交配型基因作为分子标记鉴定蛹虫草退化菌株的核相初步研究

根据蛹虫草(Cordyceps militaris)交配型基因的序列设计3对特异性引物,对收集到的14株蛹虫草正常菌株和退化菌种进行PCR鉴定.结果表明,3株正常菌株含有MAT-HMG和MAT-alpha两类交配型基因,判定为异核体;11株退化菌株仅仅含有MAT-HMG或者MAT-alpha交配型基因,判定为同核体.笔者推测,蛹虫草发生不形成子实体的菌种退化的原因之一是核相发生了改变,即异核体变成了同核体.     

蛹虫草(Cordyceps militaris)的交配型研究

利用可以在人工条件完成整个生活史的蛹虫草菌种,分离、鉴定了2个蛹虫草菌株子囊孢子的单孢分离物,对子囊单孢的配对培养和子实体诱导结果显示,蛹虫草具有典型的二极性异宗配合习性。     

蛹虫草菌种退化机理及预防措施研究进展

蛹虫草作为虫草资源和健康食品,已人工栽培并实现产业化生产.其菌种在继代培养过程中的频繁退化不仅导致其产量急剧下降,经济损失严重,而且直接影响行业的发展.根据前人的研究,总结、阐述其退化的形态和机理及预防措施,为规范化栽培提供一定的理论基础和指导.     

蛹虫草无性型—蛹草拟青霉的确证

从野外采集的鲜蛹虫草标本上分离到一假定无性型菌株LFRGU88-821L，经人工培养获得了与天然蛹虫草特征相同的成熟子实体，从而确证了LFRGU88-821L是蛹虫草真正的无性型，基于形态学特征的鉴定表明，此无性型是拟青霉属中的一个新种-蛹草拟青霉（Paecilomyces militaris Liang sp.nov.)。本文简述了蛹虫草无性型地位研究的历史，讨论了作者确定其当前分类地位的合理性，研究标本（LFRGU）保存于贵州大学真菌资源研究室。     

提高蛹虫草中的虫草素产量的研究进展

虫草素是一种具有广泛生物活性和药理作用的核苷类物质,其药用价值及生物活性的多样性已众所周知。现从菌种选育、培养条件优化及提取工艺3方面综述了提高蛹虫草中虫草素产量的措施,以期对今后的研究方向进行展望。     

蛹虫草继代中菌株退化早期外部识别标志研究

以蛹虫草菌株W5继代培养(8d转接1代)1～5代菌株(W5-1～W5-5)为研究对象,观察蛹虫草继代培养过程中菌落形态、细胞超微结构和活性氧含量的变化,以期揭示继代培养过程中蛹虫草菌株退化的早期外部识别标志.结果表明:蛹虫草W5菌株退化是个渐变的过程,继代培养至3代菌落形态、菌丝和孢子形态开始出现变化,节律环和颜色变化...     

RFLP在鳞翅目蛹虫草菌鉴别中的应用

本文应用RFLP技术鉴别两未知菌株S1001和S1002是否系鳞翅目蛹虫草菌(Cordyceps milicaris)。试验以ITSl,TTS4为引物,PCR扩增rDNA的5.8S+ITS区段,扩增产物纯化后用DNA限制性内切酶酶切,获得DNA的RFLP图谱,并同ATCC模式菌株的RFLP图谱相比较。结果表明:三个作为对照的ATC菌株具相同的RFLP图谱,而两待鉴定菌株之间存在差异,且明显不同于ATCC模式菌株,从而证明,两待鉴菌株与ATCC菌株之间在rDNA区域具有明显的结构差异,故推断两待鉴定菌株不隶属于鳞翅目蛹虫草菌。     

