第二讲 实验室的基本设备和操作

一、实验室的基本设备及用具 1.实验室设计: 在进行植物器官、组织和细胞培养时,需要有一定设备的化学实验室,无菌室或超净工作台,培养材料用的培养室,检查培养情况的细胞学实验室。 (1)化学实验室植物组织和细胞培养时所需器具的洗涤,干燥保存,培养基的配制和分装,高压灭菌,以及材料的消毒等项的操作,均要在化学实验室内进行。     

超净工作台及其在食用菌制种中的应用

超净工作台又称净化工作台,是一种先进的空气净化设备,已广泛应用于电子、化工、精密仪器、建材等元件的制造安装,高纯度药物和食品的分装,植物组织分离,微生物分离等各个领域。随着食用菌生产,科研的蓬勃发展,近年来不少单位用超净工作台进行食用菌菌种的分离和扩制也显示出它的先进效果,但也有些部门,由于对它的结构、性能和使用方法缺乏认识,造成制种效果差或影响其使用寿命。本文就超净工作台的结构、性能和使用方法等予以简要阐述,供使用中参考。     

食用菌栽培中霉菌污染的内因控制

在食菌栽培中,控制霉菌污染一般多从灭菌、药剂防治、无菌操作和净化环境等外因措施来考虑,这是必要的,它直接起到杜绝和消灭杂菌的作用。然而,食用菌和霉菌同属真菌,在营养生理和培养条件上既有差别也有共性,两者竞相争生。一旦食用菌营养生理失调、培养条件不适,霉菌就大量发生,这就是污染的内因。利用两者营养生理和培养条件上的差异,创造食用菌生长的最佳条件,使之成为生长优势,达到以菌治菌     

食用菌母种的双塞管纯化分离法

食用菌母种被细菌或霉菌等杂菌污染而又要使用时,或者是在进行组织分离时都需要进行纯化分离.纯化分离工作一般都是直接在PDA培养基斜面或平板上进行.这种方法虽然比较简便,但往往不能有效地控制杂菌,特别是霉菌的循环污染.有人通过在培养基中加入一些抗菌素之类的药物加以控制,虽然有一定的抑菌作用,但食用菌的菌丝体也因此而受到了一定程度的药害.笔者在实验中摸索出一种新的纯化分离法——双塞管纯化分离,能较好地解决上述问题.一     

花卉组织培养中污染的发生与防范治疗

花卉组织培养是指将成熟的花卉植株中具有全能分化繁殖能力的组织取出,在培养基或者培养槽中进行离体培养,将其培养成完整的花卉幼株。花卉培养的基本流程包括取材、消毒、环境配置、接种等步骤。导致花卉组织污染主要的污染源是有害的细菌以及真菌,感染原因主要有空气污染、接种设备污染、人员污染、消毒设备污染等。为了防范这些因素污染花卉,最直接的措施是培养过程的控制,其方法通常采用抗生素、分组织培养、高盐度培养、污染幼株移除等方法。另外,不同的母株预处理以及外植体的选择也对污染情况有较大影响。     

抗生素在制食用菌母种中的应用

在食用菌母种生产中,常常会遭杂菌污染,尤其是目前大多数生产者没有超净工作台,利用接种箱转管、组织分离等生产母种,污染率极高。有关抗生素在制种中的应用,报道不多。我们在这方面进行了近一年的应用研究,取得了较好的效果。现简报如下:     

能防杂菌污染的担子菌培养基

采用锯木屑培养担子菌,除非是在无菌条件下进行培养,不然几乎都会受到木霉菌等杂菌的污染。为了防止这种污染,通常采取如下两种措施:①先用常规方法对培养基进行灭菌处理,接上菌种后置5～10℃的低温下培养,能抑制杂菌的生长;②采用苯并咪唑衍生物等药剂,来抑制培养中的杂菌。然而,采用5～10℃的低温培养,会延长担子菌的培养时间;采用药物抑     

杀菌剂在莲瓣兰原生地萌发胚培养中的应用

以莲瓣兰杂交种子原生地播种萌发突破种皮后的胚为外植体,研究了培养基中添加不同种类、不同浓度的杀菌剂对胚培养过程中真菌污染的控制作用。结果表明:培养基中添加培福朗、苯菌灵和代森锰锌能有效控制莲瓣兰杂交种子原生地萌发突破种皮后的胚培养过程中的真菌污染,胚污染率可以控制在10.0%以内,培养基中添加培福朗时胚成活率显著高于添加苯菌灵和代森锰锌,胚成活率高达92.4%;培养基中培福朗浓度在0.5～1.0mg/L范围内时胚污染率能够控制在9.0%以内,胚成活率超过92.3%,不仅能有效控制莲瓣兰杂交种子原生地萌发突破种皮后的胚培养过程中真菌污染,还能促进胚生长发育转绿成根状茎。     

