福建省蛋鸡血管瘤型J亚群白血病的分子生物学诊断

针对福建省某鸡场的蛋鸡群发生产蛋下降和部分死亡,病鸡脚趾明显呈现血管瘤特征,运用实时荧光定量PCR方法对病鸡组织和血液样品进行检测,检出了J亚群白血病病毒(ALV-J);通过基因序列的比较分析,发现其氨基酸序列与国外及国内其他省份报导的ALV-J有很高的同源性,从病原分子生物学诊断角度证实福建省蛋鸡群中ALV-J的存在。     

江苏省禽J亚型和AB亚型白血病共感染的血清学调查

[目的]进一步了解江苏省鸡群白血病的感染情况。[方法]从2011年3月到2012年5月在江苏省部分地区的鸡场随机采样600份,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测J亚型白血病(ALV-J)和AB亚型白血病(ALV-AB)的抗体阳性率。[结果]江苏省的大多数鸡场均存在白血病的感染,其中ALV-J和ALV-AB为阳性的鸡场均有10个,ALV-J最高阳性率达35.56%,ALV-AB最高阳性率为15.56%,共感染的阳性率最高达6.90%。ALV-J、ALV-AB感染的年龄段存在一定差异,感染率最高的年龄段是12～24周龄;黄羽肉鸡和麻鸡ALV-J、ALV-AB感染率都较高,蛋鸡也存在ALV-J感染的情况,表明近年来J亚型白血病的宿主范围正在进一步扩大。[结论]该研究为进一步开展鸡白血病的净化工作提供了一定的依据。     

湖北蛋鸡群血管瘤型ALV-J血清学检测和PCR诊断

用ELISA和ALV-J特异性PCR对抽检的湖北省某蛋鸡场的4只鸡冠苍白、毛囊和鸡爪出血、脚趾间和剑状软骨处长有肿瘤的海兰褐病鸡,进行J亚群禽白血病血清学检测和ALV-J前病毒核酸检测。结果4只病鸡ALV-J特异性PCR检测和泄殖腔拭子ALV-J ELISA抗原检测全部为阳性;间接ELISA检测血清抗体,有3只鸡呈阴性,1只鸡为阳性。血清学检测和PCR检测表明,抽检病例为血管瘤型J亚群禽白血病,并且鸡群中既存在先天感染或早期感染情况,也存在后天感染的现象。     

江西地方品种鸡禽白血病病毒及鸡白痢沙门氏菌感染状况的研究

禽白血病毒(ALV)和鸡白痢沙门氏菌(SP)均可以垂直传播。通过禽白血病病毒(ALV)J亚群抗体和群特异性P27抗原的商品化ELISA检测试剂盒和全血平板法等调查了江西省13个种鸡企业的8个地方品种鸡群ALV和SP的感染情况,结果显示:ALV-P27抗原、ALV-J抗体均有检出,江西省地方鸡ALV-J亚型感染相当严重,迫切需要净化。江西地方品种鸡白痢沙门氏菌感染率相差较大,同一品种鸡在不同场之间的SP感染率差异明显。生物安全措施会影响鸡白痢的感染情况,在鸡白痢的净化过程中,采取严格的淘汰制度的同时,必须加强饲养管理措施来控制鸡白痢的发生。     

江西地方品种鸡禽白血病病毒及鸡白痢沙门氏菌感染状况的研究

禽白血病毒(ALV)和鸡白痢沙门氏菌(SP)均可以垂直传播。通过禽白血病病毒(ALV)J亚群抗体和群特异性P27抗原的商品化ELISA检测试剂盒和全血平板法等调查了江西省13个种鸡企业的8个地方品种鸡群ALV和SP的感染情况,结果显示:ALV-P27抗原、ALV-J抗体均有检出,江西省地方鸡ALV-J亚型感染相当严重,迫切需要净化。江西地方品种鸡白痢沙门氏菌感染率相差较大,同一品种鸡在不同场之间的SP感染率差异明显。生物安全措施会影响鸡白痢的感染情况,在鸡白痢的净化过程中,采取严格的淘汰制度的同时,必须加强饲养管理措施来控制鸡白痢的发生。     

