单抗捕获ELISA法检测禽多杀性巴氏杆菌特异性IgM抗体

本试验采用纯化的鸡ＩgＧ和环磷酰胺预处理后,再以亲和层析纯化的鸡ＩgＭ免疫ＢＡＬＢ/Ｃ小鼠,动用淋巴细胞杂瘤技术,以间接ＥＬＩＳＡ法筛选,获得了５侏能稳定地分泌抗 鸡ＩgＭ（u链）特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经ＥＬＩＳＡ交叉反应性试验和羊抗鸡ＩgＭ（u链）抗血清阻断试验,证明这５株单克隆抗体均是抗鸡ＩgＭ（u链）特异性的。应用该抗鸡ＩhＭ：（u链）单克隆抗体建立了检测鸡抗多杀性巴氏杆菌血清中特异性ＩgＭ抗     

禽多杀性巴氏杆菌ELISA三种抗原比较研究

禽多杀性巴氏杆菌ＥＬＩＳＡ三种抗原比较研究刘云同郑星道金仁哲顾万钧黄伟（吉林省通化县家畜繁改站·１３４１００）（吉林农业大学动物科学系关于检测禽多杀性巴氏杆菌血清抗体的研究，国外学者是应用凝集反应、间接血凝、酶联免疫吸附试验检测禽多杀性巴氏杆菌弱毒免...     

ELISA检测3种禽多杀性巴氏杆菌抗原的比较

关于检测禽多杀性巴氏杆菌血清抗体的研究,国外学者是应用凝集反应、间接血凝、酶联免疫吸附试验。研究认为,ＥＬＩＳＡ具有敏感性和可重复性等优点,是理想的血清学检测方法。在应用ＥＬＩＳＡ检测禽多杀性巴氏杆菌抗体的时候,如同其它血清学方法一样,抗原提取及钝化...     

抗鸭多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H单克隆抗体的制备及鉴定

为制备抗鸭多杀性巴氏杆菌(P.multocida)外膜蛋白H(OmpH)单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的OmpH重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并以重组OmpH蛋白为抗原,通过间接ELISA方法筛选出3株能够稳定分泌抗OmpH的杂交瘤细胞株(1A9、1E9、3G7)。MAb亚类鉴定表明,1A9、1E9和3G7均为IgG1亚类,轻链均为κ链。经western blot和间接免疫荧光检测证明3株MAb均具有良好的特异性。这些抗OmpH MAb的获得,为鸭P.multocida病的快速、有效、敏感的诊断方法建立奠定了基础。     

我国禽源多杀性巴氏杆菌血清型研究

本试验用Carter的荚膜群鉴定法和Heddlesten的热稳定抗原鉴定法对我国116株禽源多杀性巴氏杆菌进行了血清学分型研究。研究表明,A∶1型是我国最主要的血清型,占69.8%,其次为A∶1(14)型和A∶3(4)型,分别占6.8%和4.3%。并对我国目前使用和试用的8株禽霍乱弱毒菌苗株进行了定型,其中3株为A∶1型,与主要血清型相同,5株与主要血清型不一致。在A∶1型菌株中,大部分菌株的耐热抗原与1型标准血清反应,形成1条沉淀线,部分菌株(9株)形成2条沉淀线,表明在A∶1型菌株中还存在有抗原差异。     

禽源多杀性巴氏杆菌保菌方法研究

通过对禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５０株和Ｃ４８－１株及６株田间分离细菌的保存观察试验，表明用脱纤羊血和感染小鼠肝脾组织在－２０℃条件下，禽源多杀性巴氏杆菌可存活２年，用鲜血斜面封盖石蜡油保存法，禽源多杀性巴氏杆菌在４℃条件下可存活３个月，菌株保存前生生物学特性及毒力不发生变化，试验提供的方法对禽霍乱流行病学调查和血清分型研究具有实际意义。     

间接ELISA检测禽多杀性巴氏杆菌抗体中包被抗原的选择

间接ELISA已在抗体检测中广泛应用,而抗原包被作为间接ELISA中必不可少的一步可直接影响试验的准确性.试验分别使用超声波裂解抗原、脂多糖蛋白抗原和全菌抗原作为包被抗原,建立相应的检测方法并进行重复性试验.试验证明全茵抗原建立的禽多杀性巴氏杆菌ELISA检测方法在敏感度、特异性、稳定性方面均优于其他两种抗原.     