蛹虫草液体发酵过程中虫草素含量的分析

以2个蛹虫草菌株2014072503-1和2014072301-1为试材,采用高效液相色谱(HPLC)法,分析蛹虫草40d液体发酵过程中其发酵液中的虫草素产量,研究了蛹虫草发酵时间对虫草素产量的影响,旨在确定虫草素开始产生、产量迅速升高、产量最高的3个关键时间点,为下一步对以上时间节点的菌丝样品进行转录组测序分析,进而挖掘与虫草素产量密切相关的候选基因奠定基础。结果表明:2个蛹虫草菌株发酵过程中产虫草素的起始时间点为发酵后3d,迅速升高的时间点是12d,虫草素产量最高的时间点2014072503-1号菌株为发酵后37d,而2014072301-1号菌株为发酵后34d。2014072301-1号菌株发酵产生的虫草素含量高(382.43μg·mL~(-1)),时间短(34d),更适于作为生产虫草素的菌株。     

蛹虫草在槐尺蠖蛹上的接种试验

以槐尺蠖蛹为寄主,进行蛹虫草的接种试验。试验表明：寄主用0．5％医用碘伏浸泡3min→3％的双氧水浸泡2min进行表面消毒,然后把菌种注射到寄主体内,培养50d后子实体成熟,出草率达90％以上。     

香菇交配型基因的遗传研究 Ⅰ一种交配型基因测定的新方法

本文建立了一种香菇交配型基因测定的新方法——原生质单核体系本交配到极性标记法.用这一方法不仅成功地分离和鉴定出不同香菇菌株的四种标准交配型基因,还有效地区分出亲本型和重用型两种交配型基因类型。这一技术为深入开展异宗结合食用菌的遗传研究提供了一个重要的工具。     

激发子对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷含量的影响

研究了不同激发子菌株对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷含量的影响。结果表明:就虫草素而言,JF4对虫草素积累的诱导作用在发酵培养40d时达到最大,为162.22 mg/L,与对照组相比增加了3.85倍,并且JF4对虫草素的诱导作用是4种激发子中作用最强的;就腺苷而言,JF2对腺苷积累的诱导作用在发酵培养40d时达到最大,为29.16mg/L,与对照组相比增加了4.13倍。由此可见,激发子对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的积累因激发子种类及添加后培养时间的不同而产生不同的影响。     

全局调控因子LaeA对蛹虫草生长发育和次生代谢的作用

通过克隆蛹虫草(Cordyceps militaris)野生型菌株Cm01的laeA基因(CmLaeA)、合成构巢曲霉(Aspergillus nidulans)的laeA基因(AsLaeA),构建不同过表达载体,利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化野生型蛹虫草菌株LN9、Cm01,...     

蛹虫草和冬虫夏草主要活性成分含量比较

对米饭培养蛹虫草、柞蚕蛹虫草和冬虫夏草中的虫草素、虫草多糖、虫草酸和氧基酸含量进行了分析比较,结果表明：米饭虫草中的虫草素、虫草多糖和虫草酸含量均高于柞蚕蛹虫草和冬虫夏草,尤其是虫草素含量为2465mg/kg,是冬虫夏草的20倍;三种虫草均含有18种氨基酸,氨基酸总量最高的是柞蚕蛹虫草为27130mg／100g,是冬虫夏草的1．4倍。     

滇中蛹虫草居群生物学及其生态学习性研究

通过对滇中地区昆明西山、昆明野鸭湖、嵩明大哨和楚雄紫溪山分布的蛹虫草居群,进行调查和采样,调查分析了蛹虫草的生境,比较研究了蛹虫草不同居群有性型及无性型形态差异,对蛹虫草无性型的产孢结构进行光学显微镜和扫描电镜观察研究。研究发现,蛹虫草子囊壳着生方式及其大小、子囊大小、无性型,随生境不同而发生差异。在云南松常绿阔叶混交林下的子囊壳及子囊较大,分离得到的无性型以拟青霉型（Paecilomyces－type）产孢结构占优势;在华山松林和田埂草丛生境中的子囊壳及其子囊较小,分离得到的无性型以轮枝孢型（Verticillium－type）产孢结构占优势。     

