酶联免疫吸附反应(ELISA)在烟草病毒病检测中的应用

本文综述了酶联免疫吸附分析法(ELISA)在烟草病毒检测中的应用。对EIISA的基本类型,改进和提高灵敏度的方法进行了分析,并阐述了该技术的某些发展趋势。     

植物病毒ELISA检测实验数据处理系统的建立

ELISA检测植物病毒时，通过酶联仪读出的OD值，借助计算机对数据进行处理和检测样品的阳／阴性判断，具有准确、快捷、方便的特点。本文介绍的ELISA实验数据处理系统（ETDMS）定置了几种最常用的酶联实验布局，达到了用计算机辅助判断的目的。     

浅谈植物病毒ELISA检测试剂盒中阳性对照问题

在植物病毒的血清学检测技术中,阴性和阳性对照的设立是必需的。由于ＥＬＩＳＡ试验本身的优点,使得它在血清学检测技术中应用最为广泛,随着技术的发展,现在有多种商品化的试剂盒出现。就ＥＬＩＳＡ试剂盒而言,毫无疑问需要给用户提供相应的对照,包括阴性和阳性对照...     

植物病毒分子检测方法概述

植物病毒粒体主要由核酸和蛋白外壳构成,蛋白外壳由许多外壳蛋白(CP)组成. CP和核酸因病毒的不同而异,是检测、鉴定植物病毒的主要依据.广义的植物病毒分子检测方法包括蛋白质检测(或血清学试验)和核酸检测方法,本文分别介绍.     

应用DIBA检测植物病毒的研究

 点免疫结合测试法(Dot Immunobinding Assay,DIBA)检测提纯TMV、PVY、CMV的最低检出率分别达到0.184ng/ml、1.28×10³ng/ml、0.056ng/ml。检测感病叶片粗汁液的最高稀释度依次为1:819,200、1:102,400、1:819,200。其中,检测TMV的最低检出率及最高稀释度分别比Hibi(1985)[1]的报道高544倍和100余倍。检测PVY粗汁液的最高稀释度比Banttari(1985)的报道高15倍[2]。HRP-IgG、抗血清在所使用的稀释度范围内(1:1000-8000、1:500-4000)对结果没有明显影响。但检测PVY时,随着血清稀释度的提高最低检出率明显下降。利用HRP-A代替HRP-IgG可以获得更为理想的检测效果。改进的DIBA(暂称为DSA-DIBA)检测TMV时未发现有任何假阳性反应。DIBA检测PVY、TuMV、PRSV-T揭示了它们相互间有效远缘的血清学相关性。实验表明,DIBA是检测植物病毒专化、快速、简便、灵敏、经济的新方法。     

检测植物病毒的三种血清学方法敏感性的比较

 以芋花叶病毒和豇豆花叶病毒为试验材料,进行了酶联免疫吸附试验,免疫吸附电子显微术和点免疫结合试验检测植物病毒的敏感性的研究。无论是检测感染组织粗汁液还是纯化的病毒,点免疫结合试验均优于酶联免疫吸附试验和免疫吸附电子显微术。在使用羟基吲(口乃木)磷酸盐和氮蓝四唑为碱性磷酸酶的底物时,点免疫结合试验检测纯化的豇豆花叶病毒的可测感度为0.35ng,芋花叶病毒为0.83ng。对三种检测植物病毒的血清学方法进行了比较,并讨论了点免疫结合试验的优点。     

用ELISA检测人血清中茶毛虫核型多角体病毒

用间接ELISA法,以109份人血清作为抗原及抗体,与茶毛虫核型多角体病毒及其抗血清进行检测,以确定茶毛虫核型多角体病毒对人群的安全性,结果均呈阴性反应。试验说明,茶园应用茶毛虫核型多角体病毒杀虫剂对人群无害。     