间接ELISA检测禽多杀性巴氏杆菌抗体中包被抗原的选择

间接ELISA已在抗体检测中广泛应用,而抗原包被作为间接ELISA中必不可少的一步可直接影响试验的准确性。本试验分别使用超声波裂解抗原、脂多糖蛋白抗原和全茵抗原作为包被抗原,建立相应的检测方法并进行重复性试验。试验证明全菌抗原建立的禽多杀性巴氏杆菌ELISA检测方法在敏感度、特异性、稳定性方面均优于其他两种抗原。     

单克隆抗体捕获ELISA检测鸡多杀性巴氏杆菌IgM抗体

应用抗鸡ＩｇＭ单克隆抗体建立了检测鸡抗多杀性巴氏杆菌（Ｐ．ｍ．）血清中特异性ＩｇＭ抗体的单克隆抗体捕获ＥＬＩＳＡ,其敏感性、特异性、重复性优于间接ＥＬＩＳＡ。用于检测鸡抗Ｐ．ｍ．的特异性ＩｇＭ抗体发现：鸡在注射免疫Ｐ．ｍ．灭活苗后第４天即可检测到ＩｇＭ抗体,并且上升较快,峰值在第２周为１：５１２０;鸡在口服免疫Ｐ．ｍ．弱毒活苗后ＩｇＭ抗体上升缓慢,峰值在第４周左右,滴度较低为１：３２０;鸡在由不同途径感染不同的Ｐ．ｍ．强毒后第８天时,ＩｇＭ抗体滴度都明显上升。同时应用间接ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ抗体滴度进行比较。本项研究对建立检测鸡抗其它病原微生物特异性ＩｇＭ抗体方法具有借鉴意义。     

我国多杀性巴氏杆菌血清型综述

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)又称出血性败血病巴氏杆菌。它可感染猪、马、羊、家禽、家兔及多种野生动物或野禽,发病后,在我国称为猪肺疫,牛出血性败血症及禽霍乱等,在学术上统称为多杀性巴氏杆菌病(Pasteurellosis),由于多杀性巴氏杆菌的血清型不同,其生物学特性差异很大,主要表现在毒力及流行病学方面,按流行病学特性,主要分为以下几类。     

西藏林芝地区黄牛多杀性巴氏杆菌病的流行病学调查及鉴定

为了解西藏林芝地区黄牛多杀性巴氏杆菌病流行病学特点、致病机理,对该地区章麦村10户牧民养殖的黄牛血清、鼻液分泌物进行了提取,采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）测定样品中多杀性巴氏杆菌抗体（PMAb）。结果表明,该地有3户牧民家黄牛血清呈多杀性巴氏杆菌抗体阳性,鼻液分泌物均呈抗体阴性。说明牛多杀性巴氏杆菌对该地区的黄牛均有不同程度的危害。     

禽源巴氏杆菌链霉素耐药基因StrA的克隆及原核表达

根据巴氏杆菌链霉素耐药基因 Str A序列 ,设计合成 1对引物 ,以临床分离的禽源巴氏杆菌链霉素耐药菌株质粒DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增出禽源巴氏杆菌的 Str A基因片段。将长约 80 4 bp的 Str A目的基因克隆到 p GEM-T载体上 ,通过核苷酸序列测定 ,结果表明 ,克隆的 Str A基因长约 80 4 bp,与文献报道 (NC- 0 0 1774 )的同源性为99.8% ,只有 1个碱基不同 (6 9位 T→ C) ,但所编码的氨基酸没有改变。将 Str A基因按正确的阅读框架定向克隆到原核表达载体 p ET- 2 8c( )中 ,重组质粒酶切鉴定正确后 ,将构建好的原核表达质粒 p ET- 2 8c( ) - Str A转化到受体菌BL- 2 1(DE3)中 ,经 IPTG诱导后 ,进行 SDS- PAGE电泳 ,经检测 ,Str A外源基因的表达产物占菌体总蛋白的 12 %。蛋白表达形式为包涵体表达     

抗牛多杀性巴氏杆菌高免卵黄抗体IgY的制备及间接血凝检测方法的建立

本研究通过自制牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫产蛋鸡,采用卡拉胶结合硫酸铵沉淀法提取卵黄抗体IgY,并采用间接血凝方法检测抗体效价。结果表明,抗原致敏红细胞的最佳浓度是800μg/mL,免疫后第7周抗体效价达到高峰,效价为1：1024,高效价持续5周开始下降,测定提取的IgY浓度为8.258mg/mL,无菌检测及动物安全性实验表明制备的卵黄抗体安全可靠。本研究制备了抗牛多杀性巴氏杆菌卵黄抗体,为防治由荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌所致的犊牛肺炎提供了新的手段。     

