提高八楞海棠遗传转化植株再生率技术的研究

为进一步提高八楞海棠遗传转化效率,以八楞海棠试管苗不同组织部位(叶片、叶柄、节间茎段、破坏生长点的茎尖)为外植体,在含有0,1,3,5,10mg/L除草剂草丁膦(glufosinate)的分化培养基(MS+4mg/L6-BA+0.2mg/LNAA)上进行筛选压力的确定,其中3mg/L除草剂为适宜的筛选压力;在此筛选压力下,以八楞海棠不同外植体进行遗传转化,其中破坏生长点的茎尖处理组获得的再生芽效率最高,通过对部分再生苗进行PCR及Southern杂交检测,均鉴定为转化苗。     

多花胡枝子再生体系初探

[目的]研究多花胡枝子（Lespedezafloribunda）组培再生体系。[方法]以子叶节为初代分化外植体,诱导不定芽,通过继代培养获得再生茎段,培养生根后获得再生植株。[结果]最佳种子消毒时间为0．1％HgCl2溶液消毒8min;初代分化选择子叶节为外植体时,最佳分化配方是1／2MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．05mg／L＋IBA0．2mg／L：最佳茎段继代配方是WS＋6-BA0．7mg／L＋NAA0．1mg／L＋IBA0．1mg／L;最佳生根配方是WS＋IBA0．3mg／L,生根率为74．8％。6-苄基腺嘌呤（6-BA）对初代分化与继代分化的影响均达显著水平（n=O．05）。与萘乙酸（NAA）相比,吲哚丁酸（IBA）诱导多花胡枝子生根的能力更好。     

菜薹组织培养和植株再生研究

对6个菜薹品种的4种不同外植体进行了组织培养和植株再生研究，结果表明，子叶与茎尖中以分化不定芽，而下胚轴和幼根只能形成愈伤组织及不定根；在MS BA2mg/L NAA1mg/L ABA0.5mg/L AgNO34mg/L培养基上，子叶的不定芽分化频率最高（23．3％），而在MS＋BA1mg/L KT1mg/L NAA0.2mg/L培养基上，茎尖繁殖系统为1．66，快速繁殖效果较为理想，结果还表明，菜薹不同品种间的组织培养能力存在明显差异。     

抗旱植物沙冬青对植物激素反应特性的研究

以沙冬青为材料,选用茎尖、茎段、子叶和下胚轴为外植体进行组织培养,主要研究植物激素6-BA、KT在芽分化中的作用,结果表明 茎尖和茎段在含1mg/L和2mg/L 6-BA的培养基上,形成了玻璃化的丛芽而死亡,在含低浓度6-BA（0.5mg/L,0.1mg/L,0mg/L）的培养基上,能够产生一定比例、无玻璃化生长正常的芽,以6-BA含量为0.5 mg/L分化的芽率较高。在子叶和下胚轴的分化过程中,0.5 mg/L的6-BA,能够提高子叶不定芽的分化频率,作用较KT明显,相反0.5 mg/L KT提高了下胚轴不定芽的分化。     

罗布麻组织培养快繁技术体系研究

[目的]研究罗布麻组织培养快繁技术,为其产业化栽培提供种苗来源。[方法]通过处理罗布麻种子获得无菌苗,切取无菌苗子叶、胚轴和茎尖置于不同激素配比的培养基上,比较不同激素浓度组合对子叶和胚轴分化、茎尖快繁、再生芽快繁和快繁苗生根的影响。[结果]子叶和胚轴分化形成再生芽的最佳培养基分别为MS+2.0 mg/L BA+0.03 mg/L NAA和MS+0.07 mg/L NAA;MS+2.0 mg/LBA+0.02 mg/L NAA为茎尖快繁的最佳培养基;MS+1.9 mg/L BA+1.7 mg/L NAA为再生芽快繁的最佳培养基;1/2MS+0.6 mg/LNAA为快繁苗的最佳生根培养基。[结论]该研究筛选出了罗布麻组培快繁技术体系的培养基激素配比,为罗布麻产业化栽培提供了技术保障。     