胶体金免疫电镜技术检测和鉴定病汁液中不同形态的植物病毒

 本文报道胶体金免疫电镜技术的建立:铜网捕获病毒后,用其稀释约200倍的同源抗血清修饰处理3~5分钟,羊抗兔IgG-金复合物标记3~5分钟,经磷钨酸负染,电镜下可见病毒粒子周围金颗粒特异性吸附,而背景上非特异性吸附很少。用此技术成功地快速检测和鉴定了病汁液中线状病毒(大麦黄花叶病毒,大麦温和花叶病毒,小麦梭条斑花叶病毒,芜菁花叶病连和马铃薯Y病毒)、棒状病毒(烟草花叶病毒、长叶车前草花叶病毒和土传小麦花叶病毒)以及球状病毒(水稻矮缩病毒、黄瓜花叶病毒和大麦黄矮病毒)。用0.5M PBSpH7.0制备病汁液,可大幅度提高同源抗血清对黄瓜花叶病毒的捕获能力。     

10种植物病毒的基因芯片检测技术研究

 本研究设计了10种植物病毒和各种对照的探针, 将探针固定在醛基化玻璃片基上制备基因芯片。用常规的Trizol法提取植物总RNA, 根据病毒的外壳蛋白基因或复制酶基因设计特异性引物, 经RT-PCR扩增相应区段并用Cy3-dCTP进行标记。将标记的PCR产物与芯片杂交, 扫描仪对杂交结果扫描, GenePix Pro 4.0软件对杂交图像进行分析。结果表明, 该芯片可以从病毒感染样本中检测到特异性识别信号, 检测灵敏度比RT-PCR高10~100倍, 所以, 基因芯片能对植物病毒作出快速、准确的检测。     

葡萄茎尖组培苗中扇叶病毒的酶联（ELISA）检测

目前使用的扇叶病毒(GFLV)检测方法包括:接种昆诺藜与千日红、嫁接接种砂地葡萄(Vitis rupestris Scheele)的St.George 品种、免疫双扩散,抗体致敏乳胶试验、免疫电镜及酶联免疫吸附试验(ELISA)。(ELISA)方法由于无需特殊设备,从而得到最广泛应用。在植株体内,GFLV 的含量随季节而变化。在某些时期,含量很低,即使用ELISA,也无法测出其中的 GFLV。茎尖     

检测兰花病毒的斑点酶联法的建立

本文建立了齿兰环斑病毒（Odntoglossum ringspot virus,ORSV）和建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus,CyMV）两种兰花主要病毒的斑点酶联法检测技术（Dot-ELISA）。用Dot-ELISA对提纯病毒和田间病叶进行检测,结果表明;检测ORSV和CyMV提纯病毒的灵敏度分别为0.82μg/mL和0.244μg/mL;病叶汁液的稀释倍数分别为1280倍和2650倍。该方法具有操作简便、成本低等优点,适合于兰花生产中的病毒检测。     

快速检测大豆疫莓菌的酶联免疫吸附技术研究

利用已经制备的大豆疫霉菌的抗血清，对大豆疫霉菌的纯培养和大豆病组织进行检测。结果表明，间接法（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）和夹心法（ＤＡＳ－ＥＬＳＩＡ）能较好地检测纯培养的大豆疫霉菌，但在检测病组织时，夹心ＥＩＳＡ的特异性较强，能够可靠地检测到大豆病组织内的病原菌。     

用酶联免疫吸附法检测番木瓜的两种病毒病

同属于马铃薯Y病毒组的番木瓜环斑病毒P型(PRSV—P)和番木瓜叶变形花叶病毒(PLDMV)能在番木瓜上引起症状相似的病害。这两种病害仅根据症状难以区别。采用双向抗体夹层的酶联免疫吸附法,可以上述两种抗体血清的1000倍稀释液对被侵染的番木瓜的天然提取液进行检测。     

