微粒子感染对柞蚕体内酶活性及血淋巴蛋白质含量的影响

谢伟东[1]、缪云根[2]等分别报道蓖麻蚕、家蚕受微孢子虫感染后,体内酶及蛋白质浓度均受到不同程度的抑制。我们研究了柞蚕感染微粒子（Nosema　pernyi　Wen　et　Ding）后,其中肠肠液蛋白酶、中肠组织碱性磷酸酶（ALKP）活性及血淋     

家蚕空泡型ATP酶（V-ATPase）基因的基本信息及表达特征

【目的】鉴定家蚕（Bombyx mori）中的空泡型ATP酶（vacuolar-type ATPase, V-ATP酶）A、B亚基的编码基因,并调查其在家蚕幼虫5龄第3天不同组织和上蔟时期丝腺不同区段的表达特征。【方法】利用生物信息学的方法鉴定家蚕的V-ATP酶A、B亚基的编码基因并在线预测V-ATP酶两个亚基所具有的结构域,采用软件将其分别与其他物种中V-ATP酶A、B亚基的氨基酸序列进行同源序列比对和进化树的构建,通过荧光定量PCR技术分析家蚕V-ATP酶A、B亚基的编码基因在5龄第3天家蚕各组织的表达情况。进一步利用向家蚕幼虫上蔟时期的气孔注射pH值指示剂溴酚蓝,对丝腺进行染色,通过颜色变化对丝腺不同区段的pH值进行调查。最后,采用荧光定量PCR对家蚕上蔟时期丝腺不同区段V-ATP酶A、B亚基编码基因的表达情况进行分析。【结果】获得了家蚕V-ATP酶A、B亚基的编码基因BGIBMGA008295(GenBank登录号NM_001098359.1)和BGIBMGA002241(GenBank登录号NM_001098358.1)。结构域预测发现这两个亚基均具有3个非常保守的结构域,分别为位于N端的β筒结构域、序列中部的核苷酸结合结构域和C端结构域。将这两个基因编码的V-ATP酶A、B亚基的氨基酸序列与其他物种V-ATP酶A、B亚基的氨基酸序列进行同源性比对和进化树的构建,同源比对结果发现不同物种中V-ATP酶A、B亚基的氨基酸相似度为90%,保守结构域间相似度高达95%以上,说明不同物种间V-ATP酶A、B亚基高度保守。进化树显示家蚕V-ATP酶A、B亚基与同属于鳞翅目的其他昆虫的V-ATP酶A、B亚基亲缘关系较近。5龄第3天家蚕各组织中V-ATP酶A、B亚基编码基因的荧光定量PCR结果显示,这两个基因主要在中肠、脂肪体、生殖腺和丝腺中表达。使用溴酚蓝染色的方法分析上蔟期丝腺不同区段的pH情况,结果显示家蚕后部丝腺、中部丝腺后区和中区为中性或碱性环境,中部丝腺前区pH急剧下降到酸性环境,前部丝腺也为酸性环境。进一步对V-ATP酶A、B亚基编码基因在上蔟期丝腺不同区段进行表达情况分析,发现V-ATP酶A、B亚基基因在前部丝腺和中部丝腺前区高量表达,推测V-ATP酶可能与这两个区域低pH环境的产生和维持相关。【结论】明确了V-ATP酶在家蚕各组织的表达情况,V-ATP酶可能与中部丝腺前区和前部丝腺腺腔的酸化相关,这为进一步研究V-ATP酶的生理功能提供了理论依据。     

抗病增丝剂在蚕体内分布规律的研究

用~3H 标记抗病增丝剂,给5龄家蚕进行添食处理,以测定抗病增丝剂在家蚕体内及丝茧中的吸收和分布规律。结果表明,抗病增丝剂主要分布在绢丝腺和茧层中,而蛹体内则甚微.     

诱发家蚕病毒性软化病的原因及防治方法

家蚕病毒性软化病(FV)俗称空头病,传染性较强,蔓延较快,对种茧育质量和产量造成很大影响.通过对春蚕期间易暴发的家蚕病毒性软化病的试验和调查,不良气象环境、易感病蚕品种是诱发家蚕病毒性软化病的主要原因.并提出了相应的防治方法.     

柞蚕微孢子虫在柞蚕体内增殖的组织病理学研究

本试验用偶氮红和苯胶兰对柞蚕微孢子病蚕组织切片进行复染后光镜观察；依常规方法制成柞蚕微孢子虫和柞蚕微孢子虫病蚕组织的超薄切片和扫描电镜试材后者电镜观察和拍照。结果表明：柞蚕的中肠、丝腺、脂肪体为易感组织，后期感染肌肉、马氏管、气管管壁细胞，最后真皮细胞亦被感染，同时也查明了上述组织细胞的病理变化。     

水稻幼苗感染白叶枯病后若干同工酶的变化

白叶枯病原细菌(Xanthomonas campestris pv.oryzae)感染稻苗后,诱导病株叶片PAL活力的增强,感病品种的酶活力上升更为显著.PAL和酯酶同工酶谱带和各谱带活力在感病后有不同程度的变化:PAL同工酶谱在感病叶片中条数减少。部分酶带活力减弱,抗性强的品种尤为明显;酯酶同工酶谱,在感病后抗性强的品种,慢速区谱带增加1—2条,抗病和感病品种在该区酶活力均增加.相反,高抗品种在中速和高速区均表现酶活力降低.高抗品种只对强毒力菌株反应灵敏,感病品种被中毒力菌株感染后酶谱出现差异,而被高低毒两菌株感染后的酶谱则相似.     

