枸杞内生真菌NQ8GⅡ4定殖促生作用研究

为进一步明确内生生防菌NQ8GⅡ4在宿主和非宿主植物中的定殖能力和促生作用,采用生物学方法测定野生型NQ8GⅡ4菌株的促生潜力;利用绿色荧光蛋白(GFP)标记的NQ8GⅡ4-GFP菌株,对枸杞、番茄、小麦、西葫芦、生菜和芹菜等6种植物进行灌根处理,利用激光扫描共聚焦显微镜观测NQ8GⅡ4-GFP菌株在宿主和非宿主植物中的定殖情况,同时检测不同接种浓度对枸杞苗生长的影响。结果表明,野生型NQ8GⅡ4菌株在5 d时赤霉素浓度可达16.6μg/mL,并具有一定解磷、产铁载体、纤维素酶和蛋白酶的能力。NQ8GⅡ4-GFP菌株能定殖于枸杞、番茄和小麦的根部,不能定殖于芹菜、生菜和西葫芦。不同植物定殖率有明显差异,在宿主植物枸杞根部定殖率最高,为93.9%,在非宿主植物番茄根部定殖率为91.84%,而在小麦根部定殖率仅为21.43%。不同接种浓度下对枸杞苗生长指标影响不同,其中以10⁵～10⁶ CFU/mL孢子液灌根,对枸杞苗促生作用显著,在农业上具有良好的应用前景。     

杜仲内生真菌的分离及其鉴定

从杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的根、茎、叶中分离得到80株内生真菌,经显微形态特征观察鉴定为14个属,其中根部33株涉及10个属,茎部26株涉及9个属,叶部21株涉及6个属。结果表明,杜仲的不同部位内生真菌的数量、分布和种群存有差异。     

长春花内生真菌的分离及鉴定

[目的]为研究内生真菌与长春花悬浮细胞互作奠定基础。[方法]从长春花茎杆韧皮部分离出内生真菌,对分离出的菌株进行鉴定,用PDA培养基、PDA培养基+长春花悬浮细胞的水提物对内生真菌进行液体培养,薄板层析检测内生真菌液体培养物的提取物及发酵液。[结果]从常规PDA培养基中分离得到11株菌株,而从其他PDA培养基中没有分离到内生真菌。分离出的11株菌株的大型分生孢子呈纺锤形或镰刀形,其代谢产物通过薄层层析,没有检测到长春花生物碱。表明分离出的内生真菌本身不能直接合成长春花生物碱,而可能对生物碱的合成起促进作用。[结论]从长春花中分离得到的内生真菌属镰刀菌属。     

板栗内生真菌的分离及其鉴定

以研究板栗内生真菌的分布特性为目的,采用组织分离法,从板栗(Castanea mollissima)的叶、叶柄、茎韧皮部、茎木质部得到69株内生真菌,并利用直接调取制片法和裁片培养法,鉴定为14个属,其中叶部32株涉及8个属,叶柄11株涉及4个属,茎韧皮部25株涉及10个属,茎木质部1株涉及1个属。鉴定结果表明:板栗的不同部位内生真菌的数量、分布、种群及其组成存有明显差异性。为板栗的病虫害防治的进一步研究提供了一定的理论基础,具有一定的参考意义。     

核桃内生真菌的分离鉴定

从核桃的根、茎、叶内分离到72株内生真菌,依据其形态特征,共鉴定出47种真菌;并对分离材料的表面消毒方式做了筛选,结果表明用75%的酒精消毒3min效果最佳。     

羊蹄内生真菌的分离鉴定及其多样性分析

[目的]为从羊蹄中寻找具有药用价值的内生真菌奠定基础。[方法]利用PDA培养基进行羊蹄内生真菌的分离、纯化和初步鉴定,并对其进行多样性分析。[结果]从羊蹄中共分离到45株内生真菌,其中根部21株,占46.67%。从茎部和叶部分别分离到14株和10株。这说明羊蹄根部的内生真菌资源比茎部和叶部更为丰富。羊蹄根部的内生真菌比茎中和叶中生长得快。形态学鉴定结果表明分离菌株中共有青霉属8株,木霉属4株,镰孢霉属3株,拟茎点霉属、黑霉属和曲霉属各1株,无孢类群27株(占整个内生真菌类群的60%)。[结论]青霉属、木霉属和镰孢霉属为羊蹄内生真菌的优势种属,而无孢类群为其绝对优势类群。     

