G蛋白偶联受体120在动物脂代谢及免疫调节中作用的研究进展

脂肪酸在动物脂质代谢和免疫调节中起着至关重要的作用,G蛋白偶联受体120(G-protein coupled receptor 120,GPR120)又被称为游离脂肪酸受体4(free fatty acid receptor 4,FFAR4)是G蛋白偶联受体家族成员。它可以被长链脂肪酸激活,参与调节机体糖脂代谢,是治疗人及畜禽脂质代谢紊乱及免疫调节等相关疾病的热点靶点。本文就近来GPR120在脂肪组织中的研究现状、对免疫调节的作用及其激动剂或配体作为药物运用的可能做一综述。     

G蛋白偶联受体50在牦牛卵母细胞体外成熟过程中的表达与亚细胞定位研究

试验旨在研究G蛋白偶联受体50（G protein-coupled receptor 50,GPR50）在牦牛卵母细胞体外成熟过程中的表达与定位规律,为进一步解析卵母细胞成熟的分子机制及理解牦牛繁殖的特异性提供依据。通过牦牛卵母细胞体外成熟培养,利用免疫荧光染色监测不同时间点（0~24 h）纺锤丝形态和核相的变化,确定牦牛卵母细胞减数分裂4个时期,包括生发泡期（germinal vesicle,GV）、生发泡破裂期（germinal vesicle break down,GVBD）、第一次减数分裂中期（metaphase Ⅰ,MⅠ）与第二次减数分裂中期（metaphase Ⅱ,MⅡ）的时间点。在此基础上,通过实时荧光定量PCR检测GPR50基因在牦牛卵母细胞成熟过程中的动态表达量,免疫荧光染色检测GPR50蛋白在卵母细胞成熟过程中的的亚细胞动态定位情况。结果表明,牦牛卵母细胞体外成熟0 h时90%处于GV期,6 h时94%处于GVBD期,16 h时92%细胞处于MⅠ期,24 h时94%处于MⅡ期。实时荧光定量PCR结果表明,GPR50基因在牦牛卵母细胞GV期即有表达,并在GVBD、MⅠ、MⅡ期成熟过程中逐渐升高,在MⅡ期达到顶峰,且极显著高于GV与GVBD期（P<0.01）。GPR50蛋白在牦牛卵母细胞GV期时集中在膜上表达,并随着成熟进程的发展在细胞质和细胞膜均大量表达,在MⅡ期高亮度弥散表达。以上结果表明,GPR50基因参与牦牛卵母细胞减数分裂过程并发挥重要作用,为研究GPR50在牦牛卵母细胞成熟过程中的作用及机制提供了依据。     

钙敏感受体介导的信号传导通路及生理功能

钙敏感受体(CaSR)是G蛋白偶联受体(GPCRs)C家族的成员,其在神经系统、心血管系统、胃肠道、肾脏及骨组织中有广泛的分布,当与激动剂及变构调节剂结合后,激活下游相关信号通路,对于机体钙稳态的维持、细胞的增殖分化、免疫及多种内分泌激素的释放具有重要调节作用。目前的研究报告主要来自于牛、人、鼠等,对家畜和其他动物的研究还较少,对机体各项生命活动的调控作用也不明确。为此,本文从CaSR的发现、结构、介导的信号活动及生理作用等方面作一综述,以期为研究CaSR调节动物生理活动的机制及发挥的生理功能奠定理论基础。     

京海黄鸡G蛋白偶联受体1基因生物信息学及组织表达分析

试验旨在研究参与激素调节并调控卵巢功能的可能基因,挑选候选基因G蛋白偶联受体1（G protein-coupled receptor 1）,深入研究其是否参与激素调节。根据转录组测序获得的京海黄鸡GPR1基因的CDS序列设计一对引物,利用实时荧光定量RT-PCR方法,检测GPR1基因在高、低产京海黄鸡卵巢组织中的表达情况,并与生物信息学进行关联,使用多种生物软件和在线工具对目的序列进行生物信息学分析,分析GPR1基因与其他物种的同源性、蛋白质的理化性质、蛋白质序列的跨膜区、亚细胞定位、亲水性、潜在的磷酸化位点、保守结构域及该基因所编码蛋白质的二、三级结构。结果显示,京海黄鸡与GenBank中原鸡、人、牛、野猪、黑猩猩、家兔、马、绵羊、藏羚羊、大鼠、小鼠、斑马鱼的同源性分别为100.0%、69.0%、69.1%、69.3%、68.9%、69.6%、69.2%、68.8%、68.9%、67.5%、69.0%和50.3%;氨基酸分析发现GPR1蛋白为疏水性蛋白,分子质量为40.41 ku,理论等电点为6.91,为7次跨膜蛋白;亚细胞定位显示,该蛋白属于非分泌蛋白;预测该蛋白含有25个潜在的磷酸化位点,1糖基化位点;二级结构以无规则卷曲为主,三级结构为7次跨膜螺旋结构;组织表达分析显示,GPR1基因在低产组的表达情况极显著高于高产组（P<0.01）。本试验结果将有利于GPR1基因功能的进一步分析,为研究该基因对京海黄鸡产蛋性状的调控机理提供理论依据。     