蛹虫草抗肿瘤和免疫活性部位的体外筛选

为筛选蛹虫草(Cordyceps militaris)子实体的抗肿瘤和免疫活性部位,采用系统溶剂法,分别用氯仿、乙酸乙酯、95%的无水乙醇、沸水(100℃)、3%草酸铵和5%NaOH依次提取并计算提取物得率,且测定了沸水提取物、草酸铵提取物、NaOH提取物1和2的多糖含量.采用体外抗肿瘤模型测定了氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和乙醇提取物对肿瘤细胞L1210和SW620的抑制活性;采用体外免疫增殖试验模型测定了沸水提取物、草酸铵提取物和NaOH提取物1和2的免疫活性.结果表明,乙酸乙酯提取物对肿瘤细胞L1210和SW620的抑制效果最好,当乙酸乙酯提取物浓度为200μg/mL时,抑制率分别为(85.2±2.5)%和(67.7±6.3)%;体外免疫活性测定结果表明,草酸铵提取物刺激小鼠脾淋巴细胞后的增殖活性最高,当浓度为500μg/mL时细胞增殖率为(312.0±7.2)%,与阳性对照PHA的细胞增殖率(329.3±3.0)%相当.     

蛹虫草多糖对小鼠抗疲劳作用的研究

采用雄性ICR小鼠随机分组,分别灌胃蒸馏水、不同剂量的蛹虫草(Cordyceps militaris)多糖(低、中、高剂量组分别每天灌胃75、150、450mg/kg BW),40d后建立疲劳模型,比较力竭游泳时间、肝肌糖原水平、乳酸含量和机体相关的乳酸脱氢酶和超氧化物歧化酶活力。结果表明:高剂量蛹虫草多糖能够显著延长小鼠力竭游泳时间,中高剂量多糖显著提高小鼠肝肌糖原水平,有效的遏制运动后小鼠乳酸生成量,而低剂量多糖显著增加运动后小鼠乳酸脱氢酶活力,3个剂量的多糖均能提高运动后小鼠血清中超氧化物歧化酶的活力。     

香菇交配型基因的遗传研究

本文建立了一种香菇交配型基因测定的新方法－－原生质单核体亲本交配型极性标记法，用这一方法不仅成功地分离和鉴定出不同香菇菌株的上标准交配型基因，还有效地区分出亲本型和重组型两种交配型基因类型，这一技术为深入开展异宗结合食用菌的遗传研究提供了一个重要的工具。     

氮源和无机盐对蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响

以小麦为主要栽培基质,通过添加不同的氮源和无机盐,选用优质蛹虫草菌株CM-16进行人工培养,探索这2个因素对蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响。结果表明:栽培过程中选用6g·L~(-1)的蛋白胨作为最佳氮源,子座干样质量、虫草素和腺苷的生成量均较高,分别为43.1g·盒~(-1)、3.95mg·g-1和2.35mg·g~(-1)。无机盐则选择1.0mg·L~(-1)的硫酸亚铁最为合适,此时子座干样质量、虫草素和腺苷的生成量分别为48.8g·盒~(-1)、4.98mg·g~(-1)和2.10mg·g~(-1)。     

比色法测定冬虫夏草和蛹虫草中多糖和甘露醇的含量

应用苯酚-硫酸法、3,5-二硝基水杨酸法和高碘酸钠氧化法建立虫草多糖和甘露醇的定量分析方法,并比较市售天然冬虫夏草和人工栽培蛹虫草在多糖和甘露醇含量上的差异。结果发现,用比色法测定三种天然虫草和六种蛹虫草中多糖和甘露醇的含量,其多糖平均加样回收率分别为:94.7%(RSD为2.29%),甘露醇的含量平均加样回收率为98.8%(RSD为1.79%)。实验表明,本研究方法可用于虫草多糖和甘露醇的定量分析。     

野生蛹虫草分化株子实体表型性状的分离

对采集于辽宁西丰、辽宁大石桥的3株（C5、D1、D5）野生蛹虫草后代6个分化株（C5-1、C5-2、D1-1、D1-2、D5-1、D5-2）进行菌落形态、农艺性状、营养成分对比,并利用ISSR分子标记技术进行遗传差异性分析。结果表明,来源于同一株野生蛹虫草子实体的分化株菌落生长速度、子实体高度、子实体密度多数有显著差异。ISSR标记分析表明同一株野生蛹虫草的分化株D1-1与D1-2、D5-1与D5-2基因型差异较大。来源于同一株野生蛹虫草的分化株虫草素、腺苷含量差异显著。