菌株，其中TC222产生的抑菌圈最大，进一步的生测结果表明该菌株对9种重要的植物病原真菌如番茄灰霉病菌等具有很强的拮抗活性。TC222的 16S rDNA核苷酸序列与荧光假单胞菌PfO-1同源性达到99%，其最终鉴定为荧光假单胞菌。【结论】ARDRA方法在分子水平上为荧光假单胞菌的分离鉴定探索了一条新途径；TC222菌株具有拮抗多种植物病原真菌的能力，显示了良好的应用前景。     

感染Bt的3龄思茅松毛虫中肠组织病理及血淋巴酶活性分析

从昆明安宁采集思茅松毛虫茧至室内羽化、孵化,将发育至3龄幼虫作为试虫,基于Probit回归法对其进行Bt制剂毒力测定分析,利用最佳检测时间点的致死中浓度（LC₅₀）对其进行感染,在感染后不同时间显微镜检中肠组织病变,同时测定血淋巴的酚氧化酶（PO）、羧酸酯酶（CarE）和乙酰胆碱酯酶（AChE）等活性,探究苏云金杆菌（Bt）对思茅松毛虫幼虫中肠组织和血淋巴酶活性的影响,分析其作用机制。结果表明：48 h是Bt制剂毒力测定的最佳检测时间,其LC₅₀为13.024 IU/μL;中肠典型病变包括：柱状细胞伸长变形、杯状细胞数量明显增多及其胞腔显著扩大、围食膜逐渐消失等;Bt感染后幼虫血淋巴CarE、AChE和PO的酶活性显著升高,其中AChE最为明显。     

寄主转换对云斑白条天牛幼虫肠道细菌多样性的影响

【目的】研究寄主转换对云斑白条天牛Batocera lineolata幼虫肠道细菌多样性的影响,为从肠道细菌的角度解析云斑白条天牛的寄主适应性以及开发利用微生物等方面提供理论依据。【方法】以核桃作为原寄主,桉树作为转换寄主饲养云斑白条天牛幼虫,采用传统微生物分离培养、16Sr RNA基因测序以及高通量测序的方法对转换寄主云斑白条天牛幼虫肠道细菌多样性进行研究。【结果】通过传统微生物培养共获得19株可培养细菌,从核桃饲养的云斑白条天牛幼虫肠道中分离出10株细菌,转换寄主后,从云斑白条天牛幼虫肠道中分离出9株细菌;两种寄主饲养处理均分离出6个属的可培养细菌,其中有5个属为共有菌属。高通量测序结果表明,寄主转换前后的云斑白条天牛幼虫肠道细菌多样性无显著差异。云斑白条天牛幼虫肠道样本中细菌分别属于20个门32个纲55个目90个科170个属,其中两种处理云斑白条天牛幼虫肠道优势菌均属于变形菌门（Proteobacteria）γ-变形菌纲（Gammaproteobacteria）肠杆菌目（Enterobacteriales）肠杆菌科（Enterobacteriaceae）肠杆菌科下未确定属（Unc...