1种高效增强氨基糖苷类抗生素杀灭创伤弧菌的方法

渔业中由于抗生素等相关药物的使用,使得创伤弧菌等水产菌产生了耐药性,增强现有抗生素的杀菌效果是解决该问题的重要途径。在低离子和创伤弧菌生理渗透压环境下用多种氨基糖苷类抗生素对平台期创伤弧菌进行处理,并测定创伤弧菌在低离子和生理渗透压环境下对氨基糖苷类抗生素的摄取量。结果表明：低离子休克能高效增强氨基糖苷类抗生素对创伤弧菌的杀灭效果,且促进杀菌效果具有抗生素浓度和时间依赖效应。低离子处理促进氨基糖苷类抗生素杀灭创伤弧菌的分子机制是增加了细菌对抗生素的摄取。该研究为进一步揭示细菌耐药机制奠定了基础,并为解决细菌耐药性问题提供了可行的途径。     

大肠杆菌ydiB基因敲除和过表达对氨基糖苷类抗生素的耐受性分析

为了寻找新靶点解决抗生素滥用所造成的细菌耐药问题，通过比较氨基糖苷类抗生素(庆大霉素、妥布霉素、链霉素、阿米卡星、新霉素)、喹诺酮类抗生素(氧氟沙星、环丙沙星)和β-内酰胺类抗生素(氨苄西林、羧苄西林)对大肠杆菌野生型BW25113(WT)和ydiB基因敲除菌株(△ydiB)杀菌表型的差异，并且通过进一步测试以庆大霉素为代表的氨基糖苷类抗生素对过表达菌株BW25113-pCA24N和BW25113-pCA24N(ydiB)的杀菌表型，以此来确认ydiB基因对细菌耐药的重要性。结果表明：与大肠杆菌野生型BW25113(WT)相比，ydiB基因敲除菌株(△ydiB)仅对氨基糖苷类抗生素耐受，并且发现过表达菌株BW25113-PCA24N(ydiB)能恢复对庆大霉素的敏感性。因此，证明ydiB基因是氨基糖苷类抗生素作用的关键基因，有望成为氨基糖苷类抗生素作用的新靶点。     

动物源性食品中氨基糖苷类抗生素检测技术的研究进展

氨基糖苷类抗生素在畜牧业中被普遍应用,但其在动物组织中的残留给人类带来很大的危害。人们开始越来越重视氨基糖苷类抗生素在动物源性食品中的残留问题。一些发达国家和国际食品法典委员会,对氨基糖苷类抗生素的限量,都作了很严格的规定,并且该抗生素的检测技术已成为研究的热点。笔者对目前氨基糖苷类抗生素的检测技术作了综述,并对以后的发展方向进行了展望。     

哪些药具有耳毒性

正药物的耳毒性是指使用某些药物治病或人体接触某些化学制剂后引起的内耳功能损害或细胞损害。目前临床上常见的耳毒性药物为氨基糖苷类抗生素,其次是抗癌药、利尿药、非甾体抗炎药、抗疟药等。氨基糖苷类氨基糖苷类是临床上最常见的耳毒性抗生素。其中链霉素、卡那霉素、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、新霉素等对内耳均有不同程度损害,可导致眩晕、耳鸣、听力损害。新霉素在局部外用(如滴耳液)也有耳毒性。     

鸡源大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素耐药性检测林

从四川省不同养殖场分离鉴定出233株鸡源大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法对链霉素、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、大观霉素、安普霉素和新霉素等7种氨基糖苷类药物进行耐药性检测.结果显示,233株大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性较为严重(耐药率范围31％～81％),对不同药物呈单向交叉耐药性,56.6％的菌株呈多重耐药性.     

