小麦成熟胚愈伤组织的诱导与分化

[目的]筛选再生能力强的基因型小麦品种,建立高效的小麦成熟胚高频植株再生系统。[方法]以小麦品种抗冻早-30、百麦4411和06-4046的成熟胚为外植体,以MS为基本培养基,添加不同激素,组配诱导、继代、分化和生根培养基,通过胚性愈伤组织诱导。探讨影响小麦愈伤组织诱导和分化的因素。[结果]2,4-D浓度为1—5mg／L时对3个小麦品种愈伤组织的诱导差异不大,诱导率均高于80％,但2,4-D浓度为2mg／L时更有利于诱导胚性愈伤组织,诱导率在90％以上;在抗冻早-30和百麦4411分化培养基中加入2mg／L KT有助于提高分化率和再生率,在06-4046分化培养基中加入0．5mg／L KT对小麦成熟胚的分化和再生苗比较有利。[结论]在MS培养基中添加2mg／L2,4-D和一定量的KT可促进小麦成熟胚愈伤组织的诱导和分化再生苗。     

啤酒大麦幼胚愈伤组织诱导和植株高效再生

[目的]筛选出组织培养特性优良的大麦遗传转化受体。[方法]以7个大麦优良品种为实验材料,幼胚为外植体,研究基因型、培养基、激素等对大麦幼胚愈伤组织的诱导及植株再生的影响。[结果]在愈伤组织诱导过程中,甘啤4号等4个品种在三种诱导培养基上出愈率均较高,达100%;2,4-D与dicamba联用的MS2培养基上形成的愈伤组织质量优于MS1和MS3;品种间愈伤组织分化率差异显著,秀81-47分化率为88.9%,略低于模式品种Golden Prom ise;不同分化培养基的分化效率不同,在RN1培养基上的平均分化率较高。[结论]该试验筛选出愈伤组织诱导频率和绿苗分化率均较高,适合于遗传转化的受体材料,如秀81-47,甘啤4号。     

水稻早恢402体细胞培养初步研究

对水稻品种早恢402进行体细胞培养,结果表明：（1）幼苗茎段比成熟种胚具有较高的愈伤组织诱导率,但前者绿苗分化率极低。（2）对幼苗进行8℃2－3天的低温预处理,茎段愈伤组织诱导率虽有一定下降,但绿苗分化率却能大幅度提高。（3）进行分化培养的愈伤组织进行4－6天的干燥预处理也能显著提高体细胞培养绿苗分化率。     

不同基因型小麦成熟胚愈伤组织的诱导与分化

以小麦成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导,建立一套有效的小麦诱导再生体系.以抗冻早-30、百麦4411和"06-4046"3个小麦基因型为材料,对影响小麦愈伤组织诱导和分化的因素进行了研究.结果表明,2,4-D浓度为2mg·L-1时更有利于诱导胚性愈伤组织;在抗冻早-30和百麦4411分化中加入KT 2 mg·L-1有助于提高分化率和再生率,在"06--4046"分化中加入KT 0.5 mg·L-1对小麦成熟胚的分化和再生苗生长是有利的:不同小麦品种加入400 mg·L-1水解酪蛋白更有利于诱导愈伤组织.因此,在MS基本培养基中附加2 mg·L-1 2,4-D、400 mg·L-1水解酪蛋白及一定量的KT,可促进小麦成熟胚愈伤组织的诱导和分化再生苗.     

小麦成熟胚培养条件的优化及高效基因型筛选

为了提高小麦成熟胚的分化率、研究小麦成熟胚的组培特性及筛选出高效再生的小麦品种,选取了36个小麦品种为供试材料,研究了不同愈伤诱导时间对成熟胚组培特性的影响、在分化培养基中添加不同浓度KT对成熟胚分化的影响,以及愈伤组织进行不同时间干燥处理后对愈伤分化的影响;并对30个参试品种中具有高效再生率的基因型进行了筛选。结果表明,出愈率随诱导时间呈正向变化,但分化率则表现先增加后降低的变化趋势,且在12 d左右 可以达到较为理想的分化效果;当KT浓度为0.5 mg·L^-1时分化效果最好;转入分化培养基之前对愈伤进行8～12 h干燥处理可显著提高分化率;在供试的30个地方品种中,有15个小麦品种的分化率达到30%以上,其中泰山1389、淮麦20及泛麦5号的分化率依次达到41.5%、41.2%及39.6%。因此,在小麦成熟胚培养过程中愈伤诱导12 d,转接至分化培养基前干燥处理8～12 h及分化培养基中添加0.5 mg·L^-1 KT可以达到较为理想的愈伤分化数。本研究从不同地方品种中筛选出的一些高效再生的小麦品种可以作为遗传转化的受体材料。     

