广西沼泽型水牛垂体中促性腺激素释放激素的免疫组化定位及其受体基因表达

[目的]探讨广西沼泽型水牛垂体中促性腺激素释放激素（GnRH）的细胞定位以及是否存在促性腺激素释放激素受体（GnRH—R）。为GnRH-R的克隆及其序列分析提供理论依据。[方法]采用免疫组织化学ABC法,确定促性腺激素释放激素在垂体中的定位,结合图像分析系统检测GnRH在垂体中的含量,并利用RT—PCR技术扩增其受体基因片段。[结果]腺垂体远侧部中呈现较强的阳性GnRH免疫反应,阳性物质主要分布在胞质,胞核呈阴性。神经垂体中无阳性信号。同时,在垂体中扩增出大小为1008bp的GnRH—R基因片段。[结论]腺垂体远侧部边缘区中有大量GnRH及其受体存在,证实垂体前叶是下丘脑-垂体-性腺轴以及多个内分泌轴相互作用的重要部位。     

促性腺激素释放激素在中国荷斯坦奶牛卵巢的免疫组化定位

为探索促性腺激素释放激素( GnRH)在中国荷斯坦奶牛卵巢中分布特点,采用免疫组化技术对中国荷斯坦奶牛卵巢中GnRH进行检测.结果表明,中国荷斯坦奶牛卵巢中存在大量GnRH阳性细胞,且主要位于颗粒层细胞和黄体细胞的胞质内.     

斑马鱼促性腺激素释放激素及相关肽基因的克隆与序列分析

从斑马鱼脑组织提取总RNA,应用RT-PCR方法克隆促性腺激素释放激素(GnRH) cDNA,其长度为646 bp,包括一个258 bp开放阅读框;编码的GnRH前体为86个氨基酸残基,由一个信号肽、GnRH十肽和一个由蛋白水解位点(Gly-Lys-Arg)连接的促性腺激素释放激素相关肽(GAP)组成;其中信号肽和相关肽的长度分别为24和49个氨基酸.该cDNA编码的GnRH的前体氨基酸序列与其他物种的GnRH前体基本一致.表明物种间GnRH cDNA的蛋白编码区高度保守,而非编码区的保守性程度很低.进化分析发现,斑马鱼与鲤、鲫、拟鲤、黑头软口鲦等淡水鲤科鱼类的同源性较高.     

促性腺激素释放激素在不同品种母牛垂体中的免疫组化定位

为了掌握促性腺激素释放激素（GnRH）及其受体在不同品种母牛垂体中的变化规律,采用免疫组化SP染色法分别对广西沼泽型水牛、摩拉杂交水牛、荷斯坦奶牛、广西本地黄牛垂体中GnRH的分布表达进行对比研究。结果表明,不同品种母牛垂体中均发现有呈棕黄色或黄褐色的GnRH阳性物质存在,经Image-Pro Plus 6.0软件统计发现,摩拉杂交母水牛的GnRH免疫阳性细胞较其他3个品种的大（P〈0.05）,而平均光密度值介于荷斯坦母奶牛和广西本地母黄牛之间（P〉0.05）。在神经垂体中仅发现GnRH免疫阳性纤维,而未发现GnRH免疫阳性细胞;在腺垂体远侧部的细胞均呈GnRH免疫反应阳性,阳性物质主要分布在腺垂体远侧部嫌色细胞和嗜色细胞胞质内。说明GnRH对腺垂体激素分泌的调节可能是直接通过神经调节,而神经垂体可能只是GnRH调节过程的通路。     

促性腺激素释放激素在不同品种公牛睾丸中的免疫组化定位

为了掌握促性腺激素释放激素（GnRH）及其受体在不同品种公牛睾丸中的变化规律,采用免疫组化SP染色法分别对广西沼泽型水牛、摩拉杂交水牛、荷斯坦奶牛、广西本地黄牛睾丸中GnRH的分布表达进行对比研究。结果表明,不同品种公牛睾丸生精细胞和间质细胞中均有GnRH免疫阳性物质存在,经Image-Pro Plus 6.0软件统计发现,荷斯坦奶牛睾丸的GnRH阳性细胞个数最多、胞体最大,而广西本地黄牛睾丸的GnRH阳性细胞数量最少、胞体最小,说明GnRH在不同品种公牛睾丸的分布差异可能与生产性能有关,也提示GnRH在生殖调控中除能刺激垂体分泌FSH、LH外,可能直接与生殖器官发生作用,通过旁分泌、自分泌、神经分泌等多种方式调节蛋白类、多肽类激素的分泌及类固醇激素的产生,进而调节这些靶细胞和靶器官的功能活动。     