植物内生菌的侵染定殖研究概况

植物内生菌对宿主具有增强抗逆、促生以及产生与宿主植物相同或相似的次生代谢产物等作用。侵染定殖是人为利用植物内生菌的一个重要手段,对植物内生菌侵染定殖的研究近况进行分析,并综述内生菌侵染定殖涉及到的接种方式、侵染特性、定殖作用以及定殖能力的影响因素,并对内生菌在药用植物方面的应用发展趋势作出相关评价。     

油菜内生真菌的分离及其抑菌活性的研究

[目的]探讨油菜内生真菌的抑菌活性。[方法]从油菜的不同组织内分离内生真菌,研究它们对植物病原真菌的抑制作用,并对活性菌株进行了初步鉴定。[结果]从油菜的根、茎、叶中共分离出12株内生真菌,其中2株(WG5和WJ2)对病原真菌均有不同程度的抑制作用,尤其对油菜菌核病菌和小麦黄斑叶枯病菌的抑制率最高,而且其发酵滤液经高温处理后活性不丧失,对病原真菌仍有较强的抑制作用,具有一定的生防潜能。[结论]油菜内生真菌可以产生具有抑菌活性的次生代谢产物,为新型活性物质的筛选提供新的途径。     

玉米内生真菌的分离与鉴定

对不同品种的玉米种子及不同地区、不同部位的玉米内生真菌进行分离和鉴定。结果显示,8个不同品种的玉米种子,内生真菌检出率为25%,不同玉米品种的种子内所含的内生真菌种类和数目都不同,最高的检出率为40%,最低的检出率为10%。从玉米种子中分离得到的92个菌株,经形态学鉴定,分别属于14个属,出现频率最高的是木霉属,为34.78%。从不同地区的玉米组织中一共分离得到内生真菌168株,其中10株未产孢的没有鉴定,其他菌株经形态学鉴定分别属于26个属,以青霉属、曲霉属、头孢霉属为主,占内生真菌分离物总数的41.07%。对形态学鉴定为白僵菌属的10个菌株进行分子鉴定,均确定为球孢白僵菌(Beauveria bassiana)。此外,球孢白僵菌作为玉米的内生真菌,在国内还是首次分离得到。     

植物黄芪根内生真菌的分离

以蒙古黄芪健康植株上的块根为材料,经过表面消毒、培养基选择,在不同培养条件下分离获得内生真菌,并对其进行形态学鉴定。结果显示:表面消毒方法有效,4种培养基上分别获得不同数目的内生真菌株,显微镜下获得了内生真菌形态特征。分离获得黄芪内生真菌28株,分列在7个菌属中。     

濒危药用植物绶草内生真菌的分离与鉴定

以绶草的根、茎、叶为材料,采用组织分离法和3种不同的培养基分离绶草的内生真菌.结果表明,PDA改良培养基(PDA培养基内加20 mg/L绶草生境土壤浸提液、20 mg/L绶草根汁液、30 mg/L氯霉素)的分离效果最好.从绶草的根、茎、叶中共分离得到60株内生真菌,经显微鉴定,已鉴定的菌株54株,为3目4科13属,优势属为丝核菌属、青霉属、曲霉属、链格孢属;不同的组织部位所分离得到的内生真菌在种类和数量上都存在差异,茎中分离12属33菌株,根中分离7属18菌株,叶中分离4属9菌株.其中茎中内生真菌多样性最为丰富,且优势菌群不明显,以后对绶草的内生真菌研究时应尽量采用茎为组织器官分离内生真菌;根中镰刀霉属、曲霉属为优势属;叶中内生真菌种群较单一,主要为链格孢属.     