辽宁地区猪源大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测与分析

为了解辽宁地区猪源大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药情况,采用K-B纸片法对65株猪源大肠埃希菌菌株进行6种氨基糖苷类抗生素的药敏试验,同时采用PCR方法对耐药菌株rpsl基因和4种氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅳ、aad A、aac(6')-Ⅰb-cr、aac C4进行检测及序列分析,并将阳性样品与Gen Bank中登录的序列进行同源性比较。结果显示,辽宁地区猪源大肠埃希菌对链霉素、妥布霉素、新霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素的耐药率分别为26.2%、15.4%、18.5%、29.2%、4.6%、21.5%;23株耐药菌株rpsl基因检出率为100%;4种氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅳ、aad A、aac(6')-Ⅰb-cr、aac C4检出率分别为13.0%、8.7%、69.6%、4.3%。以上结果表明,在氨基糖苷类抗生素中耐药性最低的是丁胺卡那霉素,rpsl基因及氨基糖苷类钝化酶基因普遍存在于辽宁地区猪源大肠埃希菌中。     

食品动物源大肠杆菌耐药性分析及16S rRNA甲基化酶基因的检测

【目的】对四川地区临床分离的437株健康动物源及82株患病动物源大肠杆菌(E.coli)的耐药性及其机制进行研究,为临床合理用药提供理论依据。【方法】用3种氨基糖苷类药物和11种非氨基糖苷类药物对分离的大肠杆菌进行药物敏感性试验(K-B纸片法)。选取至少耐1种氨基糖苷类药的大肠杆菌作为供试菌,通过PCR检测其16SrRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE和npmA;对阳性菌株进行质粒接合试验;并用K-B纸片法分析临床菌和接合子对抗生素的敏感性。【结果】437株健康动物源和82株患病动物源大肠杆菌对14种抗菌药物表现出不同程度的耐药性。健康动物源大肠杆菌对氨苄西林、氯霉素、磺胺甲恶唑的耐药率较高,分别为69.79%,50.8%和68.72%,对庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星比较敏感,敏感率分别为75.97%,67.73%和97.02%;其中有134株分离菌至少对1种氨基糖苷类药物表现出耐药性。患病动物源大肠杆菌除对美罗培兰耐药率较低(为3.66%)外,对其余药物的耐药率在32.93%~100%,且都对至少1种氨基糖苷类药物表现出耐药性。多重耐药分析表明,健康动物源大肠杆菌主要分布于0~4耐,而患病动物源大肠杆菌至少耐7种抗菌药物,主要分布于10~14耐。在134株耐氨基糖苷类抗生素大肠杆菌中,检测到5株含rmtB基因,检测率为3.73%,未检测到armA、rmtA、rmtC、rmtD、rmtE和npmA基因。在82株患病动物源大肠杆菌中,检测到1株含armA基因,10株含rmtB基因,检出率分别为1.22%和12.2%,未检测到rmtA、rmtC、rmtD、rmtE及npmA基因;接合试验的耐药质粒传递率为100%,受体菌接合频率在(9.2×10-9)~(4.8×10-6)。【结论】四川地区健康动物源大肠杆菌对抗生素呈中低水平耐药,多重耐药以4耐及以下为主,占63.84%,主要由rmtB基因引起;而患病动物源大肠杆菌对抗生素则呈高水平耐药,89.02%为10~14耐,主要由rmtB和armA基因引起。     

鸡大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶检测

为了解河南地区鸡源大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶的流行情况,对2005～2008年在河南地区病鸡的病料中分离保存的429株大肠杆菌进行药敏试验,并分别设计特异性引物对其进行16S rRNA甲基化酶基因的聚合酶链式反应扩增.检测结果显示,在6种氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶基因中,仅检测出ArmA和RmtB,检出率分别为20.7%(89/429)和23.3%(100/429).且随时间的推移,ArmA和RmtB的出现几乎是逐年增高.提示河南地区鸡大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶产生率较高,且以ArmA和RmtB为主.     