印楝(Azadirachta indica A.)高频植株再生系统的建立

[目的]建立印楝高频植株再生系统。[方法]以印楝带芽茎段为外植体,以MS为基本培养基,分别附加6-BA 0．1、0．3、0．5、0．8、1．0mg／L和N从0、0．1、0．3、0．5mg／L组配14个培养基配方处理进行芽分化的诱导培养试验,生根培养采用MS＋IBA0．2mg／L、1／2MS和Ms的3种培养基,研究外植体最适宜的消毒时间和取材部位,筛选诱导印楝芽分化和生根的最佳培养基配方。[结果]初代培养中,印楝外植体最适宜的消毒时间为10～12min,最适宜的取材部位为茎尖及植株的上部。14个培养基处理中,诱导芽分化的最佳培养基为：MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．1mg／L＋0．65％琼脂＋3％蔗糖（pH5．8）。诱导生根的最佳培养基为：1／2MS＋0．65％琼脂＋3％蔗糖（pH5．8）,生根率85．13％,小苗移栽成活率80％。[结论]该研究为印楝规模化快繁和遗传转化体系的建立奠定了基础。     

大豆不同外植体组织培养及再生研究

利用不同大豆品种的顶芽、胚轴、子叶节、子叶、叶片等做为外植体,进行组织培养再生研究。结果表明：不同大豆品种诱导分化芽的能力差别较大,供试品种中,辽豆11号和辽豆10号的再生能力较强,诱芽率分别为39．8％和36．0％。对诱芽率的影响,经L_（16）（4）~5正交实验可知外植体＞品种＞培养基。外值体对诱芽率影响依次为：子叶节＞顶芽＞子叶＞下胚轴。6－BA对不同外植体诱导芽发生的适宜浓度不同,顶芽、下胚轴为0．5mg·l~（－1）,子叶为1．0mg·1~（－1）,成熟子叶为4．0mg·L~（－1）。     

银荆相思组织培养及快繁技术研究

以无菌种子萌发的子叶、茎尖和茎段及当年生半木质化带腋芽茎段为外植体,MS为基本培养基,附加BA0．5～1．0mg／L NAA0．1mg／L的培养基,有利于子叶及茎尖的诱导培养,诱导率可达85％,附加BA2．0～3．0mg／L NAA0．2mg／L时,则有利于带腋芽茎段的诱导培养,诱导率80％;附加BA2．0mg／L 2,4-D0、2～0．4mg／L时,有利于不定芽的分化和增殖生长,月增殖系数为4．0;生根适宜的培养基为1／2 MS NAA0．2mg／L,生根率达75％。     

绥农10号大豆的再生体系研究

为了建立大豆的愈伤组织再生体系,以大豆绥农10号的破坏生长点的茎尖、子叶、真叶、胚轴为外植体,研究了不同激素种类、浓度对大豆愈伤组织形成和芽的再生及生根的影响.结果表明,6-BA对大豆愈伤组织的形成有抑制作用,其中对真叶的抑制作用最大,对破坏生长点的茎尖外植体抑制作用最小:6-BA诱导的大豆芽分化率均较低,其中在2～3...     

向日葵遗传转化中抗生素适宜筛选浓度的研究

以油用向日葵新葵杂6号品种为材料,采用不同浓度梯度抗生素处理茎尖、子叶、胚轴转化外植体的方法,研究了不同浓度的卡那霉素和潮霉素对向日葵茎尖、子叶、胚轴不同部位遗传转化外植体的筛选效果。结果表明,卡那霉素对向日葵茎尖、子叶、胚轴不同部位转化外植体的筛选适宜浓度为25～30 mg/mL,潮霉素对向日葵茎尖、子叶、胚轴不同部位转化外植体的筛选适宜浓度为7～10 mg/mL;PCR检测结果显示阳性植株外源基因已导入;不同部位的转化外植体对卡那霉素和潮霉素的敏感性存在一定的差异,但未见明显梯度。     