改进的直接组织斑免疫测定法在植物病毒及细菌检测中的应用

 以改进的直接组织斑免疫测定(IDDTB)的直接法,用碱性磷酸酯酶(Ap)或辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗体(IgG)检测病组织中的马铃薯X病毒(PVX)、菁花叶病毒(TuMV)和马铃薯青枯细菌均获得了满意的结果。该法明显地比酶联免疫吸附测定(ELISA)和圆点免疫结合测定(DIBA)的试验程序简单、快速和准确可靠,整个检测程序可在1.5~2小时内完成。据推算其检测PVX的灵敏度相当于0.625ng/ml,可检测病叶的最低稀释度相当于1:320。以IDDTB的间接法用Ap标记的羊抗兔IgG或HRP标记的鼠抗免IgG以及兔抗病毒和细菌的多克隆抗体(IgG)检测病组织中的烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)和马铃薯环腐细菌,除耗时比上述直接法稍长外(约3小时),同样获得较满意的结果。两法均适于在田间应用。IDDTB直接法和间接法检测结果的可靠性均由免疫电镜法得到证实。上述免疫反应的结果因底物不同呈现不褪色的蓝色或深紫色,极易同健康叶片呈现的绿色相区别,并可在室温条件下长期保存。     

种传辣椒轻斑驳病毒病DAS-ELISA的检测

2003～2004年在北京、宁夏等地分批次从田间采集标样,利用辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)抗体,采用双抗体夹心酶联免疫吸附反应(DAS-ELISA)对采集的标样进行检测,结果表明北京地区被检测的24个标样中,有19个样品为阳性,占79.17%,宁夏的23个样品中检出2个样品为阳性,占8.5%。     

植物抗病过程中的活性氧代谢（一）植物抗病过程中活性氧的产生及相关酶

活性氧是生物体内含有氧原子但较分子氧有更活泼化学性质的氧的代产物及其衍生物。植物体内的活性氧主要包括:超氧物阴离子自由基(O·-2)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(·OH)、单线态氧(·O2)及一些脂类过氧化产物(如:R,ROO等自由基及ROOH)等[1、2、3、4]。植物体内活性氧含量过高会给植物带来巨大的伤害。一方面,活性氧可直接攻击核酸与蛋白质,造成细胞功能絮乱。另一方面,过量的活性氧可引发生物膜中不饱和脂肪酸的过氧化作用,造成对生物膜的损伤。近年来,一些研究者发现植物在抵御病原菌侵染的过程中也能产生和累积活性氧,引起了人们…     

约旦学者发现番茄褐色皱纹果病毒有效处理方法

《European Journal of Plant Pathology》 2020年10月31日刊文报道,约旦科学家研究了3种消毒处理方法对感染番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus, To BRFV)的番茄种子的处理效果。研究结果表明:用2%盐酸(HCl)处理30 min或10%磷酸三钠(TSP)处理3 h,处理后的种子经血清学、分子生物学、生物学检测,病毒灭活率均达到100%,可有效杀灭种子中携带的番茄褐色皱纹果病毒.     

用单克隆抗体结合酶联免疫吸附试验检测棉铃虫幼虫体内的核多角体病毒

在常规ＥＬＩＳＡ间接法的基础上，应用单克隆抗体检测感染棉铃虫核型多角体病毒的棉铃虫幼虫体内病毒粒子。３龄幼虫饲喂表层涂有ＨａＮＰＶ人工饲料后９小时，即可在幼虫抽提液中检出病毒粒子抗原，而典型病虫显症需５～６天后才出现。因此本法是一种灵敏、快速、特异性强的检测昆虫杆状病毒的方法。利用单克隆抗体结合ＥＬＩＳＡ试验分别检测来自江苏和山东不同地区棉田自然死亡的棉铃虫幼虫，表明在江苏和山东不同棉区均可检测到ＨａＮＰＶ病毒粒子，但地区间棉铃虫核型多角体病毒检出频率有显著差异