噬菌体抗体库技术及其在鸡单链抗体中的应用

抗体工程经历过多克隆血清，单克隆抗体阶段，现发展到了基因工程抗体时代。目前，抗体工程领域最突出的进展就是噬菌体抗体库技术的建立。噬菌体抗体库技术实际上是丝状噬菌体展示技术(phage display technology)与抗体组合文库技术(combinatorial immunoglobulin library     

单链抗体的研究进展及其应用前景

随着分子生物学的进一步发展，抗体技术也逐步由细胞工程抗体(单克隆抗体)向基因工程抗体演替，特别是单链抗体在理论和应用方面的研究尤为令人关注。本文对单链抗体的特点及单价单链抗体、单链抗体多聚体、双特异性单链抗体等方面的研究进展进行回顾，并就单链抗体的应用前景进行了简单地阐述。     

抗诺氟沙星噬菌体单链抗体库的构建与筛选

应用噬菌体展示和重组抗体技术制备抗诺氟沙星(NFLX)单链抗体库,筛选获得抗NFLX高特异性、高亲和力的单链抗体scFv。将NFLX与BSA化学偶联获得的免疫源,免疫Balb/C小鼠,提取脾细胞RNA,反转录获得cDNA。以针对鼠源重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因的特异性引物,扩增获得VH基因和VL基因。通过SOE-PCR法将VH基因和VL基因通过柔性多肽Linker((Gly4Ser)3)拼接成VH-Linker-VL片段,酶切(sfiⅠ+NotⅠ)处理后,插入噬粒载体pCANTAB5E,并转化宿主菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07拯救,构建抗NFLX噬菌体单链抗体库。以包被抗原NFLX-OVA包被96孔板,亲和富集法,经三轮淘筛,间接Elisa初步检测重组scFv的特异性抗原结合活性。成功构建噬菌体单链抗体库,获得鼠源抗NFLX特异性的scFv,噬菌体中scFv插入率为90%,获得库容约为1.3×106的抗NFLX噬菌体单链抗体库,筛选得到5株抗NFLX的scFv。为运用噬菌体展示抗体技术制备特异性抗药物单抗及进一步建立药残检测新技术奠定了基础。     

抗猪流感噬菌体单链抗体库的构建与筛选

利用噬菌体展示技术构建猪流感病毒噬菌体抗体库,并筛选出猪流感高特异性、高亲和力的单链抗体(scFv)。以猪流感病毒免疫BALB/c小鼠,提取脾细胞总RNA,反转录后以cDNA为模板扩增获得VH基因和VL基因,并采用重叠延伸PCR(SOE-PCR),用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)按VH-Linker-VL方式将VH基因和VL基因拼接成scFv基因片段。将scFv基因和pCANTAB5E载体分别双酶切(SfiⅠ/NotⅠ)后连接,转化宿主菌TG1,经过辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体单链抗体库。以猪流感病毒为抗原包被96孔酶标板,经过3轮的亲和富集筛选,用Phage-ELISA鉴定阳性重组抗体。本研究成功构建出库容约为4×106cfu/mL抗猪流感病毒的单链抗体库,并筛选出4株特异性抗猪流感病毒的scFv抗体,能够与鼠源阳性多抗进行竞争结合猪流感病毒,为抗猪流感病毒转基因猪的研究奠定基础。     

天然鼠源噬菌体单链抗体库的构建

噬菌体展示技术是一项利用丝状噬菌体体外表达外源基因的新技术。它模拟动物体内抗体的形成过程，将抗体片段呈现在噬菌体表面，建成噬菌体抗体库，用与亲和层析相类似的原理，从抗体库中筛选出特异性噬菌体抗体，为制备人和动物用抗体提供了极为有效的手段。单链抗体是利用基因工程技术，由一个DNA片段(Linker)将抗体重链、     

基因工程抗体的研究进展

抗体在疾病诊断、治疗和预防中发挥着重要作用，随着分子生物学、分子免疫学的飞速发展，抗体技术发展到了第3代抗体一基因工程抗体，尤其是噬菌体展示技术的建立，使抗体的制备更加简单有效，且大大拓宽了抗体的应用范围，作者就基因工程抗体的研究进展作一简要介绍。     

