河南省猪伪狂犬病毒野毒感染的防控效果评估

为了解当前河南省猪伪狂犬病毒(PRV)野毒感染状况及总结评估有效的应对措施,利用g E-ELISA鉴别诊断试剂盒,对采集的900余份血清样品,进行了PRV野毒感染的血清学调查。同时针对一些代表性的猪场,进行长期的跟踪观察,评估PRV野毒感染的控制效果。结果显示,野毒感染血清阳性率为46.7%(427/915),猪场阳性率为76.7%(23/30),提示PRV在我省感染流行较为广泛。猪场跟踪显示,利用现有的疫苗,通过制定合适的免疫程序,在野毒感染的猪场依然可以生产出野毒阴性的上市商品猪,为现阶段猪伪狂犬的控制和净化提供了参考。     

崇阳县猪伪狂犬病毒感染调查

为了解湖北省崇阳县猪伪狂犬病毒的感染状况,应用PCR技术对来自崇阳县不同规模7个种猪场的126份公猪精液进行了猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,阳性率为0;同时采取了这7个已使用猪伪狂犬病病毒g E基因缺失疫苗免疫血清420份,采用了猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行了血清学抗体监测,结果检出猪伪狂犬g E抗体阳性10份,阳性率为2.37%。结果表明,崇阳县猪群中存在猪伪狂犬病野毒感染,但感染率较低,不同猪场感染差异大。     

广西猪伪狂犬病毒感染状况调查报告

为了解广西猪伪狂犬病毒的感染状况,应用PCR技术对来自广西46个种猪场的1940份公猪精液进行了猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,阳性率为0;同时对广西25个已使用猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗猪场的1455份送检血清,采用了猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行了血清学抗体监测,结果检出猪伪狂犬gE抗体阳性11份,阳性率为0.76%。结果表明,广西猪群中存在猪伪狂犬病野毒感染,但感染率较低。     

猪伪狂犬病毒纳米PCR检测方法的建立

[目的 ]快速灵敏检测猪伪狂犬病毒(PRV)[方法 ]根据PRV g B基因设计特异性引物,建立了PRV纳米PCR检测方法。[结果 ]PRV纳米PCR方法的最低检出限为10拷贝/μL,其敏感性比未添加纳米金的对照PCR提高100倍;建立的纳米PCR与猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒等常见猪病毒性病原均无交叉反应。应用纳米PCR和PRV国家标准中的PCR方法,对2014—2016年期间采集自17个省市发病猪场的148份临床样品进行平行检测,PRV纳米PCR的阳性检出率为49.3%(73/148),PRV国标PCR方法的阳性检出率为23.6%(35/148),并且PRV纳米PCR检测为阳性,而PRV国标PCR方法检测为阴性的38份样品,测序结果均确认为PRV阳性。[结论 ]本研究建立的纳米PCR检测方法敏感特异,可用于猪伪狂犬病的病原学检测。     

猪伪狂犬病毒PCR检测方法的优化

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种疱疹病毒性疾病,在世界大部分地区都是地方性家畜流行病。而且猪伪狂犬病与其他猪传染病不易区分,因此,建立一个特异性强的检测方法对于其诊断具有重要意义。实验是在实验室已经建立伪狂犬病毒单项PCR检测方法的基础上,对扩增条件进行优化后对其特异性进行了验证。结果发现,优化后的方法特异性好,只有猪伪狂犬病毒扩增为阳性,其余DNA病毒:猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅰ型(PCV1)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)均呈现阴性。因此,本研究方法可以为今后实验室检测猪伪狂犬病毒提供参考。     

猪伪狂犬病毒的分离和鉴定

从病猪肾脏分离到1株病毒.该病毒接种的Balb/c小鼠出现神经症状,死亡率为60%,接种PK-15细胞出现拉网病变,猪的狂犬病毒阳性血清能特异性的中和该分离毒.根据基因库(genebank)的PRV gE基因设计的引物能扩增出特异性片段,结果证实该病毒为伪狂犬病毒.     

猪伪狂犬病毒分离和鉴定

从病猪肾脏分离到1株病毒.该病毒接种Balb/c小鼠出现神经症状,死亡率为50%,接种Vero出现拉网病变;伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)阳性血清能特异中和该分离毒;根据基因库(genebank)的PRV gD基因(AY169694)设计的引物能扩增出特异性片段.以上结果证实该病毒为伪狂犬病毒.     