水稻幼穗胚轴愈伤组织培养力的比较观察

以水稻湘早籼１３号和超丰早１号两个品种的幼穗和胚轴为外植体，进行水稻愈伤组织培养力的比较研究。结果表明，不同基因型与不同外植体来源的愈伤的组织的诱导率，继代培养过程的生长状态和绿苗分化率均有差异两种基因型相比，超丰早１号愈伤组织诱导频率较高，生长状态要好，表现在胚性愈伤组织百分率高，分化率也较高。     

新陆早33号体细胞植株再生技术研究

以模式品种Coker 312为对照研究新疆主栽陆地棉品种新陆早33号的体细胞胚胎发生和植株再生。研究表明,2个品种的下胚轴均能在0.05mg·L-1 2,4-D+0.1mg·L-1 KT的激素组合诱导下获得初生愈伤组织,然后在无激素诱导条件下获得胚性愈伤和体细胞胚。新陆早33号与Coker 312在MSB3培养基上最早体细胞胚胎发生时间分别为60d和87d,胚胎分化率分别为67.2%和61.4%。新陆早33号在180d获得根系发育良好的再生幼苗,而Coker 312需要210d。应用此法,成功获得新陆早33号的体细胞胚和再生植株,且其胚胎发生能力和再生效率均优于对照材料。     

不同大麦品种成熟胚愈伤诱导与分化研究

为了筛选不受生长季节限制的大麦遗传转化受体,分析、比较了我国15个大麦品种成熟胚在1种诱导培养基和3种分化培养基上的愈伤诱导和分化率。结果表明,大麦品种间成熟胚愈伤诱导率差异非常显著,早熟3号的诱导率高达98.7%,而扬农啤2号和鄂大麦9号则低于10.0%。成熟胚在形成愈伤组织过程中,伴随胚发芽现象,但愈伤诱导与胚发芽之间没有相关性;品种间愈伤组织分化率也差异显著,早熟3号的分化率为43.3%,而其它品种的分化率均在10.0%以下;不同分化培养基的分化效率不同,在M1培养基上的平均分化率较高。     

小麦成熟胚高频再生基因型筛选及再生体系研究

以目前生产上主栽或主推的、具有优良农艺性状的18个黄淮麦区冬小麦品种(系)和2个西北春麦区春小麦品种为材料,对它们成熟胚再生能力进行比较,从中筛选出再生频率高的基因型,并探讨不同接种方法、麦草畏质量浓度、细胞分裂素和干燥处理等对小麦成熟胚愈伤组织诱导和分化频率的影响。结果表明,小麦成熟胚愈伤组织诱导率普遍较高,为66.7%～100.0%,而分化率普遍较低,为3.6%～35.8%。基因型间差异显著,其中愈伤组织分化率较高的基因型有泛麦8号、周麦27和邢麦6号,绿苗分化率超过30%;采用胚十字形切割法接种小麦成熟胚愈伤组织分化率较高,达到54.5%～73.3%;诱导培养基中麦草畏的诱导效果显著优于2,4-D。在麦草畏质量浓度为2～4mg/L时有利于愈伤组织诱导和分化;成熟胚愈伤组织转入不含激素或含有2mg/L 6-BA或KT的分化培养基中时,分化率分别达到38.5%,45.8%和37.0%,较其他细胞分裂素和质量浓度处理分化率高,而愈伤组织分化前干燥处理6h和未干燥处理的差异不显著,干燥12h分化率明显降低。     