外源性神经激肽B对雌性大鼠生殖轴GnRH和Kisspeptin表达的影响

为研究外源性神经激肽B(NKB)对雌性大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)和下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)GnRH和Kisspeptin表达的影响,将40只60 d的Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠随机分为试验组和对照组,侧脑室分别注射NKB溶液和等体积生理盐水,20 min后处死采集样品.采用免疫荧...     

GnRH主动去势免疫对公猪肝脏脂肪代谢的影响

为研究促性腺激素释放激素(GnRH)主动免疫对公猪肝脏脂肪代谢关键基因转录水平和酶含量的影响,选用36头公猪随机分为对照组、免疫组和手术组(n=12),测定血清睾酮、甘油三酯、血糖及肝脏组织中脂肪代谢关键酶含量,实时荧光定量PCR分析肝脏组织关键基因mRNA表达变化。结果显示:GnRH主动免疫后公猪血清甘油三酯含量呈上升趋势,血清睾酮含量显著下降(P0.05)。与对照组公猪相比,免疫去势显著提高肝脏脂肪酸合成酶(FAS)及乙酰辅酶A羧化酶(ACC)含量(P0.05),且显著提高肝脏FAS、ACC、微粒体甘油三脂转运蛋白(MTTP)基因mRNA表达水平(P0.05),显著下调激素敏感酯酶(HSL)与过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)基因mRNA表达水平(P0.05)。但免疫公猪血清甘油三酯含量及肝脏FAS、ACC、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)mRNA表达仍显著低于手术去势公猪相应指标(P0.05)。上述结果表明,GnRH主动免疫提高了公猪肝脏脂肪合能力,但其脂肪合成能力仍低于传统手术去势公猪。     

无脊椎动物促性腺激素释放激素研究进展

促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone,_GnRH）是下丘脑-垂体-性腺（hypothalamic-pituitary-go-nad,_HPG）轴的关键信息分子,在脊椎动物的性腺发育、性成熟和繁殖功能的维持中起着重要作用。用免疫组织化学、酶联免疫吸附测定以及高效液相色谱等方法在多种无脊椎动物中也检测到了其存在,主要分布于中枢神经以及生殖系统。可见,GnRH在无脊椎动物中具有普遍存在性。目前已至少发现28种类型的GnRH,15种来自脊椎动物,13种来自无脊椎动物。目前,无脊椎动物中除被囊动物外,仅有真蛸、海兔和商乌贼已经获得了GnRH的mRNA序列,其肽链分子结构与脊椎动物的类似。GnRH在无脊椎动物中具有广阔的研究空间,将为无脊椎动物的生殖调控的研究提供参考。     

中华蜜蜂GnRH相关受体的基因克隆及表达研究(英文)

[目的]克隆中华蜜蜂(Apis cerana cerana)促性腺激素释放激素(gonadotrophin releasing hormone,GnRH)相关受体基因,对其进行表达研究。[方法]利用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂的GnRH相关受体基因的cDNA序列,并对其进行生物信息学分析和表达产物的原位杂交组织化学研究。[结果]序列分析显示,GnRH相关受体的cDNA序列全长1177bp,开放阅读框长1050bp,编码349个氨基酸残基。推导的氨基酸序列具有7个跨膜区;预测的分子量和等电点分别为40.6kD和9.54。聚类分析显示该蛋白质与其他已知昆虫的GnRHRⅡ具有较近的亲缘关系。原位杂交显示GnRH相关受体基因在中华蜜蜂的脑、精巢、脂肪体以及肠道等组织均有表达。[结论]该研究结果表明GnRH相关受体为昆虫提供了生殖和新陈代谢之间的分子纽带,其在协调昆虫的生殖活动和环境状况的关系中执行了一定的功能。     