基因工程单链抗体的研究进展及临床应用

基因工程抗体在医学生物学研究、疾病的诊断治疗及其他方面有着广泛应用。近年来国内外学者对基因工程抗体进行了广泛的研究,涉及到抗体基因的获取、构建、表达及最后的应用。尤其是单链抗体（single chain antibody,SCA ＆ single chain Fv,ScFv）,因其具有抗原亲活性、分子量小、穿透力强、体内循环半衰期短及排除了Fc段所致的免疫复合物反应等优点,而成为基因工程抗体研究领域中的热点课题。特别是将抗体进行人源化改造、与免疫毒素连接形成融合蛋白的研究已取得突破性进展,目前已有多个人源性ScFv抗体获美国FDA的批准。笔者认为,如果能进一步提高其稳定性及表达产量,开拓免疫毒素及其它新型免疫融合蛋白的研究范围,制备出性能稳定、特异性强、亲和力高、效能多样的基因工程抗体,就可在更大范围取得更大的成绩。     

单链抗体的制备及其应用

单链抗体由于分子质量小、穿透力强、半衰期短、特异性好和免疫原性低等特点,越来越引起学者的重视.本文就单链抗体的制备、表达及应用等方面作一综述.     

单链抗体的研究进展及其应用

随着分子生物学的发展,单链抗体作为一种小分子基因工程抗体,在理论和应用方面的研究引起了广泛的关注,其在显像定位诊断、靶向治疗和参与细胞免疫等方面展示出了可观的应用前景。对单链抗体的结构及特点、制备技术及其应用等进行了综述,以期能够为单链抗体的进一步深入研究和应用提供理论基础。     

长链脂酰CoA合成酶(ACSL)的研究进展

长链脂酰CoA合成酶(long-chain acyl-CoA synthetase,ACSL)属于多基因家族编码的酶,在体内催化合成脂酰CoA是哺乳动物利用脂肪酸的第一步反应,因此ACSL在脂肪代谢中起着重要作用。作者从ACSL家族的命名和分类、ACSL基因表达对脂肪代谢的影响、不同ACSL对底物的选择性、转录调控因子对ACSL的调控及当前家畜ACSL的相关研究进展等方面进行了综述,并对今后ACSL研究的重点及意义进行了展望。     

禽类干扰素及其基因工程研究进展

干扰素是由干扰素诱生剂诱导生物细胞所产生的一类高活性多功能的糖蛋白。干扰素自被发现以来,由于其广谱抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用而受到研究者们的重视,在其基因结构、作用机理以及体外重组表达等方面都取得了巨大突破。作者综述了干扰素的基因结构、基因工程及重组干扰素的应用研究进展。     

基因差异表达分析技术在寄生虫学中的应用研究进展

生物体表现出的各种生物学特性,主要是由于基因在不同细胞间及不同生长阶段的选择性差异表达引起的.这些基因的差异表达按特定的时间和空间顺序有序地进行着,决定了生命活动的多样性.而基因差异表达研究的各种分析技术正是在此基础上发展起来并在兽医寄生虫学中得到广泛应用.以mRNA差异显示、抑制消减杂交法和DNA微列阵分析等为代表的基因差异表达分析技术,在基因表达谱的分析及基因生物学功能研究,阐述寄生虫的发病机制,寄生虫疾病诊断,筛选合适的药物靶标和疫苗候选分子有效地防病治病方面发挥着重要作用.     