J亚型禽白血病病毒对鸡产蛋性能的影响

【目的】对四川省某鸡场鸡群进行J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染筛查,并进行ALV-J病毒感染与蛋鸡产蛋性能的相关性研究。【方法】随机抽检1 016只鸡的血样,提取总DNA,利用PCR扩增目的基因ALV-J,PCR产物用1%的琼脂糖电泳检测。【结果】该鸡群的感染率为10.33%;同时,ALV-J阳性个体在大部分产蛋性能方面显著低于ALV-J阴性个体:ALV-J感染组鸡的开产日龄极显著推迟5.68d(P<0.01),开产体重显著降低103.17g(P<0.05),300日龄产蛋量极显著减低14.59%(P<0.01)。同时,ALV-J阳性个体较阴性个体各时期累计产蛋量均有显著或极显著下降(P<0.01或P<0.05);且ALV-J感染鸡群产蛋高峰持续时间短,后期产蛋率快速下降。【结论】J亚群禽白血病毒ALV-J对鸡的产蛋性能造成了严重的负面影响,感染鸡只的产蛋性能显著降低,ALV-J严重制约了禽业的快速发展。     

GZAS20200701分离毒株gp85基因克隆与序列分析

为了解贵州高脚鸡源的禽白血病病毒的gp85基因变异情况,试验采用ALV p27抗原ELISA试剂盒对贵州省高脚鸡的26份血样进行检测;并采用RT-PCR方法对其中一份血样进行ALV-A/B/J亚型鉴定,然后用gp85基因引物进行RT-PCR扩增、克隆及测序分析。结果表明,26份高脚鸡血样ALV p27抗原ELISA检测阳性率为0（0/26）;ALV-A/B/J引物RT-PCR扩增的条带为422 bp,与ALV-J目的大小相符;以ALV-J阳性样品为模板,用ALV-J-gp85引物扩增出大小为931 bp左右的产物,命名为GZAS20200701。经克隆测序后与ALV参考株进行比对分析,同源性分析中GZAS20200701与ALV-J亚型中的LYJ195株同源性最高,达99.5%,与ALV-B亚型中的GD08株同源性最低,为48.5%,与A、B、C、D、E、K亚型的同源性为48.5%~50.8%。系统进化树中GZAS20200701与ALV-J中的LYJ15株属于同一个分支,亲缘关系最近,说明GZAS20200701属于ALV-J。试验为贵州高脚鸡ALV-J-gp85基因的遗传变异情况提供数据,丰富了贵州地方品种鸡ALV-J-gp85的资料。     

肉仔鸡J亚群白血病继发感染大肠杆菌病的诊断

随着养禽业高度集约化迅速发展,鸡J亚群白血病已成为危害肉仔鸡重要的疾病之一,且因与其他疾病如大肠杆菌病混合感染而使死亡率升高。本论文以吉林省桦甸市某养殖户饲养的肉鸡发病病例为对象,结合鸡群的临床症状,病理变化,病原菌的分离,通过涂片染色镜检、细菌分离、PCR等方法检测鸡ALV-J特异性抗原gp85基因等实验室诊断。结果为MAC上菌落为圆形、砖红色,EMB上为紫黑色、圆形、有光泽的菌落,镜检为G-杆菌,符合大肠杆菌特性;PCR检测可扩增出约1 000 bp的阳性条带,与预期大小相符,符合J亚群白血病特性。该病例为鸡J亚群白血病继发大肠杆菌感染。     

J亚群禽白血病病毒TD-PCR检测方法的建立及初步应用

采用J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染DF1细胞提取的总DNA作为模板,以H5和H7为特异性引物,建立检测ALV-J的降落PCR(TD-PCR)方法,并对反应体系进行优化。结果表明:建立TD-PCR方法灵敏度高、特异性强,可检测0.105 ng的DNA,该方法与网状内皮组织增生症病毒、马立克病病毒、鸡贫血病毒及I群禽腺病毒没有交叉反应。运用TD-PCR、ELISA以及病毒分离对临床病料进行检测,TD-PCR方法与ELISA检测结果一致(100%),均比病毒分离检出率(75%)高。证明TD-PCR检测ALV-J的方法具有快速、灵敏、特异等优点,可满足临床、生产实际检测的需要。     