中华蜜蜂GnRH相关受体的基因克隆及表达研究

[目的]克隆中华蜜蜂(Apis cerana cerana)促性腺激素释放激素(gonadotrophin releasing hormone,GnRH)相关受体基因,对其进行表达研究。[方法]利用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂的GnRH相关受体基因的cDNA序列,并对其进行生物信息学分析和表达产物的原位杂交组织化学研究。[结果]序列分析显示,GnRH相关受体的cDNA序列全长1 177 bp,开放阅读框长1 050 bp,编码349个氨基酸残基。推导的氨基酸序列具有7个跨膜区;预测的分子量和等电点分别为40.6 kD和9.54。聚类分析显示该蛋白质与其他已知昆虫的GnRHRⅡ具有较近的亲缘关系。原位杂交显示GnRH相关受体基因在中华蜜蜂的脑、精巢、脂肪体以及肠道等组织均有表达。[结论]该研究结果表明GnRH相关受体为昆虫提供了生殖和新陈代谢之间的分子纽带,其在协调昆虫的生殖活动和环境状况的关系中执行了一定的功能。     

乳腺特异表达载体缺失片段的鉴定与修复

通过对pBC1中的乳腺特异表达启动子成分进行分析,鉴定了位于β酪蛋白启动子上游两个EcoRⅠ位点(-89~-94和-120~-125)之间的缺失片段,31bp的缺失使得该载体中的一个乳控盒元件(-112~-141)和一个乳腺因子识别序列(-92~-102)遭到破坏,并使得位于TATA框上游的所有启动子成分发生了位置改变。通过与山羊β酪蛋白启动子序列进行比较,设计并合成了缺失片段,经一系列的酶切和连接处理,使得该缺失得到了修复,修复后的载体具有所有乳蛋白表达需要的启动子调控原件。本试验结果为利用修复后的乳腺特异高效表达载体进行乳腺生物反应器的研究奠定了分子生物学基础。     

奶牛乳腺上皮细胞HSP70 mRNA荧光实时定量PCR标准曲线的建立

为构建奶牛乳腺上皮细胞HSP70 mRNA表达水平差异的标准品,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞总RNA为模板,反转录成cDNA,用该cDNA为模板进行PCR,扩增目的基因片段,构建pGEM-T-HSP70重组质粒,鉴定测序后,用荧光PCR构建标准曲线。结果构建的HSP70质粒经PCR扩增后,得到了明显的259 bp条带,测序结果与目的条带完全一致,且质粒原始浓度为2.5×1010copies/mL,倍比稀释至2.5×103copies/mL,均能得到良好的标准曲线(R=0.99),提示构建的HSP70标准质粒成功。     

芦丁对哺乳大鼠乳腺发育及相关激素水平与受体表达量关系的影响

研究芦丁对哺乳母鼠乳腺发育、泌乳相关激素水平及其受体表达量的影响。试验选择18只wistar哺乳母鼠,随机分为3组,分别为对照组（LacCon组）每日每只灌喂生理盐水（2ml）1次;芦丁组（Lac Rut组）每日每只灌服芦丁（60mg／kg,BW）1次;雌二醇组（LacEst组）每周每只肌注（60μg／kg,BW）1次;从哺乳第4天开始连续给药2周,基础日粮相同。检测哺乳母鼠血浆与乳腺组织中雌激素（雌二醇,E2）、孕激素（P）、催乳素（PRI,）和生长激素（GH）的含量,乳腺组织中雌激素受体（雌激素α受体,ERR）、孕激素受体（PR）、催乳素受体（PRLR）和生长激素受体（GHR）的表达量,并进行乳腺组织切片组织形态学观察。试验显示：E2、PRL和GH在血浆与乳腺组织里的含量都表现为Lac—Est组〉Lac～Rut组〉LacCon组（P〈0．05）;P含量组间差异不显著（P〉0．05）;ER、PR、PRLR和GHR在乳腺组织中的表达量均为Lac—Est组〉LaCRut组〉Lac—Con组（P〈0．05）;乳腺腺泡／管腔直径统计显示Lac-Est组和LacRut组高于LacCon组（P〈0．05）,LacEst组与LacRut组差异不显著（P〉0．05）。试验结果表明,芦丁能够提高哺乳母鼠体内E2水平,促进PRL和GH分泌,诱导ER、PR、PRLR和GHR的表达,具有弱雌激素样作用功效。     