猪伪狂犬病毒感染PK15细胞对细胞凋亡及相关凋亡因子的影响

为研究PRV感染PK-15细胞对其细胞凋亡及相关凋亡因子的影响,本试验采用体外细胞培养技术在不同时间点收集细胞、应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性、流式细胞仪测定细胞凋亡率、实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因caspase-3,Bcl-2,Bax和Bcl-xl的表达情况。结果显示,PRV感染24 h后可明显抑制细胞的增殖,这种抑制与时间密切相关,与感染剂量无显著差异。流式细胞仪检测也显示PRV能明显提高其凋亡率,PT-PCR显示PRV感染后caspase-3,Bax表达量明显上调,Bcl-xl,Bcl-2表达量明显下调。结果表明,PRV在感染过程中对细胞的生长的影响与时间紧密联系,能够诱发细胞凋亡,Bax,Bcl-2,Bcl-xl,caspase-3,起着重要的调控作用。     

纳米元素硒对猪伪狂犬病毒体外增殖抑制作用的初步研究

以IBRS2细胞为模型, 研究不同浓度的纳米元素硒对猪伪狂犬病毒体外复制的抑制作用.结果表明,在1～20μmol L-1范围内,纳米元素硒对细胞生长没有影响,但对猪狂犬病毒的体外复制呈现显著的抑制作用(P<0.05),且随着浓度的增加其抑制作用增强.     

乳酸锌对猪空肠上皮细胞IPEC-J2增殖及相关调控基因mRNA表达的影响

旨在探讨乳酸锌对猪空肠上皮细胞增殖及相关调控基因ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1和ZIP4 mRNA表达的影响.用乳酸锌的锌浓度分别为50、100、150、200 mg·L-1的培养基培养IPEC-J2细胞,采用比色法测定分析细胞增殖变化；用实时荧光定量RT-PCR方法检测Zn T2、DMT1、IREG-1、MT1及ZIP4 mRNA表达,以TBPmRNA的表达水平作为内参对照.在细胞培养前36 h,乳酸锌对IPEC-J2细胞基本没有影响,随锌浓度递增细胞增殖幅度升高；乳酸锌处理IPEC-J2细胞后,Zn T2、DMT1、IREG-1及MT1 mRNA表达随锌浓度增高而升高,ZIP4 mRNA表达则随锌浓度增高而降低.添加乳酸锌可以促进IPEC-J2细胞增殖,上调ZnT2、DMT1、IREG-1、 MT1 mRNA表达,下调ZIP4 mRNA表达.     

Expression and Immunogenicity Analysis of Porcine Pseudorabies Virus gB Protein

In order to study the expression and immunogenicity of porcine pseudorabies virus (PRV) gB protein,the specific primers were designed with the template of PRV preserved in the laboratory, and the 612 bp conserved gene fragments were amplified and sequenced, then it was cloned into the expression vector pET-28a and transformed into E.coli BL21 (DE3), the target protein was obtained after induced expression and purification.Western blotting was performed to analyse its immunogenicity. The results showed that gB protein was 30 ku, which mainly expressed in the form of inclusion body, and the concentration of the protein was 106 μg/mL, with well reactogenicity. 13 PRV positive serum and 16 negative serum in the samples were detected using ELISA Kit on sale, using positive serum, the PRV antibody detection method was initially established with the PRV gB protein as antigen package.     

猪伪狂犬病病毒gB蛋白表达及免疫原性分析

本试验旨在研究猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV） gB蛋白的表达并分析其免疫原性,以PRV病毒液为模板,设计特异性引物,扩增大小为612 bp的保守片段并测序,将其克隆到表达载体pET-28a中,转化表达菌BL21（DE3）,经诱导表达、纯化得到目的蛋白,进行Western blotting分析验证并分析免疫原性。结果表明,表达的gB蛋白大小为30 ku,主要以包涵体形式存在,复性后浓度为106 μg/mL,且具有良好的反应原性。应用市售试剂盒检测到样品中含13份PRV阳性血清和16份阴性血清,利用检出的阳性血清,初步可建立以PRV gB蛋白为包被抗原的PRV抗体ELISA检测方法。     