食品中氨基糖苷类抗生素快速分析方法研究进展

氨基糖苷类抗生素是一类广谱性抗生素,在临床和动物医疗中应用广泛,从而导致它在动物源性食品中广泛残留。目前,各国针对庆大霉素、卡那霉素、新霉素以及链霉素/双氢链霉素设有最高残留限量。由于检测样本数量庞大,并且检测目标物种类众多,因此对简便、快速的分析方法需求愈加强烈。以特异性抗体为基础的免疫分析方法在氨基糖苷类抗生素的快速分析中占有重要地位,同时核酸适配体被筛选出来并被引入到快速分析领域,丰富和发展了快速分析的类型。主要综述基于能够特异性识别氨基糖苷类抗生素抗体和适配体构建的快速分析方法,包括单一药物分析和多残留分析方法,以期对该领域的发展趋势和方向提供参考。     

硫化镉纳米微粒与某些氨基糖苷类抗生素相互作用的共振瑞利散射光谱及其分析应用

在pH为2.0～7.0的水溶液中,硫化镉纳米微粒[(CdS)n]与氨基糖苷类抗生素阿米卡星(AMK)、卡那霉素(KANA)、妥布霉素(TOB)和庆大霉素(GEN)借静电引力、疏水作用力结合,形成粒径更大的聚集体,导致共振瑞利散射(RRS)的增强并产生新的RRS光谱,最大RRS峰位于289 nm(AMK体系)、291 nm(KANA和TOP体系)和287 nm(GEN体系).在一定条件下,RRS散射强度(△I)均与药物的浓度成正比,反应具有高灵敏度,对于4种药物的检出限在7.7～8.8 ng/mL之间.其中(CdS)n-AMK体系灵敏度最高,对AMK的检出限为7.7 ng/mL.据此发展了一种用纳米硫化镉作探针,灵敏、简便、快速测定氨基糖苷类抗生素药物的共振瑞利散射新方法.     

硫化镉纳米微粒与某些氨基糖苷类抗生素相互作用的共振瑞利散射光谱及其分析应用

在pH为2.0～7.0的水溶液中,硫化镉纳米微粒[（CdS）n]与氨基糖苷类抗生素阿米卡星（AMK）、卡那霉素（KANA）、妥布霉素（TOB）和庆大霉素（GEN）借静电引力、疏水作用力结合,形成粒径更大的聚集体,导致共振瑞利散射（RRS）的增强并产生新的RRS光谱,最大RRS峰位于289 nm（AMK体系）、291 nm（KANA和TOP体系）和287 nm（GEN体系）.在一定条件下,RRS散射强度（ΔI）均与药物的浓度成正比,反应具有高灵敏度,对于4种药物的检出限在7.7～8.8 ng/mL之间.其中（CdS）n-AMK体系灵敏度最高,对AMK的检出限为7.7 ng/mL.据此发展了一种用纳米硫化镉作探针,灵敏、简便、快速测定氨基糖苷类抗生素药物的共振瑞利散射新方法.     

细菌对四类土壤常见抗生素的降解机制

为了解决土壤中常见抗生素对环境的污染问题,就细菌对4种抗生素的降解机制进行了综述。研究发现某些细菌具有分解抗生素的能力,作用机制:β-内酰胺酶使β-内酰胺类抗生素开环;酯酶、磷酸化酶和糖苷酶作用大环内酯类抗生素使其钝化;AAC、APH和ANT三类氨基糖苷类修饰酶对氨基糖苷类抗生素的修饰作用;氯霉素乙酰转移酶CAT基因catA和catB介导编码产生的酰基转移酶使氯霉素转化为无抗菌活性的代谢产物。通过阐明细菌对抗生素的降解机制,为解决土壤抗生素的污染问题提供了依据。     

鸡志贺氏菌β-内酰胺酶的测定及其与耐药质粒的关系

通过对鸡志贺氏菌β-内酰胺酶及ESBLs的测定、质粒提取、细菌转化及质粒结合转移等试验,分析其耐药性与其质粒之间的关系,探讨耐药质粒在细菌间的传递方式.结果表明,质粒转化后的转化子对β-内酰胺类抗生素全部耐药,对氨基糖苷类、氟诺酮类有一定程度的敏感;而质粒接合传递体的耐药谱与质粒转化子一致.耐药菌株的质粒可编码β-内酰胺酶,且耐药质粒可通过结合转移方式传递至感受态大肠杆菌.     