健康马鹿鼻道多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

对１０头马鹿鼻内容物经改良马丁琼脂平板培养、生化反应试验、英膜分型鉴定，分离出二株多杀性巴氏杆菌。该菌英膜抗原属Ｂ型。对小白鼠有较强致病性。     

猪瘟病毒C株杂交瘤细胞的构建及单克隆抗体的制备与鉴定

采用猪瘟病毒C株毒（CSFV C strain）免疫BALB/C小鼠,按照常规单克隆抗体制作方法构建并筛选出能稳定分泌抗猪瘟单克隆抗体杂交瘤细胞株4株,分别命名为1C9,1B11,3C8和3G9,经鉴定,4株单克隆抗体腹水效价达到104~106。交叉试验及特异性试验表明,所制备的McAb与鸽新城疫病毒、猪蓝耳病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、鸡减蛋综合征病毒无交叉反应性,均完全针对猪瘟病毒（CSFV）抗原决定簇,具有高度特异性。抗CSFV McAb的成功制备,为进一步研究建立CSFV的快速诊断方法奠定了基础。     

恩诺沙星单克隆抗体的制备及其鉴定

采用碳二亚胺法和氯甲酸异丁酯法合成恩诺沙星的人工抗原,结合比为15∶1。用人工抗原腹腔免疫BALB/c小鼠,有限稀释法筛选获得分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株2H10C2F11,并将该细胞株注射小鼠腹腔获得腹水。纯化后的抗体效价为3.96×10-6,紫外分析方法计算蛋白含量为1.139 mg/mL,琼脂双扩实验表明抗体为IgG1型,SDS-PAGE电泳图谱显示纯化效果理想;经间接ELISA方法测定,抗体的亲和力为1.8×108L/moL。     

三聚氰胺单克隆抗体的制备与鉴定

本实验利用三聚氰胺类似物与血蓝蛋白、卵清蛋白偶联制备免疫抗原和包被抗原,免疫Balb/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、筛选和克隆等,得到了抗三聚氰胺单克隆抗体。该抗体亚类为IgG1,制备的单克隆抗体腹水效果评价达10-7,与其他三聚氰胺结构类似物无交叉反应。三聚氰胺单克隆抗体的获得为进一步研发三聚氰胺药物残留检测试剂盒的研制奠定了基础。     

伪狂犬病病毒闽A株单克隆抗体的制备与鉴定

本试验应用细胞杂交瘤技术,取健康BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞进行细胞融合,经双抗体夹心ELISA筛选,4次有限稀释法克隆,得到2株能稳定分泌抗伪狂犬病病毒(PRV)的单克隆抗体杂交瘤细胞株:2C6E6、3D5F1。2株杂交瘤细胞培养上清的效价分别为1:512、1:1 024。鉴定结果显示这2株单克隆抗体分别为IgG1亚类和IgG2a亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为84条。用纯化的PRV免疫经产健康的BALB/c小鼠,采用ELISA方法检测获得的腹水的效价分别为1:1 638 400和1:819 200。经检测这2株单克隆抗体与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒均不发生交叉反应,特异性良好。杂交瘤细胞连续培养30代,仍能稳定分泌抗PRV的单克隆抗体,说明这2株单克隆抗体的稳定性良好。本试验研究结果为PRV的快速诊断方法的建立奠定了理论基础。     

Preparation and Identification of Monoclonal Antibody against Min-A Strain of Pseudorabies Virus (PRV)

With purified pseudorabies virus (PRV) to immune BALB/c mice, spleen cells from imunized mice were fused with SP2/0 myeloma cells by application of lymphocyte hybridoma technique, followed by double antibody sandwich ELISA screening, four times cloning by limiting dilution method to obtain two stable secreting anti-PRV monoclonal antibody hybridoma cell lines, 2C6E6 and 3D5F1.After identification, these two monoclonal antibodies belonged to IgG1 and IgG2a subtypes, respectively, the average number of chromosomes of hybridoma cells was 84, ELISA titers of these two hybridoma cell culture supernatants and mouse ascites monoclonal antibodies were 1:512 and 1:1 638 400, 1:1 024 and 1:819 200.These two monoclonal antibodies showed no cross-reaction with classical swine fever virus, porcine reproductive and respiratory syhdrome virus and porcine parvovirus, which indicated that they had high specificity.The hydridoma cells could passage for 30 generations which could still secrete monoclonal antibody against PRV, which indicated that these two monoclonal antibodies had good stability.The results in the assay laid the foundation for establishing rapid diagnostic methods of PRV.