江西地方品种鸡禽白血病病毒感染状况的研究

为了解江西省地方品种鸡群中禽白血病病毒的感染状况,利用针对禽白血病病毒(ALV)J亚群抗体和群特异性P27抗原的商品化ELISA检测试剂盒,对江西省12个种鸡企业的6个地方品种鸡进行禽白血病感染情况调查。结果显示江西几个地方品种鸡ALV的感染相当严重,迫切需要净化。但不同品种鸡的P27抗原的检出率与ALV-J抗体的检出率有一定差异。P27抗原阳性率最高的为JXDF4品种鸡(36.67%),其次为JXDF5、JXDF1、JXDF3、JXDF6、JXDF2品种鸡。与P27抗原检出情况类似,JXDF4、JXDF5的ALV-J抗体阳性率相对较高,分别为15%、30%,而其他4个地方品种的鸡群ALV-J抗体阳性率相对较低(10%)。调查还显示,同一品种鸡在不同种鸡场之间的ALV-J感染率差异较大。试验结果为各种鸡场开展净化工作提供了科学依据。     

实验感染肉鸡组织中J亚群禽白血病病毒的抗原定位

从实验感染J亚群禽白血病病毒(ALVJ)的髓细胞性白血病肉鸡病例中,选取典型病例,用J亚群禽白血病病毒单克隆抗体通过免疫酶组化试验对不同组织进行了抗原定位观察。结果显示:在实验感染阳性肉鸡体内实质组织细胞及瘤细胞的核膜和细胞浆里可见不同程度的棕黄色阳性反应,可为探讨ALVJ对体内组织细胞的嗜性提供依据。     

Study on the Pathogenicity of Chinese Strains of Subgroup J Avian Leukosis Viruses

The pathogenicity of 4 Chinese strains of subgroup J avian leukosis viruses (ALV-J), SD9901,SD9902, YZ9901 and YZ9902, was studied. The results showed that only SD9902 among the 4 strains induced mortality from myeloid leukosis (ML). In the 12 meat-type chickens inoculated with SD9902 at 1-day-old, 9died between 22 days and 38 days after inoculation. No death or ML was found in chickens inoculated with the other 3 strains during the period of 6 months. These results suggested the SD9902 strain of ALV-J was an acute transforming virus, but SD9901, YZ9901 and YZ9902 were non-transforming viruses. All 4 Chinese strains did not induce any tumors in egg-type SPF chickens during 7 months after hatching when viruses were injected into 11-day-old embryos.     

鸡J亚群白血病病毒与网状内皮增殖病病毒混合感染发病机理的研究

通过人工感染建立了ALV—J、REV单独感染和混合感染1日龄肉仔鸡的病理模型。初步研究表明混合感染使试验鸡的生长发育障碍、免疫器官萎缩、对细菌易感性及死亡率等指标显著升高。 动态病理学研究表明：REV感染主要引起骨髓网状细胞及淋巴样细胞弥漫性或灶状浸润,ALV—J感染主要引起骨髓髓系细胞灶状或弥漫性显著增生,混合感染时骨髓病变与REV感染基本一致,但相对较严重,并见ALV—J感染病变。各病毒感染组免疫器官均发生了严重的实质萎缩性病变,病变以混合感染组最重,REV组次之。在某些组织器官ALV—J组见嗜酸性粒细胞样的瘤细胞浸润增生,REV组见网状细胞及淋巴细胞样瘤细胞浸润增生,而混合感染组见以上两种瘤细胞增生。从混合感染组的病变来看,在致病性上ALV—J与REV之间的确存在明显的协同促进作用,导致机体的免疫抑制加重,但混合感染早期尚未发现REV对ALV—J致瘤的促进作用。     