蜜蜂(Apis mellifera)毒的柱层析分离及其主要组份Melittin的抗凝作用

 蜜蜂(Apis mellifera)毒通过葡聚糖凝胶G50分离为七个组份,并进行了酶活力测定和毒性测定,酶测定作了磷酯酶A₂,水解蛋白酶,三磷酸腺甙酶,一磷酸腺甙酶等。对直接溶血组份在血液凝固系统上的作用进行了体内外实验,实验表明:抗血凝固作用是由于抑制了凝血活酶的生成和凝血酶原激活物的生成。     

家蚕细菌性肠道病的发生与防治

细菌性肠道病是家蚕体内细菌比例失衡而引起的细菌性软化病,其中肠球菌是引起该病的致病菌,给蚕业生产造成较大危害。本文分析了家蚕肠球菌的发病经过、症状及原因。就养蚕实践经验并结合生产实际,提出相应防治措施,为广大蚕农防治家蚕细菌性肠道病提供参考。     

限量给桑对家蚕丝腺成长规律的影响

对不同指数限制给桑条件下家蚕五龄期丝腺成长规律、营养物质向蚕体组织和丝腺的分配比率、后部丝腺细胞核酸含量及茧质性状等作了比较研究．结果表明：限制给桑家蚕丝腺的成长规律与饱食区相仿，只因限制给桑使营养物质向丝腺的供给量减少，从而使丝物质的合成量较饱食区为少；而对蚕体重增加影响较小．后部丝腺细胞核酸含量的测定结果表明，限制给桑对ＤＮＡ的增加量影响较小，而对ＲＮＡ的增加量影响较大．限制给桑使得五龄经过延长，全茧量、茧层量减少，而茧层生产效率提高．ＲＮＡ合成茧丝蛋白的效率两处理区无明显差异     

5龄桑蚕(Bombyx mori)后部丝腺氨基酸激活酶的合成动态

本研究通过以5龄桑蚕（Bombyx mori）后部丝腺重量及其组织内氨基酸激活酶蛋白含量的跟踪测定．阐明了5龄桑蚕后部丝腺蛋白质生物合成规律。结果表明，桑蚕在5龄期后部丝腺氨基酸激活酶的含量变化与后部丝腺的重量变化基本同步，均随日龄呈“S”形曲线走向。后部丝腺重量及氨量及氨基酸激活酶蛋白含量变化的“S”形曲线可用逻辑斯蒂克曲线进行描述。     

家蚕丝腺生物反应器表达狂犬病病毒核蛋白

【目的】采用家蚕丝腺生物反应器这一蛋白高效表达系统,尝试建立一种高效、低廉、稳定生产狂犬病病毒核蛋白（RVNP）的技术体系,为生产基因工程疫苗奠定基础。【方法】通过RT-PCR方法克隆获得RVNP序列,采用家蚕丝胶蛋白基因（Ser1）启动子为特异性启动子,将RVNP构建到含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）筛选标记基因的piggyBac转座子表达载体（pBA3EGFP）中,并采用显微注射转基因家蚕技术构建家蚕丝腺生物反应器。【结果】G1代通过EGFP标记的筛选获得转基因家蚕阳性蛾区26个,蛾圈阳性率为59.09%。PCR实验证实RVNP已经整合到家蚕基因组中,Western blot分析表明RVNP蛋白可能附着于丝胶蛋白并随家蚕吐丝行为分泌到蚕茧中。【结论】获得了能够表达外源的RVNP蛋白的转基因家蚕品系,该系统有望成为高效、低廉、稳定地生产狂犬病基因工程疫苗的技术体系之一。     

金纳米三角片对家蚕生长状况和蚕丝性质的影响研究

本研究通过足部注射的方式将金纳米三角片导入五龄家蚕幼虫的体内,通过研究家蚕的生长状况以及蚕丝性质的变化,对金纳米三角片的生物安全性进行了评估。结果显示,金纳米三角片的摄入大幅度降低了家蚕的成活率,存活下来的家蚕的平均体重、体长相比起空白对照组有所降低,但外貌无显著变化。X射线衍射（XRD）和红外（FTIR）结果表明,与空白组蚕丝相比,摄入金纳米三角片的实验组的蚕丝的晶体或二级结构并未遭到破坏。该研究为金纳米三角片的生物安全性提供了一定参考。     

