秦巴硒菇多糖（FA-2-b-β）联合表阿霉素对骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移及凋亡的影响

【目的】探讨秦巴硒菇多糖（FA-2-b-β）联合盐酸表阿霉素（Epirubicin Hydrochloride,EPI）对骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移及凋亡的影响。【方法】采用MTT法测定FA-2-b-β、EPI和二者联合用药时对MG63细胞的抑制率,并根据金氏公式判断两药的协同效应,同时在倒置显微镜下观察细胞形态;划痕实验检测细胞增殖;DAPI染色及流式细胞术检测细胞凋亡;JC-1染色检测线粒体膜电位的变化;蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）和qPCR检测各组细胞PI3K、AKT、mTOR、Bax、Bcl-2、Capase-3的表达。【结果】FA-2-b-β、EPI及二者联合用药对MG63细胞的增殖均有抑制作用,联合用药组的增殖抑制作用更显著,具有协同效应;倒置显微镜可见联合用药组存活细胞数量减少,体积变大;与单一用药相比,联合用药时诱导MG63细胞凋亡、抑制细胞迁移和降低细胞线粒体膜电位的作用均更显著（P<0.05）;FA-2-b-β、EPI和二者联用给药均可上调Bax、Capase-3的表达（P<0.05）,下调Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR的表...     

PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡基因表达的影响

[目的]研究阻断PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡的影响。[方法]用抑制剂LY294002(LY)作用于细胞1 h,然后将布鲁氏菌16 M侵染细胞,应用实时定量PCR检测16 M对巨噬细胞内凋亡相关基因Caspase-3活性和Bax mRNA表达的影响。[结果]阻断PI3K/Akt信号通路可显著提高16 M介导的caspase-3活性和Bax mRNA水平。[结论]PI3K/Akt信号通路可调控布鲁氏菌介导的细胞凋亡。     

苦参碱抗PCV2诱导小鼠肺炎的作用及其机制研究

为探讨苦参碱在小鼠体内的抗炎作用及其机制,本研究利用猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）感染诱导小鼠肺炎模型,将32只昆明小鼠均分为空白对照组、PCV2组、苦参碱处理组（40mg/kg）和利巴韦林阳性对照组（40mg/kg）。除空白对照组外,其他各组小鼠每只腹腔注射0.5mL PCV2,攻毒后的第5天开始腹腔注射对应药物,每天给药一次,连续给药5d。在攻毒后的第11天,观察小鼠肺脏的病理组织学变化,qPCR检测PCV2 Cap基因,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α基因的mRNA表达,Western blot检测相应炎症因子、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及NLRP3炎症小体关键蛋白的表达。结果表明：1）苦参碱可显著抑制PCV2感染诱发的肺间质增宽现象。2）苦参碱可显著降低肺脏PCV2病毒载量（P<0.05）及炎症因子IL-1β(P<0.05)、IL-6(P<0.000 1)、IL-8(P<0.000 1)和TNF-α(P<0.000 1)的mRNA和蛋白（P<0.000 1）的相对表达量。...     

虾青素对大强度运动致大鼠骨骼肌氧化应激损伤及细胞凋亡的影响

目的研究黄芪甲苷对力竭运动致大鼠骨骼肌损伤及细胞凋亡的影响。方法将40只SD大鼠随机分为安静对照组、力竭运动组及黄芪甲苷100和200 mg/kg组,除安静对照大鼠外,均需通过跑步训练建立力竭运动模型,黄芪甲苷组大鼠给予药物干预。结果与安静对照组比较,力竭运动组大鼠乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性、丙二醛(MDA)含量、骨骼肌细胞凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (caspase-3) mRNA表达均极显著增加(P<0.01),过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性、B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2) mRNA及磷脂酰肌醇3激酶p85亚基(PI3Kp85)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达均极显著降低(P<0.01);与力竭运动组比较,黄芪甲苷100和200 mg/kg组大鼠的LDH和CK活性、MDA含量、骨骼肌细胞凋亡率及Bax和caspase-3 mRNA表达均显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),CAT和SOD活性、Bcl-2 mRNA及PI3Kp85、p-Akt和mTOR蛋白表达均显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论黄芪甲苷对力竭运动致大鼠骨骼肌损伤具有保护作用,该作用与抑制氧化应激及通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制骨骼肌细胞凋亡有关。     

