3种番茄斑萎病毒属病毒多重RT-PCR检测方法的建立

利用LaserGene软件对Genbank数据库中已登陆的番茄斑萎病毒(TSWV)、凤仙花坏死斑病毒(INSV)和鸢尾黄斑病毒(IYSV)全基因组序列进行比对,选择最保守的区域,设计3种病毒的特异性引物,通过逐步调整优化PCR的反应条件,建立了多重RT-PCR检测TSWV、INSV和IYSV的技术体系。结果表明:可从约16μg的带毒烟草叶片中同时检测到3种病毒,具有较高的特异性和准确性。该方法可以同步、快速、特异地检测出受侵染寄主植物中的TSWV、INSV和IYSV。     

3种大白菜病毒多重RT-PCR检测技术的建立

【目的】建立3种大白菜病毒病多重RT-PCR检测技术,为病毒病快速检测、白菜病毒病防治与抗病育种提供参考。【方法】针对我国大白菜芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)3种病毒的外壳蛋白(CP)基因保守区序列,设计特异性检测引物,从多重RT-PCR(mRT-PCR)扩增引物、Mg~(2+)浓度、Taq DNA聚合酶及dNTPs浓度、退火温度、延伸时间和循环次数等方面对RT-PCR检测技术进行优化。【结果】在dNTPs浓度为0.24 mmol/L,Mg2+浓度为2.8mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为0.12U/μL,退火温度为52℃,延伸时间为30s,循环30次,即可成功地在一个体系中对TuMV、TMV和CMV 3种病毒复合侵染的大白菜病样进行多重RT-PCR扩增,扩增得到228,305和460bp3条特异性条带,其大小与试验设计相符合。灵敏度接近单重RT-PCR(sRT-PCR),体现了多重RT-PCR的优越性。【结论】建立了能同时检测大白菜样品中TuMV、TMV和CMV的多重RT-PCR检测体系,该多重RT-PCR方法能对田间大白菜样品进行3种病毒的准确、快速、高效检测。     

烘烤烟丝中残留病毒的检测

应用电镜、DAs-EusA技术检测烘烤烟丝样品K326—1和K326之中的病毒。电镜观察到2个样品中均有类似烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）的粒子,在K326-2烟丝中还有类似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）的病毒粒子存在于细胞壁及细胞质中。2个样品均与TMV抗血清及西瓜银色斑驳病毒（WSMoV）抗血清呈阳性反应。结果表明经烘烤的烟丝中仍存在病毒。     

多重RT-PCR方法检测3种检疫性病毒的研究

根据番茄环斑病毒(ToRSV)、南芥菜花叶病毒(ArMV)和草莓潜隐环斑病毒(SLRSV)3种检疫性病毒的外壳蛋白基因保守序列设计特异性引物,在建立各种病毒单个RT-PCR技术的基础上,通过优化多重RT-PCR反应条件,初步建立了同步检测这3种病毒的多重RT-PCR检测体系。结果表明:3对引物特异性较强,分别可以扩增出580、438、298bp的目的片断;该方法快速、灵敏、准确,为同时检测进境百合中多种病毒提供了参考。     

球根鸢尾3种主要病毒多重RT-PCR检测体系的建立

根据GenBank中已发表的鸢尾轻花叶病毒(Iris mild mosaic virus,IMMV)、水仙潜隐病毒(Narcissus latent virus,NLV)和菜豆黄花叶病毒(Bean yellow mosaic virus,BYMV)外壳蛋白(CP)基因序列保守区域分别设计特异性引物,通过优化多重PCR反应条件,建立能同时检测球根鸢尾3种病毒的多重PCR检测体系。该体系能够一次扩增出IMMV、NLV和BYMV的特异片段,其大小分别是770bp、266bp和186bp。测序结果表明,3种病毒序列与相应的参考序列相似性均达98%以上。灵敏度测定结果表明,从相当于或大于10-2 mg的感病植物组织中能够检测到这3种病毒。     