铁皮石斛促生内生真菌的筛选与鉴定

从铁皮石斛根中分离得到37株内生真菌,经过与组培苗共生筛选,获得9株促生菌,其中3株真菌对铁皮石斛的鲜质量增长率、根数增长率和芽数的促生效果最好。采用形态学观察和ITS序列测定相结合的方法对这9株促生菌进行鉴定。经形态学观察,初步鉴定出2株,均为瘤菌根菌属。根据rDNAITS序列分析显示,2株与Epulorhizasp．的相似性分别为100％和96％,1株与Guignardiacamelliae的相似性达100％,1株与MycosphaereUacruenta的相似性为99％。另外5株促生真菌分类地位尚不能确定,但这5株菌株与登录号为EU482263、GQ996178、AM901831、GU566294和GU566256的序列相似性分别达96％、95％、99％、98％和100％。     

银杏内生真菌的分离鉴定及抑菌试验

利用PDA培养基进行银杏内生真菌的分离、尖端菌丝挑取法对分离得到的内生真菌进行纯化,然后从形态学上对分离得到的内生真菌进行初步鉴定,最后采用杯碟法对所分离到的部分菌株进行抗病原性细菌试验。从银杏中分离到的内生真菌,经初步鉴定结果表明,从银杏分离得到的内生真菌属于11个属。部分内生真菌菌株对病原性细菌有不同程度的抑制作用,其中对革兰氏阳性菌,金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用明显。     

包头市春小麦不同部位内生真菌的分离与初步鉴定

[目的]探讨内生真菌在小麦不同生长期、不同部位的分布情况.[方法]从包头市土右旗7个地块的小麦上分期、分部位取样,对内生真菌在宿主中的分布规律进行调查和分析.[结果]小麦器官的带菌率与成熟度成线性关系,而种子的带菌率最高,达28.03％.通过采用常规的真菌分离方法分离到30株内生菌,通过形态学、培养及生理生化特征鉴定共鉴定出小麦内生真菌7个属,分离频率较高的真菌有链格孢属(Alternaria sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、木霉属(Trichoderma sp.)、根霉属(Rhizopus sp.)、青霉素(Penicillium sp.)、离蠕孢属(Bipolaris sp.)及类酵母属(Saccharomyces).[结论]试验结果为进一步研究内生真菌与小麦之间的相互作用关系提供了参考.     

麻疯树根部内生真菌分离及鉴定

从能源植物麻疯树的根部凸起部分韧皮部、木质部中分离到内生真菌42株,应用PCR技术对分离菌rDNA的内转录间隔区（ITS区）基因克隆后测序,并将所测序列提交到欧洲分子生物学实验室核酸数据库（European Molecular Biology Laboratory Gen-bank）,通过Blast程序将该序列与数据库已有的序列进行分析比较。结果表明,42个菌株分别与Genbank中的拟盘多毛孢菌属Pestalotiopsis、头孢霉属Cephalosporium、枝顶霉孢霉属Acremonium、镰孢霉菌Fusarium、木霉属Trichoderma、毛霉属Mucor、青霉属Penicillium、根霉属Rhizopus、曲霉菌属Aspergillus和茎点菌属Phoma具有高度同源性（达到99%以上）,其中拟盘多毛孢为优势属,其次为青霉属和茎点菌属。表明麻疯树内生真菌有着丰富的多样性特点。     

内生拮抗菌株AC8在甘蓝体内的定殖及其促生效果

为了研究内生拮抗菌株AC8在甘蓝植株体内的定殖及其促生效果,试验通过连续多代抗性筛选,获得了抗利福平300 μg/mL且能稳定生长的菌株.除喷雾法外,浸种法、浸根法、伤茎法、伤叶法均可使AC8菌株侵入甘蓝植株内,并且在根内的定殖能力最强,茎内的定殖能力相对较弱,叶内的定殖能力最弱.在甘蓝的2～3叶期和4～5叶期,与对照相比,AC8菌株处理后的甘蓝植株林高分别增加了27.4％和24.8％,根长分别增加了51.1％和36.1％,鲜重分别增加了19.0％和16.3％,干重分别增加了18.1％和16.7％,反映出AC8菌株对甘蓝有明显的促生作用.     