复方柴芩颗粒对鸭黄曲霉毒素慢性中毒CYP450酶活性的影响

建立肉鸭aflatoxin B1（AFB1）慢性中毒模型,设立正常组、模型组、亚硒酸钠组、复方柴芩颗粒（中药）高、中、低剂量组。造模后第7,14和21天处死肉鸭取肝,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肝标本中CYP3A4,CYP1A2和CYP2E1活性。结果表明,与模型组相比,中药高、中、低剂量组用药7和14 d后肝脏微粒体细胞色素P450酶系CYP3A4,CYP1A2和CYP2E1活性显著降低;用药21 d后CYP3A4,CYP1A2和CYP2E1活性升高,但与模型组相比差异不明显。说明前期复方柴芩颗粒通过抑制CYP3A4,CYP1A2和CYP2E1活性,减少AFB1前体物质代谢激活,降低其化学性肝脏损伤达到保护肝脏的作用。而用药后21 d CYP450活性升高的原因可能是AFB1蓄积较多,需要更多的CYP450代谢AFB1。     

对INT-FAK信号通路调控脑缺血后神经细胞凋亡的思考

脑缺血性疾病是人类健康的主要杀手之一,相关研究表明,神经细胞的凋亡是造成脑缺血疾病中神经系统损害的主要机制之一,而以整合素-黏着斑激酶（INT-FAK）控制调节的PI3K/PDK/Akt以及Raf/MEK/ERK两条主要信号途径引起的细胞凋亡是其主要作用机制。凋亡过程出现的诸多能加以调控的信号分子,都可以作为治疗脑缺血性损伤的潜在靶点。随着对脑缺血损伤与神经细胞凋亡关联的深入研究,抗凋亡治疗已经成为治疗脑缺血性疾病的重要途径。     

中草药复方制剂对IBDV感染青脚麻鸡脾脏结构和功能的影响

试验旨在研究由金银花、熟地等组成的中草药复方制剂对感染IBDV青脚麻鸡脾脏显微结构、抗氧化功能、细胞因子表达、淋巴细胞凋亡及TLR3/NFκB信号通路的影响。随机将500羽健康28日龄未接种法氏囊疫苗的青脚麻鸡分为5 组,对照组、攻毒组和试验Ⅰ—Ⅲ组,3个试验组日粮中分别对应给予0.5%、1%和1.5%的中草药复方制剂。除对照组外的其余组均在30日龄通过点眼人工感染IBDV,试验期7 d。IBDV攻毒3 d后,比较对照组,攻毒组青脚麻鸡脾指数,脾脏MDA含量,NFκB和TLR3 基因表达量（mRNA）,Caspase-3 基因和蛋白表达量及其阳性细胞数均呈现显著增加（P<0.05）,而T-SOD与T-AOC活性和脾脏中IFN-γ与IL-2含量呈现显著减少（P<0.05）。比较攻毒组,试验Ⅱ组青脚麻鸡脾脏MDA含量、Caspase-3 基因和蛋白表达量均呈现明显降低（P<0.05）,而脾脏中IL-2和IFN-γ含量及T-SOD和T-AOC活性则明显提升（P<0.05）。IBDV攻毒7 d后,比较对照组,攻毒组青脚麻鸡脾脏的器官指数、Caspase-3 mRNA和蛋白表达量及其单位面积阳性细胞数同样呈现明显增加（P<0.05）,同时NFκB和TLR3 基因表达量也出现明显增加（P<0.05）,而脾脏中细胞因子IL-2及GSH-Px和T-SOD的含量或活性增明显下降（P<0.05）。比较攻毒组,试验Ⅱ组青脚麻鸡脾指数、MDA含量、Caspase-3和NFκB 基因表达量均呈现明显降低（P<0.05）,而T-AOC、T-SOD活性及上述细胞因子含量则明显升高（P<0.05）。感染3 d和7 d后,显微观察可见试验Ⅱ组青脚麻鸡的脾小结和动脉周围淋巴鞘数量增加,脾脏结构更清晰,与对照组相比基本相同,与攻毒组相比,脾小结和动脉周围淋巴鞘体积明显降低。日粮中添加1%的中草药复方制剂对感染IBDV青脚麻鸡脾脏显微结构、免疫抗氧化功能和TLR3/NFκB信号通路具有明显促进作用,在一定程度上抑制了脾脏淋巴细胞凋亡。     