芦丁对去卵巢处女大鼠乳腺发育作用的影响

 【目的】通过考察芦丁对去卵巢处女大鼠内分泌激素水平、激素受体表达的影响以及乳腺组织形态学的观察,来研究芦丁促进乳腺发育的类雌激素样作用。【方法】试验选择32只去卵巢处女Wistar大鼠,随机分为四个处理组,假手术Sham组,每日每只灌胃生理盐水(2 mL)一次;卵巢切除Ovx组,每日每只灌胃生理盐水(2 mL)一次;芦丁Ovx＋Rut组,每日每只灌服芦丁(60mg•kg-1BW)一次;雌二醇Ovx＋Est组,每周每只肌注雌二醇(60µg•kg-1BW)一次。试验为期两周,试验结束后采集大鼠血液样品、乳腺组织样品等,运用放免技术检测血浆和乳腺组织中雌激素(E2)、催乳素(PRL)、生长激素(GH)的含量,RT-PCR技术检测乳腺组织这些激素受体的表达量,并进行乳腺组织形态学观察。【结果】试验结果显示,大鼠血浆中E2的水平,Ovx＋Rut组和Ovx＋Est组高于Ovx组(P＜0.05),该两组间差异不显著(P＞0.05),Ovx＋Rut组水平低于Sham组(P＜0.05),Ovx＋Est组与Sham组差异不显著(P＞0.05),乳腺组织中E2含量呈现相同规律;PRL在血浆与乳腺组织中的含量都表现为Ovx组＜Ovx＋Rut组＜Ovx＋Est组＜Sham组(P＜0.05),血浆中GH的含量Ovx组低于Ovx＋Rut组低于Ovx＋Est组低于Sham组(P＜0.05),在乳腺组织GH含量,Ovx组低于Ovx＋Rut组和Ovx＋Est组(P＜0.05),Ovx＋Rut组低于Sham组(P＜0.05),Ovx＋Rut组和Ovx＋Est组间差异不显著(P＞0.05),Ovx＋Est组与Sham组差异不显著(P＞0.05);大鼠乳腺组织中雌激素受体ER、催乳素受体PRLR、生长激素受体GHR在Ovx组、Ovx＋Rut组、Ovx＋Est组、Sham组组间数值依次增大(P＜0.05),表现相同变化趋势;乳腺组织形态学观察发现,Ovx＋Rut组、Ovx＋Est组、Sham组乳腺组织的发育显著好与Ovx组(P＜0.05)。【结论】芦丁能够提高去卵巢处女大鼠E2水平,促进PRL、GH分泌,上调乳腺组织中ER、PRLR、GHR的表达量。     

促性腺激素诱导母犬发情的效果观察

３２只间情期超过８个月的母犬，随机分成３组，第一组肌肉注射促卵泡素（ＦＳＨ）总剂量１００ＩＵ，第二组肌注ＦＳＨ总剂量２００ＩＵ，第三组肌注孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）总剂量６３０－１２００ＩＵ．当处理的犬出现外阴肿大，阴道内排出血性分泌物，与公犬有交配行为和阴道皮细胞角质化变松时，均注射绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）．结果３组的发情率分别为３７．５％、６２．５％和８７．５％，妊娠率分别为２５％、３７．５％和６８．８％．用ＰＭＳＧ处理的母犬发情率与受胎率明显高于ＦＳＨ处理的母犬，两者的差异显著（Ｐ＜０．０５）．因此，应用ＰＭＳＧ结合ＨＣＧ诱导乏情母犬发情是一种较为有效而可靠的方法．     