安徽省地方品种鸡J-亚群禽白血病感染状况的血清学研究

[目的]了解安徽省优良地方品种鸡群中禽白血病病毒J-亚群(ALV-J)的感染状况。[方法]对安徽省8个鸡场、7个不同地方品种鸡开展了ALV-J感染的血清学调查。[结果]安徽省被检测鸡场均存在ALV-J感染,被检测鸡群个体阳性率高达49.9%,甚至部分鸡场鸡群个体阳性率高达86.2%。AHDF5品种鸡个体阳性率高达86.2%,其次为AHDF2、AHDF6、AHDF3、AHDF7、AHDF4和AHDF1品种鸡。4个周龄段的鸡群均有ALV-J抗体阳性鸡,但存在一定程度的差异.12周龄以下鸡群ALV-J阳性感染率相对较低,为7.1%;随着周龄的增大,ALV-J阳性率总体上呈现上升趋势,最高达50%。[结论]安徽省地方品种鸡中ALV-J的感染非常严重,应及早对ALV-J进行净化和采取综合防控措施。     

三群商品代蛋鸡J亚群白血病跟踪观察

【目的】了解J亚群白血病在海兰褐蛋鸡群中发生和发展的真实表现及其与病毒分离和抗体反应的关系；【方法】对来自3个鸡场39至43周龄31只疑似ALV-J感染鸡做了连续两个月的临床、病理、病毒血症和抗体反应动态观察和比较；【结果】这3群鸡对ALV-J感染率非常高，有28只鸡在死前感染ALV-J或呈现持续性病毒血症，其中14只表现为无抗体反应的免疫耐受性持续性病毒血症。这3群鸡都表现为典型J亚群白血病髓细胞样肿瘤特征性病变，且在几乎所有不同脏器和组织均可出现。在31只鸡中，有13只鸡同时在3个或3个以上不同脏器中出现肿瘤/血管瘤，有1只鸡出现在5个器官中；【结论】中国近年来不仅仍有ALV-J在蛋鸡群中流行，而且在过程中，ALV-J致病性逐渐增强。     

浙江省地方鸡种禽白血病毒抗原检测与部分分离株GP85基因序列分析

为了解浙江地区地方品种鸡中J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis vrius,ALV-J)的感染情况与流行毒株的分子特征,对浙江省部分地方品种鸡体内ALV的p27抗原进行了检测,从疑似感染鸡群中检测分离到5株ALV-J,并对其GP85基因进行PCR分子克隆和序列分析。研究结果显示:在检测的19个地方鸡品系中,所有品系的鸡样本都呈现抗原阳性,其中101系的抗体阳性率最高,母鸡阳性率为40.48%,公鸡阳性率为16.54%;126系次之,母鸡阳性率为28.87%,公鸡阳性率为3.30%;171系抗体阳性率最低,其母鸡阳性率仅为4.08%,公鸡的感染率为0。为了解地方鸡群中ALV-J的遗传变异,对分离到的5株ALV-J的GP85基因进行了分子克隆和序列分析。结果表明,5个分离毒株的GP85基因大小均为924 bp,与预期一致;本研究样品序列之间的核苷酸同源性为90.8%～98.5%,与原型毒株HPRS103核苷酸相似性为90.3%～97.0%,与国内其他分离株的同源性为86.5%～99.0%。分离株与福建(FJ201308株)和广东(WF13株)分离株的同源性...     

PI3K/Akt信号转导通路在ALV-J感染中作用的初步研究

 【目的】探讨ALV-J在宿主细胞中复制与PI3K/Akt信号转导通路的关系。【方法】将血管瘤病变型ALV-J毒株HN06和骨髓瘤病变型ALV-J毒株NX0101分别感染DF-1细胞,通过Western blot、Real-time PCR、IFA和ELISA等方法,观察细胞Akt蛋白磷酸化水平、病毒RNA表达水平和病毒蛋白表达水平等指标。【结果】HN06株和NX0101株在体外细胞中复制水平有差异。HN06株的早期感染可引起Akt转导通路的活化,病毒引起的Akt磷酸化具有病毒滴度依赖性,而且能被PI3K特异性抑制剂LY294002所抑制,表明HN06株诱导的Akt活化是PI3K途径依赖的。LY294002可在病毒感染早期呈剂量依赖性地显著降低受染细胞中HN06 RNA水平、囊膜蛋白水平和细胞培养物上清中的病毒粒子含量。【结论】PI3K/Akt信号转导通路活化对HN06株在细胞感染早期具有重要的作用,该结果与已报道的有关细胞PI3K/Akt信号转导通路参与NX0101株的早期感染的结论一致。本研究为进一步阐明ALV-J入侵宿主细胞和复制的精确机制等研究奠定了基础。     