侵染云南烟草的番茄斑萎病毒（TSWV）的RT-PCR检测

 番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus, TSWV）寄主广泛,危害多种作物,近年发现侵染烟草引起严重经济损失。研究该病毒的分子检测方法,对健康烟草种苗培育和指导病害防控具有重要意义。本文根据 TSWV核壳体蛋白基因(N基因)序列设计引物,用RT PCR方法对采于云南疑似番茄斑萎病毒症状的5个烟草病害标样（102,514,自10,自16,自58）进行检测,PCR产物连接pMD载体并测序。测序结果表明：这5种烟草病害分离物与已报道TSWV N基因核酸序列相似性大于9704%,所编码氨基酸序列的相似性达9767%以上。这说明获得的5种病毒分离物均属于TSWV。本研究建立了侵染云南烟草的番茄斑萎病毒（TSWV）的RT PCR检测方法。     

三种草莓病毒的多重RT-PCR检测方法

目前,草莓主要有3种病毒侵染,本研究通过改进CTAB法对经过茎尖剥离的组培四季草莓叶片提取总核酸,采用多重RT-PCR技术同时检测草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒和草莓镶脉病毒。电泳结果显示提取的总核酸中可见总DNA条带和完整的RNA条带,并采用两步法RT-PCR获得了目的条带。本研究建立了多重RT-PCR同时检测草莓病毒的技术体系。     

小苍兰3种病毒多重RT-PCR检测体系的建立

根据GenBank中已发表的小苍兰花叶病毒Freesia mosaic virus (FreMV)、黄瓜花叶病毒Cucumubermosaic virus (CMV)和菜豆黄花叶病毒Bean yellow mosaic virus (BYMV)外壳蛋白(CP)基因序列保守区域分别设计特异性引物,通过优化多重PCR反应条件,建立能同时检测小苍兰3种病毒的多重PCR检测体系.该体系能够一次扩增出FreMV,CMV和BYMV的特异片段,其大小分别是340、628和212 bp.测序结果表明,3种病毒序列与相应的参考序列相似性均达97％以上.灵敏度测定结果表明,从≥10-2mg的感病植物组织中能够检测到这3种病毒.     

烟草番茄斑萎病的研究进展

烟草番茄斑萎病是一类在局部地区产生严重危害的烟草病害,由布尼亚病毒科番茄斑萎病毒属典型成员烟草番茄斑萎病毒系统侵染引起。目前该病在中国许多省均有发生的报道,在云南烟区广泛分布,在局部地区可造成60%以上的严重损失,烟草番茄斑萎病被认为是世界上对烟草最具潜在危险病害之一,较为系统全面的综述了烟草番茄斑萎病的发生与分布,病害症状学,病原物,致病机制,病毒基因组结构和功能以及病害的流行及控制等方面的研究进展。     

利用多重RT-PCR对口蹄疫病毒分型

根据已经发表的口蹄疫病毒(FMDV)全基因序列,设计了一套引物,建立多重RT-PCR方法,区分A型、AsiaⅠ型、O型3种血清型的病毒。该方法对O型病毒的敏感性为101.00LD50,对AsiaⅠ型病毒的敏感性为101.25LD50,对A型病毒的敏感性为101.00LD50。该方法具有良好的特异性,能够区分保存适当的病料,可以用于病毒的分型。     

不同品种非洲菊的生物解剖学特征与弯颈关系的研究

以切花非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus) 不易弯颈品种Fiona和易弯颈品种Sondance为试材,通过石蜡切片光学显微镜和扫描电镜观察,分析了这2个品种间的生物学结构的数量差异.结果显示:这2个品种间所含的超微结构的类型大致是相同的,不易弯颈品种比易弯颈品种具有较多的穿孔,且不易弯颈非洲菊品种的导管直径、薄壁细胞面积较大,易弯颈品种导管则多含有侵填物,导致了这2个品种采后贮藏保鲜期间的弯颈率和耐贮性的不同.     

非洲菊离体培养增殖技术

非洲菊为菊科大丁草属多年生宿根草本花卉,是世界5大切花之一。因非洲菊传统的分株繁殖系数很低,满足不了市场对种苗的大量需求,而离体快速繁殖可大大提高繁殖系数以达到规模化生产种苗的目的。目前国内外非洲菊切花栽培所需种苗大多是通过离体快繁途径获得,稳定增殖是非洲     

非洲菊组织培养抑制褐变现象的研究

为控制非洲菊组织培养中的褐变提供有效的解决方法,研究了不同外植体及抗氧化剂对非洲菊褐变现象的影响。试验结果表明,非洲菊幼嫩叶片、花蕾、花托和花梗等不同外植体中叶片的褐变程度最重,花蕾的褐变程度最轻。在非洲菊叶片组织培养时,接种前将外植体用100 mg/L Vc溶液浸泡1 h,再在以后的继代培养中加入200 mg/L PVP使褐变现象得到有效控制。     