限饲对初情期小鼠乳腺发育的影响及机制

【目的】研究限饲对初情期小鼠乳腺发育的影响及机制,为动物乳腺发育的营养调控提供科学依据。【方法】选用24只4周龄C57BL/6雌性小鼠,分为对照组和限饲组。试验为期4周,每周称体质量并统计采食量和饮水量,在试验结束前对小鼠进行体成像和体组成检测。试验结束后采集小鼠乳腺并称质量。采集血液,测定血清中胰岛素样生长因子(IGF-1)和雌二醇(E2)的水平。采用Whole-mount染色观察小鼠乳腺发育情况,统计小鼠乳腺终末乳芽(TEB)和导管分支数量。利用免疫荧光染色检测乳腺组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。【结果】限饲组小鼠体质量、体增质量、平均日采食量、平均日能量摄入均极显著低于对照组(P0.001),但其饮水量显著高于对照组(P0.05)。限饲对小鼠肌肉含量和脂肪含量无显著影响。限饲使小鼠的乳腺质量降低了29%(P0.05),对乳腺指数无显著影响。Whole-mount染色结果表明,限饲显著抑制初情期小鼠的乳腺发育,其乳腺组织的TEB数量和导管分支数量均显著低于对照组(P0.05)。此外,限饲对血清中E2水平无显著影响,但使血清中IGF-1水平降低了34%(P0.05)。限饲显著抑制了小鼠乳腺组织中PCNA蛋白的表达。【结论】限饲可显著抑制初情期小鼠乳腺发育,这可能与限饲可降低血清中IGF-1水平和乳腺组织中增殖相关蛋白PCNA表达有关。     

羊乳腺上皮细胞的形态观察

用组织块培养法获得山羊乳腺细胞原代培养物,并根据山羊乳腺成纤维细胞与上皮细胞对胰蛋白酶的敏感性不同将二者分离纯化。对细胞形态进行光镜观察发现:纯化的山羊乳腺上皮细胞传代至第15代时其生长仍正常。山羊乳腺上皮细胞含不同的细胞类型,大多数上皮细胞呈短梭形或多角形,呈蜂窝状;部分细胞呈圆饼状,体积较大;部分细胞呈长形。纯化的乳腺上皮细胞增殖可形成圆顶型结构,呈乳头状,称之为乳球体。     

小鼠乳腺发育、泌乳和退化的组织形态学(Ⅰ)——一般组织形态学变化

文章研究小鼠乳腺发育、泌乳和退化的一般组织形态学变化,为产奶动物泌乳生物学与乳腺功能调控奠定实验基础。将小鼠青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺,制成石蜡切片用HE染色方法在普通光镜下进行组织结构观察。结果发现,在性成熟前或两个泌乳期之间的乳腺静止期,乳腺内主要是结缔组织、分散的输出导管和一些萎缩、塌陷的腺泡或实心的细胞索,腺泡及小导管均为单层立方上皮;性成熟后,乳腺分泌部和导管都开始发育,特别是妊娠期乳腺组织发育尤为迅速,结缔组织包绕在腺泡周围和小叶间;分娩后进入泌乳期,乳腺处于全面活跃状态,泌乳后期乳腺停止泌乳活动,结缔组织和脂肪组织增殖;退化期或老龄后乳腺腺组织及导管退化,被结缔组织和脂肪取代;小鼠青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺组织结构呈现有规律的周期性变化。     

CpG-DNA对金黄色葡萄球菌诱导的乳腺炎大鼠的保护研究

【目的】建立金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染的大鼠乳腺炎模型，并观察CpG-DNA对乳腺的保护作用。【方法】18只雌鼠分3组(n=6)，产后72h分别灌注磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）（C组）、2×105CFU•ml-1（L组）和2×1012CFU•ml-1 (H组)金葡菌到第四对乳腺内，24 h处死。L组乳腺病变轻微，H组腺泡结构破坏严重，并有大量嗜中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）浸润；H组乳腺组织TNF-α、IL-6水平显著上升。选择2×1012CFU•ml-1为诱发剂量观察CpG-DNA对乳腺的保护作用：72只雌鼠分成对照和试验组(n=36)，对照组产后0 h肌注PBS；试验组肌注CpG-DNA，72 h后灌注金葡菌到第四对乳腺内。分别于灌注前（定义为0 h），灌注后8、16、24、48和72 h（n=6）处死。【结果】感染初期试验组乳腺腺泡内PMN较对照组浸润迅速。试验组乳腺组织白细胞介素-6（interleukine-6，IL-6）在16、24和48 h显著高于对照组。CpG-DNA能显著提高0、24和72 h乳腺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平。试验组8、16和72 h的乳腺组织金葡菌数显著低于对照组。CpG-DNA能显著提高乳腺组织中其特异性受体TLR-9（toll-like receptor-9）mRNA表达水平。【结论】CpG-DNA对金葡菌感染诱发大鼠乳腺炎的乳腺有保护作用。