白玉龙火龙果不同外植体的离体培养

【目的】研究白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节的不定芽诱导及茎段增殖技术,为白玉龙火龙果的品种改良及快繁育苗提供技术支持。【方法】以白玉龙火龙果种子培育的无菌苗为材料,采用正交试验设计分析不同培养基、不同植物生长调节剂与浓度及其组合对白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节不定芽诱导及茎段增殖与生根的影响。【结果】白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节均能直接诱导不定芽发生。其中,16个正交处理均能诱导子叶节不定芽发生,其最优诱导培养基为WPM+0.50 mg/L TDZ+0.50 mg/L CPPU+0.05 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,诱导率为87.1%~100.0%;子叶仅1个处理未能诱导出不定芽,最高诱导率为36.0%,其最优诱导培养基为1/2MS+0.50 mg/L TDZ+0.05mg/L CPPU+2.00 mg/L 6-BA+0 mg/L NAA;下胚轴仅5个处理能诱导出不定芽,最高诱导率仅3.0%,其最优诱导培养基为1/2MS+0.05 mg/L TDZ+2.00 mg/L CPPU+1.00 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA。茎段去顶处理有利于腋芽的诱导萌发,去顶处理的最大增殖系数为4.2,不去顶处理的最大增殖系数为3.1,其最优增殖培养基为WPM+0.50 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA。NAA处理能促进茎段生根,适宜的生根培养基为1/2MS+0.1~0.5 mg/L NAA,生根率达100.0%。【结论】不同基本培养基、植物生长调节剂与浓度及其组合均能诱导白玉龙火龙果子叶、下胚轴和子叶节不定芽发生及茎段芽增殖和不定根产生。其中,不定芽诱导以子叶节最易诱导发生,其次为子叶,下胚轴较难;茎段芽增殖和不定根诱导均较容易。     

甘草的试管苗快速繁殖

以甘草种子萌发的幼苗为材料,进行组织培养快速繁殖研究。结果表明,在幼茎、幼叶、子叶、下胚轴、胚根等5种外植体中,子叶及下胚轴均适合诱导愈伤组织发生;在6-BA、NAA或2,4-D不同激素组合中,以MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.5mg/L为最佳的愈伤组织诱导培养基,同时也是以茎尖、腋芽为外植体进行丛生芽诱导的最佳培养基;在IAA、IBA和NAA 3种激素中,以1/2MS+NAA 0.05mg/L为最佳的试管苗生根培养基,生根率可达80%。     

费乌瑞它马铃薯脱毒技术研究

[目的]解决费乌瑞它马铃薯种薯退化问题。[方法]利用植物茎尖脱毒培养技术对费乌瑞它马铃薯进行脱毒。[结果]芽外植体灭菌方式以5%NaClO_3 min+0.1%HgCl_2灭菌7 min+70%乙醇0.5 min组合效果最好;芽外植体消毒灭菌后在MS基本培养基中培养效果最好;6-BA、NAA对芽外植体的诱导和分化有促进作用,最佳诱导培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L,此时芽分化成苗率最高。[结论]该研究可为费乌瑞它马铃薯种薯生产提供理论依据。     

长寿沙田柚不同外植体愈伤组织诱导的研究

[目的]对长寿沙田柚不同外植体愈伤组织的诱导进行研究。[方法]以长寿沙田柚无菌苗为材料,分别采用其上胚轴、下胚轴和子叶节段为外植体,研究不同外源激素对愈伤组织诱导的影响。[结果]诱导长寿沙田柚愈伤组织的外植体以下胚轴为佳,激素组合以1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D的效果最好。[结论]为以后长寿沙田柚高效离体再生体系的建立及其遗传转化研究奠定了基础。     

本生烟草组培再生及遗传转化的研究

[目的]获得本生烟草转胰高血糖素样肽-1基因植株。[方法]以本生烟草无菌苗叶片为外植体材料,建立本生烟草再生系统,通过农杆菌叶盘法浸染进行遗传转化,获得本生烟草转胰高血糖素样肽-1基因植株。[结果]通过多重比对和重复,确定本生烟草叶片最适分化培养基为MS＋1.5mg/L6-BA＋0.1mg/LNAA,生根培养基为MS＋0.1mg/LIBA;经由卡那霉素浓度梯度试验,确定选择压力为5mg/L卡那霉素;对经卡那霉素筛选获得的抗性芽进行GUS组织化学检测,获得阳性信号。[结论]初步证实外源基因胰高血糖素样肽-1已整合到本生烟草基因组中。     