羊痘病毒G蛋白偶联趋化因子受体基因序列分析及其在鉴别病毒种属上的作用

为明确G蛋白偶联趋化因子受体(GpCR)基因在羊痘病毒种属鉴别中的作用,本实验对3株绵羊痘病毒(SPV)和2株山羊痘病毒(GPV)弱毒疫苗株的GpCR进行了克隆测序,并与GenBank中登录的21个羊痘病毒属成员相关序列进行了比对。核酸同源性分析表明SPV不同毒株之间同源性达到99.5%～99.8%;GPV之间同源性达到98.8%～99.8%;GenBank上公布的疙瘩皮肤病病毒(LSDV)之间同源性达到100%。而GPV、SPV和皮肤疙瘩病毒两两比对的同源性仅达到94.2%～95.9%。对GpCR的系统进化树分析可以看出GPV、SPV和LSDV分别位于不同的进化分枝上,而GPV与LSDV具有更近的亲缘关系。GpCR基因在鉴别GPV属和流行病学分析中具有重要价值。     

猪G蛋白偶联受体12(Gpr12)基因克隆鉴定及其表达分析

为研究猪G蛋白偶联受体12(G protein-coupled receptor 12,Gpr12)基因的序列和组织表达特征,探索Gpr12 mRNA在卵泡发育过程中的表达规律,本研究利用克隆测序技术获取猪Gpr12基因的编码区序列,并利用生物信息学方法分析Gpr12基因序列和蛋白的潜在特征;RT-PCR技术检测Gpr12基因的组织表达模式;荧光定量PCR技术检测Gpr12 mRNA在猪卵泡发育过程中的表达规律。结果表明:猪Gpr12基因编码区序列长1 005 bp,编码蛋白含有典型的7次跨膜结构域和DRY基序,存在多个潜在的磷酸化和糖基化修饰位点;Gpr12基因在所检测的组织和细胞中均有表达,且在脑、垂体和卵母细胞中高表达;随着卵泡的发育,Gpr12 mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),表明Gpr12基因可能参与了猪卵泡发育的调控过程。     

G蛋白偶联胆汁酸受体1调控机体炎症信号通路的研究进展

G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)与胆汁酸（BAs）及其衍生物结合后,激活下游通路传导,调控动物的多种代谢过程。GPBAR1通过核转录因子κB(NF-κB)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号转导通路,调节动物体炎症反应。因此,本文重点阐述GPBAR1对动物炎症通路的调控进展,为BAs及其衍生物成为治疗炎症性疾病的潜在药物提供参考。     

短链脂肪酸对奶牛瘤胃上皮细胞的炎性细胞因子和G-蛋白偶联受体41表达的影响

本试验旨在研究不同浓度短链脂肪酸(SCFA)对奶牛瘤胃上皮细胞的炎性细胞因子和G-蛋白偶联受体41(G PR41)表达的影响。试验分为4组,每组3个重复,分别用5、10、20和40 mmol/L的SCFA培养奶牛瘤胃上皮细胞24 h,收集细胞提取总RNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对炎性细胞因子、趋化因子和G PR41表达量进行测定。结果表明:添加20和40 mmol/L SCFA条件下,G PR41表达量显著高于添加5 mmol/L SCFA (P 0.05);与添加5和10 mmol/L SCFA相比,添加20和40 mmol/L SCFA显著加强了白细胞介素-1β(IL-1β)表达量(P0.05);与添加5 mmol/L SCFA相比,添加10、20和40 mmol/L SCFA显著加强肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达量(P 0. 05);此外,添加5、10和20 mmol/L SCFA之间的趋化因子20(CCL20)表达量差异不显著(P0.05),然而,添加40 mmol/L SCFA条件下,CCL20的表达量显著上调(P0.05);与添加5和10 mmol/L SCFA相比,添加20和40 mmol/L SCFA显著加强趋化因子2(CXCL2)和趋化因子8(CXCL8)表达量(P0.05);随着SCFA浓度逐渐上升,趋化因子3(CXCL3)表达量显著上调(P0.05)。综上所述,SCFA诱导GPR41表达,从而介导炎性细胞因子以及趋化因子的表达上调,介导瘤胃上皮保护性免疫反应。     