土壤根际环境对烟草AM真菌定殖率和孢子密度的影响

[目的]研究烟草栽培土壤因子对烟草AM真菌定殖率和孢子密度的影响。[方法]检测山东日照和临沂烟区烟草根际土样理化性质,分析各土壤因子与烟草AM真菌定殖率、孢子密度的相关性。[结果]日照和临沂烟草土样均含有土著AM真菌孢子;AM真菌孢子数与定殖率呈现非显著性负相关;土壤中的碱解氮与有机质含量对烟草AM真菌定殖率具有负相关性,有效磷、速效钾、pH和蔗糖酶活性则具有正相关性。随着速效磷、速效钾以及碱解氮含量的增加,AM真菌孢子数降低,而适量的有机质有利于提高土壤AM真菌孢子数。[结论]影响烟草根系生长的土壤条件对AM真菌定殖率和孢子数有较大的影响。     

中草药日本鸢尾内生真菌的分离及其初步鉴定

目的 分析日本鸢尾（Iris japonica）内生真菌的类群分布。方法 通过菌落形态特征、显微镜下的孢子观察及基于ITS序列分析的分子生物学鉴定分析日本鸢尾各部位内生真菌的类群组成。结果 从日本鸢尾的根茎叶中共分离得到5种内生真菌。根中分离得到的内生真菌为橘青霉（Penicillium citrinum）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）,茎中为小新壳梭孢菌（Neofusicoccum parvum）,叶中为橘青霉（Penicillium citrinum）、肉色隔孢伏革菌（Peniophora incarnata）、首都叶点霉（Phyllosticta capitalensis）。结论 自日本鸢尾分离获得5种内生真菌,其分布具有一定的组织特异性,可为药用植物内生真菌的开发和利用提供一定基础。     

枸杞深色有隔内生真菌定殖规律及其与土壤因子的相关性

利用采自宁夏银川市金凤区和西夏区两个枸杞栽培区0~20、20~40和40~60 cm共3个土层深度的枸杞根系和根围土样,研究枸杞 (Lycium barbarum)根系深色有隔内生真菌 (dark septate endophytes,DSE)的定殖规律及其与土壤因子的相关性,以期为充分利用DSE资源和基于生物技术促进荒漠植被恢复和生态改良提供依据。结果表明,DSE可定殖于枸杞根系形成深色、有隔菌丝,微菌核多呈聚合型和离散型。两样地DSE定殖率差异显著,金凤区样地DSE平均总定殖率（73.27%）显著高于西夏区样地 （23.54%）;不同土层DSE定殖率有差异,两样地DSE总定殖率、菌丝定殖率和微菌核定殖率最大值均出现在20~40 cm土层。两样地不同土层深度间土壤因子的分布差异显著,主成分分析显示pH、碱解氮、速效磷、有机质、碱性磷酸酶和蔗糖酶能综合反映银川市两枸杞样地根际土壤养分状况。方差分解分析结果表明,DSE定殖受到样地和土壤因子的共同影响。相关性分析表明,DSE定殖在两样地间存在较大差异,金凤区样地DSE总定殖率与有机质显著正相关,与速效钾极显著负相关;DSE菌丝定殖率与有机质、速效磷和碱解氮显著正相关,与速效钾和pH显著负相关。西夏区样地DSE总定殖率和微菌核定殖率与pH极显著正相关;DSE菌丝定殖率与有机质、速效磷和脲酶显著负相关。上述结果说明,枸杞根系能被DSE侵染,DSE定殖具有明显的垂直空间异质性,并与土壤因子密切相关。