非洲菊主要病害的发生特点

随着我国非洲菊(GerberajamesoniiBolus)切花的种植面积逐年增加,病害问题越来越严重,使鲜切花产量及品质遭受巨大损失。对非洲菊10种主要真菌、病毒及细菌性病害发生特点进行描述,为生产上有效防治非洲菊病害提供依据。     

非洲菊组织培养繁殖的试验研究

以非洲菊的微茎尖为外植体进行组织培养,经过多组合培养基对比试验,筛选出各阶段最适宜的培养基:诱导分化,MS 6BA3.0 mg/L IAA0.25 mg/L;继代增殖,MS 6BA3.0 mg/L NAA0.3 mg/L;生根培养,1/2MS IAA2.0 mg/L.     

激素处理对非洲菊离体繁殖的影响

[目的]研究不同的激素处理对非洲菊离体繁殖的影响。[方法]以非洲菊重瓣切花品种桑格瑞拉为试材,以MS为基本培养基,添加不同浓度的BA、KT、NAA、IAA,对非洲菊进行诱导分化、继代增殖和生根培养试验,研究不同激素种类、组合及浓度对非洲菊诱导分化、继代增殖和生根培养的影响,筛选最佳的激素组合。[结果]在初代培养中,IAA0．1mg／L＋BA10mg／L的处理对芽的诱导效果最好,芽的分化率最高;在继代培养中,IAA0．1mg／L＋BA1．0mg／L的处理对芽的增殖效果最好,芽苗生长整齐,叶色深绿,芽苗高度达2cm以上;生根阶段以IBA0．01mg／L处理效果最佳,产生的根量适中,有利于苗的生长。[结论]选用合适的细胞分裂素与生长素的组合及比例对非洲菊愈伤组织的诱导和芽分化具有重要作用。     

非洲菊离体快速繁殖技术

以非洲菊品种107-2幼嫩花蕾为外植体进行离体快速繁殖技术研究。结果表明:外殖体诱导愈伤组织并分化不定芽的适宜培养基为1/2 MS 10.00 mg·L-1 BA 0.50 mg·L-1 IAA,培养10 d以后,愈伤组织诱导率达100%,培养60 d以后,芽的分化率达93.5%;芽增殖的适宜培养基为MS 0.2 mg·L-1 BA 5.0 mg·L-1 KT 0.3 mg·L-1 IAA,培养30 d以后,芽的增值系数为2.5,苗体生长健壮、翠绿,小苗高度可达2.3 cm;壮苗生根的适宜培养基为1/2 MS 0.15 mg·L-1IAA,培养22 d以后,生根率可达95%,每株苗平均根数为3.6条,平均根长为1.2 cm,小苗植株翠绿挺拔,根系粗壮,移栽后都能成活。     

非洲菊F1代观赏性状的遗传表现

[目的]通过对非洲菊F1代观赏性状的统计分析,总结性状分离特点,为其杂交育种中的亲本选择和杂交配组提供依据。[方法]以12个非洲菊品种配成12个杂交组合,对各组合后代的花色、花序直径、花盘直径、瓣性、花序姿态、花葶长和花葶直径7个主要观赏性状进行统计和分析。[结果]F1代花色发生广泛分离,紫红色的遗传力大于红色,红色的遗传力高于橙色;黄色具有偏母性遗传特性,而橙色、红色、紫红色和白色未表现出明显的偏母性遗传特性;以白色为母本时,复色出现频率明显高于其他组合。在瓣性上,半重瓣的遗传力高于单瓣和重瓣。在花序姿态上,平展的遗传力高于下翻和上翘的。F1代的花序直径和花葶长与双亲相比表现出一定程度的衰退,后代总平均花序直径和花葶长分别是中亲值的98.4%和82.1%;F1代的花盘径/花序径值与亲本相比明显变大,各组合总平均花盘径/花序径是中亲值的136.3%;F1代的花葶直径变化不明显,总平均花葶直径是中亲值的100.4%。[结论]12个非洲菊杂交组合F1代性状分离广泛,变异系数较高,出现大量超亲个体,为非洲菊杂交育种的亲本选配提供了数据参考。