谈G蛋白在细胞信号转导中的作用

Ｇ蛋白又称ＧＴＰ结合蛋白,或鸟苷酸调节蛋白,是一族特殊的调节蛋白,它以其特定的方式偶联到许多膜受体及效应器,在细胞信号跨膜转动过程中起重要作用,本文介绍了Ｇ蛋白的结构,作用模型及其在信号转导中的作用。     

论信息传递在课堂生态系统中的作用

课堂生态是一种由教师、学生和课堂教学环境所构成的特殊的课堂教学生态系统，在这种生态系统中，教师与学生之间、师生与教学环境之间存在着信息流。信息流只有通过传递才能体现其价值，发挥其作用。信息传递使课堂生态系统产生了调节机制，有利于提高课堂教学质量。     

猪子宫大豆素(SBA)受体细胞和肥大细胞观察

本研究用HRP—SBA标记技术、甲苯胺染色法及甲苯胺蓝和HRP—SBA双重染色技术,观察了猪子宫大豆素(SBA)受体细胞和肥大细胞.发现SBA受体细胞和肥大细胞,形态相似,但两者在子宫壁内的分布和数量不同.双重染色证明,SBA受体细胞和肥大细胞是存在猪子宫内膜的不同细胞.     

猪圆环病毒2型靶细胞及其受体的研究进展

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是统称为猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus-associated disease,PCVAD)的几个综合征的主要致病因子。目前,对PCV2配体表位和细胞受体在病毒入侵过程中的致病机理还不清楚,受体识别是病毒黏附到宿主细胞表面的第一步,在病毒入侵和致病机理方面起到重要的作用。作者对近几年来PCV2侵染的靶细胞及其靶细胞受体的研究进展作一综述。     

昆虫神经肽Corazonin及其受体的研究进展

昆虫神经肽Corazonin是由11个氨基酸组成的结构非常保守的短肽,除在极大部分昆虫中是由前侧脑的神经元分泌外,也发现在少部分昆虫中是由腹部和食管下神经元分泌。Corazonin广泛存在于昆虫纲动物中,在不同昆虫中行使心率加速、体色改变、物质代谢增减、发育与生理节律调控、蜕皮延迟、吐丝减少等非常广泛的生理功能。介导Corazonin作用的Cora-zonin受体是典型的G蛋白偶联受体,定位在细胞膜上,在昆虫系统进化过程中具有一定的保守性。本文概述了昆虫Corazonin的发现、分泌、结构、生理功能及其受体的研究进展情况,归纳了研究中存在的争议,并在此基础上对其在广泛功能分化、对昆虫生存意义、胁迫环境下的生理与生化功能、受体结构功能与信号转导机制等方面的研究前景进行了展望。     

利维爱(Livial)对动脉粥样硬化兔组织内雌激素受体和低密度脂蛋白受体的影响

以去势雌兔作为对照,用高胆固醇饮食法复制动脉粥样硬化(AS)模型,研究了利维爱(Livial)在防治兔动脉粥样硬化过程中对雌激素受体和低密度脂蛋白受体mRNA表达的影响。应用RT-PCR方法,β-actin做内参照,对各组去势雌兔心脏、肝脏组织内雌激素受体和低密度脂蛋白受体mRNA的表达进行了检测。结果,2种受体在兔心脏和肝脏内均有表达。对照组,雌激素受体在心脏、肝脏内的相对表达量分别为0.43±0.12、0.39±0.20;低密底脂蛋白受体在心脏、肝脏内的相对表达量分别为0.27±0.05、0.86±0.12,差异显著(P<0.001)。AS模型组,雌激素受体和低密度脂蛋白受体在心脏、肝脏内的相对表达量分别为0.29±0.03、0.27±0.06和0.04±0.01、0.17±0.02,2种受体的mRNA表达均比对照组降低,差异显著(P<0.001)。利维爱组(饲喂高胆固醇饲料同时给予利维爱),雌激素受体在心脏、肝脏内的相对表达量为0.41±0.09、0.36±0.06,与模型组相比表达量显著提高(P<0.001),与对照组表达量接近;低密度脂蛋白受体在心脏、肝脏内的相对表达量为0.04±0.02、0.18±0.04,与模型组比较未见显著变化。由此认为,组织内2种受体的mRNA表达量降低可促进动脉粥样硬化的发生;利维爱通过提高组织内雌激素受体mRNA的表达可防治AS的发生与发展,对低密度脂蛋白受体的mRNA表达影响较小。     