耐高浓度氨基糖苷类抗生素的肠球菌检测与分析

目的:检测临床标本中耐高浓度氨基糖苷类抗生素的肠球菌与耐万古霉素肠球菌分布及耐药频率,以配合院内感染监控工作开展,指导临床合理用药.方法:依据全国临床检验操作规程进行肠球菌分离及药敏试验.结果:从临床标本中分离466株病原菌,其中肠球菌63株占13.5%.肠球菌对庆大霉素高耐药率69.8%,低耐药率6.3%,敏感率23.8%;对链霉素高耐药率74.6%,低耐药率20.6%,敏感率4.8%.肠球菌高耐率分别占庆大霉素与链霉素耐药率91.7%与78.3%.尚未发现万古霉素耐药株.结论:肠球菌对氨基糖苷类抗生素的高度耐药性应引起临床和检验工作者的高度重视.     

肉鸡大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的检测与药敏分析

采用全自动微生物鉴定系统(Vitek-32)鉴定了5株肉鸡致病菌,并对分离菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测和对11种抗菌药、4种复方药物的敏感性测定。结果显示,分离的5株菌均为大肠杆菌,其中一株产ES-BLs。药敏试验结果表明该鸡场分离的大肠杆菌对兽医临床中常用的β-内酰胺类抗生素、氟喹诺酮类、氯霉素类、氨基糖苷类均产生耐药,对四环素类中介或耐药,显示出严重的多重耐药性。β-内酰胺类药物与酶抑制剂联用能使药物对细菌的最低抑菌浓度(MICs)降低,因此复方β-内酰胺类药物仍是防治鸡致病菌感染的有效措施之一,但联用效果因不同β-内酰胺类抗生素而有差异。     

西藏牦牛源牛支原体对氨基糖苷类抗生素耐药靶位突变分析

掌握西藏牦牛源牛支原体对氨基糖苷类药物的敏感性及其耐药机制,为牛支原体病的临床治疗与预防提供依据。本研究通过微量稀释法对10株牦牛源牛支原体进行了氨基糖苷类药物敏感性与耐药性试验,并对敏感株进行体外高度耐药诱导,同时分别提取敏感株、临床耐药株和体外诱导高度耐药株基因组进行氨基糖苷类药物耐药基因靶位分析与药物主动外排系统研究。结果显示,敏感株和耐药株在靶位基因中未检测到相应位点的碱基突变,体外诱导高度耐药株M.bovis 3和M.bovis 7发生了A1409G基因位点突变,M.bovis 1和M.bovis 5发生了A1409G和C1192T基因位点突变,M.bovis 4和M.bovis 9发生了A1408T和C1192T基因位点突变;经药物主动外排系统检测分析,结果显示,西藏牦牛源牛支原体不存在以氨基糖苷类抗生素为底物的主动外排系统。研究结果表明,西藏牦牛源牛支原体不同分离株对氨基糖苷类药物敏感性存在较大差异,其耐药菌株的产生可能与临床长期使用单一抗生素有关。体外诱导高度耐药株对大观霉素、卡那霉素和庆大霉素产生高度耐药的原因是其耐药基因发生碱基突变,但碱基突变在牛支原体对氨基糖苷类...     