地方鸡禽白血病病毒感染调查及主要流行亚群分析

为了解湖北省地方鸡禽白血病病毒的感染状态及主要流行亚群,从麻城绿壳蛋鸡、江汉鸡、景阳鸡3个地方品种核心群采集了7 477份样品,进行蛋清p27抗原检测、公鸡病毒分离鉴定及分离株gp85基因序列分析。结果显示:3个地方鸡种蛋清p27抗原阳性率分别为1.32%、6.54%和2.82%,公鸡病毒分离率为6.11%、30.14%和8.64%,表明湖北省地方鸡禽白血病病毒感染比较严重,不同品种的感染率不同,公鸡的排毒率高于母鸡。利用PCR方法将分离的15株禽白血病病毒分为两大亚群,分离株gp85基因遗传进化分析结果显示,3个地方鸡品种主要流行J、K亚群禽白血病病毒,均存在J、K亚群禽白血病病毒的共感染,表明湖北省地方鸡禽白血病病毒感染情况较为复杂。     

湖北省禽白血病典型病例的病理学诊断

对湖北省荆门市、襄阳市及武汉市新洲区的三例疑似禽白血病病例进行组织病理学观察,并采用禽白血病病毒抗体检测试剂盒(ALV-AB)及禽白血病病毒-J亚群抗体检测试剂盒(ALV-J)对样本进行血清学检查.结果表明,武汉市新洲区送检病例为血管瘤并发黑色素瘤、淋巴瘤及髓细胞瘤并发现肝细胞异常增生和肾小管上皮细胞异常增生,ALV-AB亚群血清抗体阳性;荆门市送检病例为淋巴瘤并发髓细胞瘤,AB亚群、J亚群血清抗体均为阴性;襄阳市送检病例为典型的髓细胞瘤混杂纤维肉瘤,ALV-J亚群血清抗体阳性.     

An Evaluation of the Infection Status and Source of Subgroup J Avian Leukosis Virus in Cloned Free-Range Layers

In recent years, subgroup J avian leukosis virus (ALV-J) has been found to frequently infect layers in China. This virus is responsible for economic losses due to both mortality and decreased performance in chickens. In this study, 45-d-old cloned free-range layers were suspected to be infected with ALV and other immunosuppressive diseases because their feathers were unkempt and their growth rate was impaired. To estimate the infection status and determine the source of ALV-J in the flock, 30 cloacal swabs were randomly collected to measure the p27 antigen level by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Among the birds that were tested, 87% (26/30) were positive. In addition, 6 anticoagulant blood samples were aseptically collected at random from the flock when the layers were 60 d old. These samples were centrifuged to obtain the leukocytes, which were then used to inoculate chicken embryo fibroblast (CEF) cells for the identification of ALV-J by indirect immunofluorescence (IFA). Of the samples tested, 100% (6/6) were positive. The flock's production performance was also investigated, and 10 layers were necropsied to evaluate pathological changes at 115 d of age. The flock never laid eggs even though they reached the age of the first laying (110 d). Furthermore, there were pathological changes present, including atrophy of the thymus and bursa of Fabricius, undeveloped ovaries, glandular stomach haemorrhage, and hepatosplenomegaly. Paraffin-embedded sections of intumescent liver and spleen were prepared for antigen localisation using IFA. Positive signals were prevalent in paraffin-embedded sections of the intumescent liver and spleen. Furthermore, provirus DNA was extracted from 4 cloned free-range layers, and 2 paternal parents (HR native cocks), and the gp85 gene of ALV-J was amplified by PCR to analyse the genetic variation. The results of the autogenous variation analysis showed that the 6 strains were 98.5–99.7% homologous. This study indicated that there was persistent infection with ALV-J by dynamic inspection, which seriously reduced the production performance of the flock. In addition, the genetic variation analysis showed that ALV-J in the flock was more likely to have originated from the paternal parent, the HR native cock.