水稻体细胞培养与无性系变异——Ⅰ,不同基因型不同外植体的培养

对水稻5个品种的种胚和11个品种的幼穗在含不同激素浓度的MS培养基上培养,诱导愈伤组织并再生绿苗。品种间在愈伤组织诱导率、绿苗分化率和对激素的诱导效应表现了基因型差异。幼穗愈伤组织诱导率和绿苗分化率高于种胚。种胚的盾片愈伤组织分化能力高于胚轴,胚芽鞘的未分化得绿苗。去分化培养基添加2,4—D2mg/1+KT0.5mg/1,诱导愈伤组织的效果甚佳,并促进绿苗分化。选择胚性愈伤组织继代培养,种胚的培养270天,幼穗的培养210天,仍有部分品种保持较高的绿苗分化率。     

从败育种子诱导柑桔的胚性愈伤组织

以１４个柑桔品种成熟果实中的败育种子为试材，培养诱导胚性愈伤组织的发生。结果表明，不同种类品种的胚性愈伤组织和胚状体的发生频率明显不同。麦芽提取物，谷氨酰胺和ＧＡ明显影响柑桔胚性愈伤组织和胚状体的发生。     

5个骨干籼型恢复系再生能力的比较研究

以5个有重要育种价值的籼型恢复系为材料,研究了影响籼稻愈伤组织诱导、生长和再生的几个重要因素。结果表明,对于籼稻品种而言,MS,NB培养基都是较为适合的培养基类型,愈伤诱导率都比较高,且愈伤质量较好,具有较强的再生能力,但是不同品种对不同培养基的反应有所不同,籼稻品种之间再生能力存在极大差异;分化培养基中适宜的激素配比为BAP3mg／L NAA0．5mg／L;适当的干燥处理可以极大地提高愈伤组织的再生能力。还从这5个品种中初步确定了3个再生频率较高的品种,作为进一步研究籼稻组织培养特性的材料,并进行下一步的遗传转化试验。     

离体培养条件下小麦不同外植体对赤霉病菌粗毒素的反应

研究在离体培养条件下小麦抗、感赤霉病品种不同外植体对赤霉病菌粗毒素的反应。结果表明,随着赤霉病菌粗毒素浓度的提高。小麦幼穗及花药的出愈率降低,幼穗愈伤组织生长量减少、分化能力降低;抗赤霉病品种幼穗愈伤组织的存活率、相对生长量和分化频率降低的幅度均小于感病品种,抗病品种幼穗愈伤组织的抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性受粗毒素影响的程度小于感病材料。说明小麦成株抗赤霉病和幼穗愈伤组织抗赤霉粗毒素具有一致性。     

马铃薯耐盐突变体的离体筛选

以4个马铃薯栽培品种的叶片为外植体进行耐盐突变体筛选,结果表明:不同品种愈伤组织的耐盐性存在差异,东农303、鄂1号两品种在细胞水平对NaCl的最大耐受质量浓度为8g/L,费乌瑞它为6g/L,夏波帝为4g/L。当继代次数低于10次,叶片耐盐愈伤组织在无盐胁迫诱导分化培养基上才有进一步诱导再生植株发生的能力;而在盐胁迫诱导分化培养基中,愈伤组织继代次数超过8次即很难继续分化再生。     

冬小麦遗传再生体系及根癌农杆菌介导的转化研究

以临优145的幼胚为外植体诱导植株再生,并进行农杆菌转化研究.以冬小麦品种临优145的幼胚为外植体,消毒后用解剖刀挑取幼胚,盾片朝上接种于MS+2,4-D 2 mg/L+肌醇100 mg/L+MES 400 mg/L+CH 100 mg/L+40 g/L麦芽糖+8 g/L琼脂的培养基中诱导愈伤组织,每2周继代一次,将诱导出的淡黄色、颗粒状Ⅱ型胚性愈伤组织接种于分化培养基(MS+ZT 1 mg/L+IAA 1mg/L+MES 400 mg/L+CH 100 mg/L+麦芽糖40 g/L+gelrite 2.6 g/L,pH 5.8)上培养2-3周,然后转接到再生培养基(1/10 MS+NAA 0.5mg/L+KT0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+gelrite 2.6 g/L,pH 5.8)中进行再生成苗.接种1229块幼胚,得到987块愈伤组织,Hyg抗性愈伤组织123块,抗性再生植株34株.在建立了再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入幼胚愈伤组织,抗性植株的PCR检测呈阳性.X-gluc染色表明,少部分愈伤组织出现肉眼可见的蓝色晕斑,说明GUS基因已经在小麦幼胚愈伤组织中表达.     