广西家蚕血液型脓病蚕座内传染的研究

[目的]找出"两广2号"传染患病的规律性。[方法]以夏秋蚕品种两广2号为试验材料,在蚕座中混入血液型脓病病蚕后,调查混入的病蚕数量、蚕座密度与该病在蚕座内传染的相关关系。[结果]相同数量的健康蚕群体中,混入的病蚕数量越多,病死率越高;相同的病蚕混入率,蚕座越密,病死率也越高。[结论]养蚕生产中,除了做好消毒工作外,要及时淘汰病死蚕,保持适宜的蚕座密度,才能实现养蚕经济效益最大化。     

特殊用途桑蚕品种渝黔绿茧对比试验

为了加快特殊种质资源的利用,按桑蚕普通种品种区试设计要求,对绿茧品种进行室内品比与生产区域试验.品比结果表明,蚕种孵化整齐,蚕儿发育整齐度高,健康性好,壮蚕食桑快,食桑活泼,踏桑少,老熟整齐,营茧快,茧型整齐匀正,茧色内外层一致,淡绿色,茧丝长1 100 m左右,解舒率80%左右,出丝率16.5%,解舒丝长900 m左右;蚕丝淡绿色,整根丝深浅一致.生产区试结果表明,蚕种孵化整齐,蚁蚕体色黑色,小蚕共育蚕儿发育整齐,健康性好,抗逆性强,张种产茧量较高,适应贵州中海拔以下蚕区的养蚕环境.     

3类蚕品种茧蛹中黄酮类物质含量分析

家蚕体内和丝中含有黄酮类物质,采用NaNO₂-Al(NO3)₃-NaOH比色法对其进行测定。结果表明,绿茧蚕品种茧层中黄酮类物质的含量是黄、紫荧光色茧蚕品种的5倍,后二者蚕品种茧层中黄酮类物质的含量相当;绿茧蚕品种蚕蛹中黄酮类物质的含量与紫荧光色茧蚕品种的相当,比黄荧光色茧蚕品种高出1.3倍,3类蚕品种蚕蛹中该物质的含量都明显高于茧层中的含量。     

家蚕强三眠性鉴定及三眠性材料的培育

三眠性家蚕具有茧丝纤度细、可缫制高品位生丝(5~6A级)的优点,细纤度生丝可全部用于出口,是我国家蚕品种研究的主要方向之一。通过对贵州地方三眠家蚕与普通四眠蚕的遗传显隐性表现研究,鉴定了贵州三眠蚕品种"202"对普通四眠蚕品种781、丰1、渝1、782等的遗传强势性。同时从鉴定的杂交组合中选择具有生产性能优的组合进行定向培育,选育出适应贵州条件的三眠蚕品种材料,结果培育了4个性能优良的品种材料,为实用三眠蚕品种的育成完成了前期研究工作。     

抗保幼激素与蜕皮激素的作用机理研究

桑蚕第３龄或第４龄使用三眠素能使龄数减少，全龄期缩短，５龄使用则使龄期延长．３龄使用金鹿三眠素或５龄添用蜕皮激素丝腺重量低于对照，但三眠素使用区单位重量丝腺的ＲＮＡ量与对照有表现一致的趋向；而５龄使用三眠素则丝腺重量大于对照区．研究表明，３龄使用三眠素，蚕体强健，茧层率较高；５龄使用三眠素，全茧量、茧层量、茧层率均优于对照．使用蜕皮激素、龄期缩短，强健性，茧质成绩均较差     

柞蚕微粒子病蚕蛋白质组分变化的研究

罹微粒子病柞蚕幼虫血淋巴蛋白质量减少，随着龄期的增进，病症加重，蛋白质在质和量上的变化更为明显。４龄期Ｌｐ－ｓ６电泳带Ｒｆ值，病蚕小于健蚕；病蚕缺少Ｌｐ－ｍ９、Ｌｐ－ｆ１４电泳带；Ｌｐ－ｆ１６电泳带，病蚕蛋白质量高于健蚕。血淋巴蛋白质组分的变化，是微粒子原虫在蚕体内寄生与增殖所致。     

狼毒大戟水浸液对家蚕的药杀效果

[目的]以家蚕为试验材料,研究药用植物狼毒大戟对鳞翅目昆虫的药杀效果。[方法]取多年生新鲜狼毒大戟根制成水浸液,用于涂抹家蚕背部、浸泡家蚕、涂抹桑叶饲喂家蚕。[结果]用药液涂抹背部的家蚕无明显的中毒症状;浸泡1、3 min的家蚕取出后可存活7 d左右;浸泡5 min的家蚕可存活2 d左右;浸泡15 min的家蚕取出后最多可存活10 h。家蚕取食涂抹狼毒大戟水浸液的桑叶后,2 d内100%死亡。[结论]狼毒大戟水浸液对家蚕具有明显的触杀和胃毒作用。