Establishment of Vero Cell Line Expressing Goat SLAM Receptor Stably

Signalling lymphocyte activation molecule (SLAM,also called CD150) serves as a main cell receptor for PPRV (peste des petits ruminants virus).This study was aimed to establish a cell line,using Vero cells as the parental cell,to express goat SLAM stably,which could be used to isolate and propagate PPRV.The gene encoding goat SLAM in vitro was synthesized and cloned into eukaryotic expression vector pIRES2-GFP,and the recombinant expression plasmid pIRES2-gSLAM was obtained.The positive stably transfectant Vero-gSLAM cells were screened by G418 and identified by immunofluorescence(IF) and RT-PCR.The result of virus titration by Vero-gSLAM cell line showed that PPRV strain N75/1 had a titre of 10^-4.65 TCID₅₀ per 0.1 mL in Vero cell at 5 day after infection and the titre of PPRV N75/1 strain was 10^-5.75 TCID₅₀ per 0.1 mL in Vero-gSLAM cells.The cell line would play an active role in virus isolation,biological characteristics study and vaccine virus production of PPRV.     

稳定表达山羊SLAM受体的Vero细胞系的建立

信号淋巴激活分子（signalling lymphocyte activation molecule, SLAM）又称CD150,是小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus, PPRV）和犬瘟热病毒（canine distemper virus, CDV）等麻疹病毒属病毒感染淋巴细胞的主要受体,在病毒侵入细胞中发挥着重要作用。为了建立稳定表达山羊SLAM真核细胞系,本研究将全基因合成的gSLAM基因克隆至真核表达质粒pIRES2-GFP中,构建了重组质粒pIRES2-gSLAM。将该重组质粒转染非洲绿猴肾细胞（Vero）,经G418筛选后,筛选到稳定表达gSLAM基因的细胞系Vero-gSLAM,该细胞系在传代至第10代,仍能稳定表达gSLAM基因,PPRV N75/1病毒株可以感染且能形成明显的细胞病变（CPE）,相比在Vero细胞上10^-4.65 TCID₅₀/0.1 mL的毒价,在Vero-gSLAM上为10^-5.75 TCID₅₀/0.1 mL,其毒价有所提高。该细胞系可用于PPRV强毒分离和致弱机制等相关研究。     

Segment-dependent Expression of Muscarinic Acetylcholine Receptors and G-protein Coupling in the Equine Respiratory Tract

Muscarinic receptors are considered to be of comparable clinical importance in chronic obstructive pulmonary disease (COPD) in equines and in humans. At present, data are scarce on the expression and distribution of probable subtypes of these receptors and their signalling pathways in airway segments, including lung parenchyma and bronchial and tracheal epithelium with the underlying smooth muscle in horses. Specific [N-methyl-³H]scopolamine chloride ([³H]NMS) binding to all three tissues was saturable and of high affinity, with K _D values ranging between 1.6±0.7 and 1.9±0.3 nmol/L. [³H]NMS binding identified a higher density of total muscarinic receptors (fmol/mg protein) in the trachea (720±59 nmol/L) than in bronchi (438±48 nmol/L) or lung (22 ± 3 nmol/L). Competitive binding studies using [³H]NMS and the unlabelled subtype-selective antagonists pirenzepine and telenzepine (M₁), methoctramine and himbacine (M₂), 4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine (4-DAMP) (M₃), tropicamide (M₄) and mamba toxin (MT-3) (M₄) indicated the presence of at least three muscarinic receptor subtypes in peripheral lung tissue (50:40:24–28%: M₂>M₃>M₁), whereas in bronchus and trachea M₂ subtypes (87–90%) predominated over M₃ (14–22%), and M₁ subtypes were lacking. No differences were found between tissues in high-affinity binding sites for carbachol in the absence (31–36%) or presence of guanosine 5^′-triphosphate (GTP) (∼100%). Western blotting for G-protein α-subunits showed a much more robust expression of G_αi1/2 in the trachea (with highest receptor density) than in the lung or bronchi, whereas G_αs-protein was dominantly expressed in bronchus. Concomitantly, carbachol inhibited isoproterenol- and GTP-stimulated adenylyl cyclase activity with increasing muscarinic receptor expression (trachea > bronchi > lung). We conclude that the expression and signalling pathways of muscarinic receptors in the equine respiratory tract are segment-dependent. These receptors might contribute to the pathogenesis of COPD in the horse and could provide potential drug targets for the therapeutic use of anticholinergics in this species.     

雌激素及其受体对动物乳腺上皮细胞泌乳性能的影响

雌激素是一种在较高等动物和人体内存在的内源性雌性激素,雌激素主要有雌二醇、雌三醇和雌酚等。雌激素对雌性哺乳动物生殖发育及泌乳能力的影响已经成为近年来的研究热点之一。作者对雌激素及其受体对雌性哺乳动物乳腺上皮细胞的作用作一简要综述。