食用仙人掌的离体培养及其快繁技术

本研究了食用仙人掌的离体培养所需的适宜培养基及其移栽技术，适宜的培养基为：不定芽诱导，2／3MS BA0．5mg／L NAA0．05mg／L，在诱导分化过程中．有些产生淡黄色颗粒状愈伤组织，从愈伤组织中分化出芽，有些直接分化出丛生芽；继代增殖，同诱导分化培养基相同，继代培养30d．平均增殖系数为4．0，分化率达100%；生根培养基为1／2MS NAA0．2mg／L，培养一周后，开始生根，20d后，生根率达100％，平均每颗生根4颗。当根长达5cm时．移栽到石英砂．成活率达95％．再移栽到花盆，成活率也达96％。     

烟草叶片愈伤组织诱导及分化培养的验证

[目的] 研究烟草愈伤组织的发育情况及其丛生芽或分化点的形态建成。[方法] 在无菌条件下,把烟草叶片切块培养在含有2mg/L NAA和1mg/L6-BA的MS培养基上诱导愈伤组织的形成;而后,转移愈伤组织到含有NAA 0.1mg/L＋BA2.0mg/L的分化培养基上使其产生丛生芽或分化点。[结果] 诱导培养20d后,愈伤组织基本形成且没有发生污染,烟草叶片愈伤组织的诱导培养是成功的。愈伤组织的整体分化率比较高,愈伤组织上形成的丛生芽或分化点比较多,且分布比较均匀;编号为4的分化培养基上愈伤组织的分化不理想,且其丛生芽或分化点分布极不均匀。在烟草叶片愈伤组织的分化培养中NAA和6-BA的添加量分别为0.1和2.0mg/L。[结论] 该研究为植株繁育提供了良好的技术支持。     

结球生菜叶片组织培养与器官发生的研究

利用结球生菜叶片外植体进行组织培养,成功地诱导出愈伤组织与胚状体,获得了完整的再生植株,结果表明:愈伤组织诱导与不定芽分化受细胞分裂素6BA与生长素IAA浓度的影响,以6BA0.2mg/1和IAA 1.0mg/1结合使用效果较好;不定芽转入加有IAA与NAA的MS培养基上可生根成为再生植株,组织学研究还发现,外植体各个部分均能产生愈伤组织,愈伤组织内有分生组织结节和维管组织结节的分化;不定芽从愈伤组织表面或内生的分生细胞分化而来,而不定根由维管组织结节产生,胚状体则来源于圆柱形体的表皮细胞或愈伤组织内的分生细胞团。     

低能氩离子束介导将绿色荧光蛋白基因导入小麦的研究

用低能氩离子束介导将改良的绿色荧光蛋白基因（ｍＧＦＰ４）导入小麦栽培品种皖９２１０和皖麦３２号的成熟胚细胞。在含有１００￣１４０ｍ／Ｌ巴龙霉素培养基上继代培养后,获得了一批抗性愈伤组织。经过分化培养,皖９２１０获得５株再生苗,皖麦３２号获得３２株绿苗,对照的２００枚成熟胚未获得再生苗。对再生苗进行ＰＣＲ检测,均扩增出６００ｂｐ的ｎｐｔⅡ基因片段。取４株长势好的绿苗进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,结果     

提高粳稻成熟胚抗性愈伤再生频率的研究

为提高粳稻抗性愈伤分化率和遗传转化率,以农杆菌介导遗传转化得到的水稻成熟胚抗性愈伤(Hyg)为材料,研究了影响粳稻成熟胚抗性愈伤组织再生频率的因素。结果表明分化培养基添加0.5～25 mg.L-1的CuSO4.5H2O,增加分化培养基中的琼脂浓度,分化前对抗性愈伤进行高渗处理,采用6-BA和KT两步分化法和干燥除菌法均能提高抗性愈伤组织的分化率。