食用菌斜面菌种的纯化

食用菌斜面菌种在分离、培养过程中,有时会受到杂菌的污染。因此,要及时进行纯化培养。下面介绍几种简易的纯化方法。利用寄主组织或子实体进行组织分离,在分离培养基内加入链霉素(30单位/毫升)可抑制细菌生长;加入灰黄霉素(20单位/毫升)、制霉素(30单位/毫升)可抑制真菌生长。斜面受到细菌污染,可酌情采用下列方     

食用菌母种的隐性污染

食用菌母种在分离或转管过程中,经1—2周培养后,偶尔碰到霉菌、细菌、酵母菌等方面的污染,比较容易以别。一般生产单位,多年来都采用肉眼方法除杂,我们应用普通显微镜发现,食用菌母种还有隐性污染的问题。现报道如下: (一)发现过程: 1991年6月15日,用侧5和凤尾菇14号作液体培养,使用的培养基为:马铃薯200克(煮用其汁),葡萄糖20克,磷酸二氢钾3克,硫酸     

金针菇母种组织分离法的改进

在生产部门及实验室中,金针菇母种制取一般常用组织分离法。我们多年来使用的金针菇母种组织分离方法,操作简单易行,污染率很低,只偶尔有少量污染的现象,而且分离的菌种生长健壮良好,现报告如下。 1 材料与方法 1.1 供试菌种三明1号。 1.2 培养基配方母种:马铃薯200g,蔗糖20g,琼脂20g,水1000ml;栽培料:棉籽壳88％,麦麸10％,石灰1％,糖1％。高压蒸汽灭菌。 1.3 设备器具超净工作台(或接种箱),高压蒸气灭菌锅,手术刀(刀片型号为GB2544-88),接种针,酒精灯。 1.4 试验方法栽培时用罐头瓶或塑料袋装栽培料,灭菌,接种后常规管理发菌、出菇、套袋。当金针菇有八九成熟时,把套上的塑料袋去掉,如是袋装的则把塑料袋口翻转往下,露出上半部菇柄和菇盖,放到阴爽、稍通风处晾2～5小时,待菇表面较干燥时即可使用。这是因为长期套袋过程中,袋内相对湿度     

污染食用菌母种的纯化

1.细菌污染提纯法: (1)材料:含量为4万单位/1毫升的庆大霉素一支;经高压灭菌的PDA斜面培养基10支(试管规格18×180毫米);高压灭菌的1毫升注射器一支;6号针头一个。 (2)方法:在无菌箱(室)内,把4万单位/1毫升的庆大霉素液用砂轮割开,用无菌注射器分别注入10支冷却至45℃左右的斜面试管培养基中,摇动培养基使之充分混匀,立即摆成斜面。然后把被细菌污染的菌种以无菌操作移入该斜面培养基中,置25℃下培养。2次即可把细菌甩掉,效果甚佳,对食用菌菌丝无抑制作用。 2.霉菌污染提纯法: (1)试管棉塞受潮污染了霉菌,大都出现在斜面前端,可在酒精灯火焰上连同培养基一块灼     

19种药剂对辣椒疫霉菌防效的测试

采用培养基加药测定法，测定19种药剂对辣椒疫霉菌的防效。结果表明：19种药剂中有12种药剂对疫霉菌有明显的抑制作用，其中经过反接对其生活力测定，甲霜灵、硫酸铜等8种药剂可直接杀死病原，为高效类型杀菌剂。     

木屑发酵料的制备工艺与香菇开放式栽培

本文报道了木屑堆积发酵料的制备工艺,堆料的物理化学变化和微生物群体特点,并对发酵料进行了香菇开放式栽培。木屑发酵料在中温和高温条件下都以细菌数量最多,放线菌次之,真菌最少。在中温条件下分离出的细茵以无芽抱杆菌、芽孢杆菌为主,放线菌以链霉菌为主,真茵主要是青霉属、毛霉属、木霉属。在高温条件下(50～60℃)细菌总数变化不大,主要是嗜热芽孢杆菌,放线菌仍属链霉菌属,数量由10~5增至10~8,真菌数量骤减,只有少数微紫青霉和烟曲霉,常污染食用菌培养料的霉菌多数被高温杀死。文中还提出水分、温度、酸碱度等的变化指标。     