噬菌体展示系统的构建及其在疾病防控领域应用研究进展

噬菌体展示技术作为目前应用广泛的展示抗体技术,逐渐成为生产基因工程抗体的重要工具。噬菌体展示技术是以噬菌体或噬菌粒为载体,通过将外源多肽基因整合到噬菌体基因中,以融合表达的形式将外源蛋白展示在噬菌体表面的分子生物学技术。近年来,噬菌体展示技术在抗体筛选领域的应用越来越广泛,与传统制备抗体的方法相比,噬菌体展示技术具有通量高、成本低、操作简单等特点,且通过该技术筛选得到的抗体不仅可在标签蛋白的辅助下进行选择和纯化,还可通过基因测序的方法得到单链抗体的完整基因序列。笔者首先对噬菌体抗体库进行分类,根据抗体的来源将噬菌体抗体库分为天然抗体库和免疫抗体库,通过免疫动物制备的抗体文库的特异性、抗体阳性率明显高于天然抗体文库;其次简述了噬菌体抗体库的构建流程,其中噬菌体表达载体的选择是展示技术的关键,整合了噬菌粒基因的辅助噬菌体侵染其特异性菌株,从而通过抗生素平板对该系统进行选择性筛选;最后讨论了噬菌体展示技术在疾病防控领域应用的研究进展,抗体的首次人源化使同源性抗体在临床上应用成为可能,后续用于预防和治疗病毒性疾病的动物同源性抗体的研发进一步证明了噬菌体展示技术用于生产诊断或潜在治疗试剂的能力。该综述主要聚焦于噬菌体展示系统的构建及其在疾病防控领域的应用,以期对后续通过噬菌体展示技术筛选单链抗体的应用提供指导。     

基因工程在动物医药学中的应用与研究进展

本文阐述了基因工程在动物医药学中的最新应用研究，重点介绍了基因工程药物、基因工程抗体、基因治疗技术、基因诊断技术等几大生物医药技术的研究和应用，在预防和临床医学上以及对传统医药学都产生了深刻的变革，具有广阔的应用前景。     

抗猪脂肪细胞膜单链抗体基因的构建及鉴定

应用噬菌体展示技术，从猪脂肪细胞免疫的小鼠脾细胞mRNA中构建出单链抗体(scFv)cDNA文库。cDNA文库克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E，转化E.coli TG1,通过噬菌体表面展示，用猪脂肪细胞对表达的重组噬菌体单链抗体文库进行3轮亲和富集，筛选出了猪脂肪细胞膜scFv，为今后的应用奠定了基础。     

单碱基水平上胞嘧啶碱基编辑器(CBE)的研究进展

尽管新一代基因编辑技术CRISPR/Cas9拥有众多优点,但在执行单个碱基水平的突变时其效率往往很低。由于DNA的双链断裂具有很多的不确定性,又加上基于供体模板的同源末端重组（homology directed repair,HDR）仅仅发生在分裂活跃的细胞中,而非同源末端连接（non-homologous end joining,NHEJ）在整个细胞周期中都可以发生,因此,传统CRISPR/Cas9在单碱基分辨率上进行基因编辑时存在一定弊端。碱基编辑器（base editor,BE）的出现则在一定程度上弥补了这一缺陷。胞嘧啶碱基编辑器（cytosine base editor,CBE）或腺嘌呤碱基编辑器（adenine base editor,ABE）都能够在不引起双链断裂的情况下实现C·G到T·A或A·T到G·C的转换,极大地提高了单碱基编辑的应用价值。本文侧重对出现较早的CBE的原理、发展、应用及存在的问题进行综述,以期为高效单碱基突变工具在生物医学和畜牧业生产中的应用提供有益的参考和借鉴。     

减毒沙门菌疫苗研究进展

沙门菌是重要的人兽共患病痛原,在医学、兽医学和公共卫生学上均具有十分重要的意义。最早用灭活苗来预防沙门菌病,逐步发展到基因工程减毒活疫苗,其中基因工程活疫苗经过不断的发展,逐步显示出其优越性。论文就沙门菌的疫苗的研究进展进行了综述。     

鹦鹉热衣原体疫苗研究进展

文章叙述了鹦鹉热衣原体的生物特性以及感染的宿主范围;鹦鹉热衣原体减毒活疫苗温度敏感株的培育及致病机理的研究;灭活疫苗灭活条件的研究,最佳免疫量,不同免疫途径的研究和我国对绵羊和猪鹦鹉热衣原体灭活疫苗的研究;以及鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白基因工程亚单位疫苗和禽衣原体DNA疫苗的研究情况。