新疆某猪场猪源耐药大肠杆菌β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶检测及分析

[目的]了解新疆乌市某猪场猪源耐药大肠杆菌携带β-内酰胺酶和16S rRNA甲基化酶基因及其共存情况.[方法]采用PCR方法检测203株β-内酰胺类药物(包括头孢噻呋、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林)多药耐药大肠杆菌进行β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因,并测序检出基因的PCR产物.[结果]检出83株菌携带blaTEM (40.89;),2株菌携带blaCTXM(0.99;);检出2株菌携带rmtB(0.99;)基因,并且同时携带blaTEM,未检出其它被检耐药基因.[结论]该猪场猪源大肠杆菌中存在β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶介导的耐药,并且共存.β-内酰胺酶的基因型以blaTEM为主;16S rRNA甲基化酶检出率较低.猪源大肠杆菌存在对头孢菌素类和氨基糖苷类抗生素多重耐药的风险,有必要对此猪场耐药基因流行情况进行密切监测.     

胶体金免疫层析技术在牛奶抗生素残留检测中的应用

胶体金免疫层析技术不仅操作简便、快速、特异,而且特别适用于广大基层检验人员的现场检测。介绍了胶体金免疫层析技术,综述了胶体金免疫层析技术在牛奶中14种β-内酰胺类抗生素、5种四环素类抗生素、1种氨基糖苷类抗生素、1种氯霉素类抗生素、2种大环内酯类抗生素、12种磺胺类抗生素和11种氟喹诺酮类抗生素残留检测中的应用;同时对胶体金免疫层析技术在牛奶中抗生素残留检测中的应用前景进行了展望,指出了其未来的4个发展方向。     

鸡肠道大肠杆菌多抗菌株C20耐药性基因的预测和分析

为揭示动物源大肠杆菌耐药性机制,追踪潜在的抗性基因传播机制及其来源,在先前公布的分离自鸡肠道的多抗耐药性菌株大肠杆菌Escherichia coli C20基因组基础上,对E.coli C20抗生素抗性基因种类、数量、来源及其耐药性机制进行分析。通过与已知的抗生素抗性基因数据库进行对比和注释,一共预测和注释了80个潜在的耐药性基因,包括与先前筛选的7种抗生素抗性对应的抗性基因。其中,喹诺酮类抗生素抗性基因位于C20基因组上,四环素、磺胺类、氯霉素、氨基糖苷类以及大环内酯类抗生素的抗性基因则位于C20环状质粒分子上。基因组聚类分析表明,菌株C20与大肠杆菌K-12菌株DH1、BW2952和MG1655亲缘关系较近,序列相似性97%~99%。3株K-12菌株基因组中没有发现与C20质粒类似的序列,表明C20菌株的抗性基因主要是通过质粒介导的水平基因转移方式从其他环境微生物中获得。     

体外诱导耐药及相关基因检测

[目的]了解常见致病菌产生耐药性后耐药基因和毒力基因的变化。[方法]采用微量肉汤二倍稀释法测定21种临床常见抗生素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等5种标准菌株的最小抑菌浓度，选取敏感药物进行体外诱导耐药试验，采用PCR法检测耐药基因和毒力基因。[结果]5个标准菌株均对氨基糖苷类药物敏感；大肠杆菌对四环素类药物敏感；鼠伤寒沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌和肺炎链球菌对喹诺酮类药物敏感；金黄色葡萄球菌对克林霉素敏感。与标准菌株相比，氨基糖苷类和四环素类耐药菌株中均检测出新出现的相关耐药基因；喹诺酮类耐药基因parE在多杀性巴氏杆菌的标准菌株和耐诺氟沙星菌株中检测出，gyrB基因仅在肺炎链球菌的标准菌株和耐氧氟沙星菌株中检测出。在大肠杆菌中均检测出CS31A毒力基因，此外标准菌株中检测出fimH基因，耐多西环素菌株中检测出afa基因；多杀性巴氏杆菌标准菌株未检测出毒力基因，耐药菌株中均检测出oma87和tbpA基因；而鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌仅在标准菌株中检测出毒力基因。[结论]说明氨基糖苷类抗生素更容易诱导菌株产生耐药基因，而毒力基因与耐药基因无明显的相关性。细菌获得耐药性后，其毒力...