伪狂犬病病毒感染抗体监测及伪狂犬病流行状况分析

在北京大兴和顺义区2个使用伪狂犬病病毒（porcine pseudorabies virus,PRV）Bartha株基因缺失疫苗的规模化猪场进行为期3年的猪伪狂犬病野毒感染抗体跟踪监测,并进行猪场的临床状况和组织样品的PCR检测,结果显示,北京市2011—2012年间在猪伪狂犬病基因缺失疫苗免疫猪场发生了猪伪狂犬病的流行。提示,应对该状况加以重视,对其发病原因需进行进一步的病毒分离和毒株分子遗传学分析。     

猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒混合感染的诊治

2009年9月,贵州省贵阳市某养猪场暴发了以母猪流产和仔猪发热、神经症状为特征的疾病,经过流行病学调查、临床症状观察、病理解剖及实验室诊断,诊断为猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒混合感染。通过采取综合有效的防制措施,使猪场疫情得到及时、有效的控制。     

一例猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织等病料中,经PCR扩增出大小为217 bp的伪狂犬病病毒gp50的基因片段,结果证实为猪伪狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus,PRV)感染。随后采用BHK-21细胞进行猪伪狂犬病病毒的分离培养,该分离株经细胞传代培养5代后,能够产生典型的细胞病变,经PCR鉴定为伪狂犬病病毒,其病毒感染力达10^8.68 TCID₅₀/0.1mL。最后用10^7.0 TCID₅₀/mL病毒培养物接种家兔,48 h后注射部位出现典型瘙痒、皮肤破损等症状,于72 h后全部死亡。结果表明,该伪狂犬病病毒分离株对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫及诊断研究奠定了基础。     

凋亡相关斑点样蛋白敲除PK-15细胞系的建立及对PRV感染的影响

本试验旨在研究凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)感染PK-15细胞的影响.以慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建猪肾上皮细胞(PK-15)A SC基因稳定敲除细胞系,通过T7核酸酶检测靶基因的敲除效率;CCK-8试剂盒检测PK-15敲除ASC基因对细胞增殖的影响;采用流式细...     

大理地区散养户猪伪狂犬病病毒野毒株感染的血清学分析

为了解云南大理地区散养户猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染的情况,从大理地区30多个散养户6月龄及6月龄以上猪群中随机采集了共112份血清,采用间接ELISA方法对血清样本进行PRVgE抗体检测。结果显示,112份血清中抗PRVgE抗体阳性率为8.04%。结果表明,大理地区散养户6月龄及6月龄以上猪只猪伪狂犬病病毒野毒株感染率较低。     

Establishment and Application of Duplex RT-PCR Assay for Detection of Porcine Epidemic Diarrhea Virus and Pseudorabies Virus

In order to establish an assay for detecting porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) and pseudorabies virus (PRV),two pairs of primers were designed basing on the M gene of PEDV and gE gene of PRV,respectively.The total RNA of standard PEDV and PRV strains were used as templates to establish the duplex RT-PCR assay.The specificity,sensitivity,repetition and clinic detection of the established assay were tested.The result revealed that the threshold of duplex RT-PCR was 10 TCID₅₀/mL of PEDV and PRV,and no products were amplified from the cell or the nucleic acid of other 7 kinds of pathogenic viral or bacterial microorganism.The detection results for 26 clinical suspicious PEDV or PRV infected pigs were consistent with the results tested by sequencing.This study suggested that the duplex RT-PCR method was highly specific,repeatable and sensitive,and was suitable for clinic rapid differential diagnosis of PEDV and PRV.     

猪流行性腹泻病毒与猪伪狂犬病病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立猪流行性腹泻病毒（PEDV）与猪伪狂犬病病毒（PRV）的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank已登录的PEDV膜蛋白M基因和PRV gE基因保守区域序列设计了2对特异性引物,以PRV和PEDV混合总RNA为反转录模板,初步建立了PRV和PEDV的二重RT-PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性、重复性验证和临床应用检测。结果显示,该方法对两种病毒的最低检测限均为10 TCID₅₀/mL病毒含量,重复性好,特异性强,可特异性地扩增PEDV和PRV细胞培养物,但对其他7种病原对照扩增不出任何条带,对26份临床疑似PEDV和PRV感染样品检测结果与测序鉴定结果完全一致。本研究成功建立了PEDV和PRV的二重RT-PCR检测方法,为临床上猪流行性腹泻和猪伪狂犬病的快速鉴别诊断提供了方法。