杂种枫香组织培养再生研究

目的枫香具有适应性强、生长速度快、观赏价值高等特点,既可以作为用材树种又可以作为优良的园林绿化树种。北美枫香能够与中国枫香杂交并可产生有杂种优势的后代,但是杂种枫香的快速繁殖技术和遗传转化体系还有待完善。方法本研究以北美枫香为母本,中国枫香为父本进行杂交,选用子一代杂种枫香的子叶、子叶节以及下胚轴为外植体材料建立高效的组培再生体系,并对3种外植体的分化能力进行比较。结果(1) 子叶和子叶节外植体最佳芽诱导培养基为0.2 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA的WPM培养基,而下胚轴外植体最佳芽诱导培养基为0.1 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA的WPM培养基。(2)3种外植体在0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.8 mg/L GA不加琼脂的WPM芽伸长液体培养基中获得最高的平均不定芽诱导数。(3)不定芽在2.0 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA的WPM培养基中生根,生根率达到100%。(4)不定芽生根培养2个月后长为完整植株,移栽成活率在90%以上。结论(1) 杂种枫香3种外植体的分化能力依次为:子叶节>子叶>下胚轴,其中子叶节的分化能力显著高于子叶和下胚轴。(2)TDZ能够有效促进不定芽的诱导,GA对不定芽的伸长具有显著的影响。(3)杂种枫香外植体在固体培养基中获得了最高的不定芽诱导率,在液体培养基中获得了最高不定芽平均数量,而且液体培养中未出现玻璃化。本研究为杂种枫香新品种的快速繁育以及遗传转化体系的建立奠定了良好的基础。      

油菜子叶及下胚轴对潮霉素敏感性研究

[目的]为油菜潮霉素抗性基因的遗传转化提供依据。[方法]以油菜品种沪油19号、苏州青、五月慢的子叶和下胚轴为外植体,研究不同浓度潮霉素处理对其褐化率、出愈率的影响。[结果]潮霉素浓度为3 mg/L时,五月慢、沪油和苏州青的褐化率分别为87.6%、30.7%、40.1%;褐化的临界浓度均为6 mg/L。苏州青下胚轴对潮霉素的耐受性较强,其褐化的临界浓度高于沪油19号和五月慢。潮霉素浓度为6 mg/L时,沪油19号、苏州青、五月慢子叶的出愈率分别为3.7%、2.3%、0,下胚轴的出愈率分别为5.1%、8.1%、2.2%。[结论]以子叶为外植体时,3个品种适宜的潮霉素筛选浓度为6 mg/L;以下胚轴为外植体时,沪油19号和五月慢适宜的潮霉素筛选浓度为6 mg/L,苏州青为9 mg/L。     

应用正交试验优选茎瘤芥子叶组培诱导培养基

[目的]建立茎瘤芥体细胞培养再生植株体系,为芸薹属植物茎瘤芥及芥菜的遗传转化体系及生物技术育种奠定基础。[方法]以茎瘤芥6 d苗龄子叶为材料,应用正交试验法研究不同浓度生长激素6-BA、NAA、2,4-D对外植体分化和愈伤组织成苗率的影响。[结果]最适合茎瘤芥外植体分化成苗的培养基为MS加6-BA 3.0 mg/L＋NAA 0.10 mg/L＋2,4-D 0 mg/L＋3 g/L琼脂粉;1/2MS＋0.10mg/LNAA利于组培苗生根。[结论]优选培养基的再生频率具有较大提高。     

影响木薯芽器官发生及植株再生的因素

[目的]对木薯芽器官发生的影响因素进行优化研究,建立了一个高效的植株再生体系。[方法]以木薯成熟胚状体的子叶为外植体,对木薯芽器官发生及植株再生的影响因素（基因型、AgNO3、外植体类型和碳源）进行优化研究。[结果]成熟培养14d的＂华南8号＂胚状体子叶为最佳外植体,诱导不定芽发生的最佳培养基为MS＋0.5mg/LCuSO4＋1.0mg/L6-BA＋0.5mg/LIBA＋6mg/LAgNO3,以麦芽糖代替蔗糖或葡萄糖作碳源可大大提高木薯不定芽发生率和植株再生率。[结论]该研究建立了高效的木薯植株再生体系,为培育高淀粉含量新品种（品系）奠定了基础。     

沙棘品种深秋红茎尖组织培养

[目的]筛选沙棘品种深秋红茎尖组织培养基配方。[方法]选用不同培养基,以7月中旬至8月下旬采集的大田茎尖为外植体,对沙棘品种深秋红的组织培养技术进行研究。[结果]最适初代培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L,最适愈伤组织诱导培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L,最适继代培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L,最适腋芽诱导培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L。[结论]该研究建立了沙棘品种深秋红茎尖组织培养技术,为其产业化生产奠定基础。