野生食用菌户外组分专用培养基的研制

组织分离技术是食用菌获得种源的常用方法,但在操作中经常受细菌及霉菌污染。除了在操作中严格遵循无菌操作原则外,在培养基中抗生素及抗霉素是防止细菌污染主要方法。本文在培养基中添加不同浓度抗生素(青霉素和链霉素)及抗霉素(多菌灵),测定抑菌抑霉有效浓度测定、抗菌有效时间、抗菌药物热稳定性、食用菌对抗霉药物灵敏性着手,探讨培养基中有效抗菌抑霉药物比例,为食用菌保存、储藏提供理论依据。实验结果表明:当抗生素浓度≥500单位·L-1时,对指示菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌可以完全抑制,抗生素的热稳定性差,含抗生素培养基在自然存放的30天内抗细菌能力无明显变化;当加入抑霉药物(多菌灵)体积分数为0.07%~0.10%时,对青霉﹑木霉、链孢霉抑菌能力显著,且此范围内对大部分食用菌菌落生长及灵敏性没有显著影响。对部分食用菌灵敏性在后期的观察过程中并未发现有霉菌的生长现象,因此加入抗生素及多菌灵的培养基可作为食用菌组织分离的专用培养使用。     

小集锦·信息

如何提高摇瓶培养的成功率摇瓶培养中的接种方法是灭菌后于超净工作台或接种箱中在液体表面接入约0．5 cm2菌丝块。然后置恒温箱先静置培养72～96 h,先使菌丝块进行表面生长,形成液面菌丝块,然后再放在摇床上进行振荡培养72～96 h形成菌丝球。此法     

黑木耳原种常见的问题及其原因

1霉菌污染如果出现在种块上,属于母种问题;培养基表面污染,是没有严格按照无菌操作程序所造成;培养基深处同时有霉菌污染,属于培养基灭菌不彻底。培养基含水太低也容易引起霉菌污染。2母种块成活但不吃料原料不新鲜,配好料后积压时间过长,装瓶(袋)后没能及时灭菌、装锅灭菌温度     

一种新型食用菌接种器的制作

食用菌接种器在菌种制作过程中十分关键,而采用传统的接种箱、蒸汽流、火炉法等进行接种,虽然简易,但污染率较高,而购买接种仪等又投资太大.近年来,我们在总结各类食用菌接种器的基础上,利用超净工作台的原理,在当地制作推广了一种新型高效实用的接种器,接种成功率达到98%以上,提高工效7倍左右,深受制种专业户和小型菌种场的青睐.     

简易蒸汽接种工作台

在大规模制种和栽培中,接种是最重要、最关键的步骤,大型食用菌厂多采用正规的超净工作台进行接种,不但速度快,而且污染率低。但它的价格昂贵,因此不能普遍推广。绝大部分菌种厂是采用简单、实用的接种箱来进行接种,这种接种箱制作简易,投资小,但接种箱的体积小,容量有限,接种速度慢,操作不便。我们在菌种生产中采用蒸汽接种法,在实践过程中逐步改进,设计了一种简易蒸汽接种工作台,并摸索出使用这种工具进行接种的配套技术,现介绍如下:     

一品红组织培养和快速繁殖

1　植物名称　一品红 (EuphorbiaPulcherrinaWilld)。2　材料类型　嫩茎。3　培养条件　诱导培养基 :MS 6BA2 .4 NAA1.5。增殖培养基 :NS 6BA2 .0 NAA1.0。生根培养基 :1/2MS IAA0 .2 5。上述培养基均加入 0 .8%琼脂 ,30 %糖 ,培养温度 18℃～ 2 5℃ ,光照 15 0 0～ 2 0 0 0LX ,pH5 .8,光照时间 7～ 9h(小时 ) /d(天 )。4　生长与分化情况4 .1　无菌材料的处理　将从植株上刚切下的嫩茎放在流水下冲洗干净 ,再用加有少许洗涤剂的水溶液振荡冲洗5min(分钟 ) ,然后用水冲洗干净。在超净工作台上将嫩茎切段 ,用 75 %酒精消毒 30…