复方柴芩颗粒对实验性黄曲霉毒素慢性中毒鸭CYP450酶表达的影响

建立肉鸭黄曲霉毒素（AFB1）慢性中毒模型,设立正常组、AFB1模型组、亚硒酸钠组、中药高剂量组、中药中剂量组和中药低剂量组,采用荧光定量PCR（RT-PCR）法和免疫蛋白印迹（Western\|bolt）法检测肝标本中 CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1的mRNA和蛋白表达来探讨复方柴芩颗粒对鸭黄曲霉毒素慢性中毒肝脏微粒体细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）酶系CYP3A4,CYP1A2和CYP2E1表达的影响,并借此深入探讨其解毒机制。结果显示,与模型组相比,中药高、中、低3个剂量组用药7,14和21 d后肝脏微粒体细胞色素P450酶系CYP3A4,CYP1A2和CYP2E1的mRNA相对表达量显著降低。与模型组相比,中药高、中、低3个剂量组用药7～14 d,则CYP3A4,CYP1A2和CYP2E1蛋白表达量显著降低;用药21 d后高剂量组3种基因型蛋白表达量显著降低。研究表明,复方柴芩颗粒连续用药1～2周能有效地降低由鸭黄曲霉毒素慢性中毒引起的CYP1A2,CYP2E1,CYP3A4 mRNA相对表达量和蛋白表达量升高的趋势,但随用药时间增加,各组的CYP1A2,CYP2E1,CYP3A4 mRNA相对表达量和蛋白表达量逐渐升高。     

心痛泰颗粒对大鼠抗急性心肌缺血保护作用的实验研究

目的 探讨心痛泰颗粒对大鼠抗急性心肌缺血的保护作用的研究。方法 将大鼠随机分成6组,除假手术组10只外,余大鼠予以结扎大鼠冠状动脉左前降支造成大鼠急性心肌缺血损伤模型,成模大鼠随机分为模型组、心痛泰高、中、低剂量组及麝香保心丸组。分别给以蒸馏水、心痛泰低、中、高剂量及麝香保心丸进行灌胃2周后,观察3个时间点模型动物心电图S-T段变化;采用ELISA法检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;采用TTC染色测定心肌梗死面积;采用HE染色法观察心肌坏死组织病理变化。结果 与假手术组比较,模型组大鼠心电图S-T段抬高明显（P<0.01）提示模型复制成功,模型组血清CK、LDH和MDA的浓度明显升高（P<0.01）,血清SOD浓度明显降低（P<0.01）;与模型组比较,各给药组有拮抗大鼠急性心肌缺血心电图S-T段抬高的作用（P<0.05）,且能明显降低血清CK、LDH活性和MDA浓度,升高血清SOD活性(P<0.01),明显缩小心肌梗死范围,保护心肌组织（P<0.01）。结论 心痛泰颗粒抗急性心肌缺血心肌损伤的效果显著,对急性心肌缺血损伤大鼠有明显的保护作用。     

复方钩藤降压片调节TLR4/NF-κB信号通路对自发性高血压大鼠炎症状态的影响

目的 研究复方钩藤降压片对TLR4/NF-_κB信号通路以及血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）、血管紧张素（1-7）[angiotensin1-7,Ang（1-7）]、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）相关炎症因子表达的影响,探讨复方钩藤降压片对自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensire rats,SHR）的可能降压机制。方法 将21只7周龄雄性SHR随机分为模型对照组（SHR组）、复方钩藤降压片治疗组（SHR-G组）、缬沙坦片治疗组（SHR-D组）,另取7只雄性WKY大鼠为空白对照组（WKY组）。所有大鼠给予相应干预,6周后采用ELISA方法检测血清中AngⅡ、Ang（1-7）和MCP-1的含量;采用免疫组织化学方法检测胸主动脉内皮细胞中TLR4和NF-_κB p65的蛋白水平。结果（1）SHR组血浆促炎因子AngⅡ、MCP-1的含量明显高于WKY组（P<0.05）,而抑炎因子Ang（1-7）的含量明显低于WKY组（P<0.01）;经复方钩藤降压片和缬沙坦片干预,可以明显降低SHR血浆中AngⅡ和MCP-1的含量（P<0.05）,而增加血浆抑炎因子Ang（1-7）的含量（P<0.05 or P<0.01）。（2）SHR组胸主动脉内皮细胞中TLR4和NF-_κB p65的蛋白水平明显高于WKY组（P<0.01）;相对于SHR组,SHR-D和SHR-G组大鼠胸主动脉组织中TLR4和NF-_κB p65的表达量显著降低（P<0.05 or P<0.01）。结论 复方钩藤降压片可通过抑制胸主动脉组织内皮细胞TLR4/NF-_κB信号通路的活化,降低促炎因子AngⅡ、MCP-1的水平,提高抑炎因子Ang（1-7）的水平,抑制机体的炎症状态。