酶联免疫吸附测定法测定四种苏云金杆菌菌株的晶体蛋白含量

用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定苏云金杆菌81—6的晶体蛋白含量,结果表明:严格控制实验条件,ELISA法测定具有良好的重复性。用ELISA法测定苏云金杆菌四个菌株的纯晶体蛋白和相应的孢晶混合物,通过回归方程可求出各个孢晶混合物中的晶体蛋白含量。HD—1和7216的ELISA法测定结果与用小菜蛾进行生测的LD_(50)值比较,证明ELISA法测定样品晶体蛋白含量的高低基本反映该样品毒力大小。     

三唑磷酶联免疫吸附测定法中包被抗体稳定剂的研究

选择了甘油、山梨醇、聚乙二醇(PEG)、卵清蛋白(OVA)、多肽、糖、氨基酸等试剂,通过经验法和正交法相结合的手段配制了一系列稳定剂,对吸附在酶标板上的三唑磷多克隆抗体进行处理(37℃,1 h)后,再在37℃下连续贮存 7 d,利用直接竞争ELISA法对不同稳定剂处理的包被抗体免疫活性、亲合性及检测灵敏度进行检测,并与未经稳定剂处理的对照进行比较,筛选得到效果较好的稳定剂 1 (质量分数:甘油2.5%,氨基酸1.5%,蛋白胨3.0%,离子螯合剂0.1%,防腐剂0.01%)。用稳定剂 1 处理包被抗体后,4~6℃下保存半年及37℃下保存14 d的试验结果表明,抗体的活性相对保持率分别为97.8%和94.2%;其免疫活性、亲合性(I50分别为68.43和54.38 ng/mL)及灵敏度(I10分别为3.72和 3.22 ng/mL)与常规方法包被的抗体(包被好后不贮存,直接检测,I50为60.73 ng/mL,I10为 3.11 ng/mL)无明显差异;冻融试验表明,经稳定剂 1 处理的三唑磷抗体在反复冻-融次数不超过8次时其活性也是稳定的。说明筛选出的稳定剂可以显著提高三唑磷多克隆包被抗体的稳定性,可用于三唑磷ELISA试剂盒的生产。     

快速检测大豆疫莓菌的酶联免疫吸附技术研究

利用已经制备的大豆疫霉菌的抗血清，对大豆疫霉菌的纯培养和大豆病组织进行检测。结果表明，间接法（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）和夹心法（ＤＡＳ－ＥＬＳＩＡ）能较好地检测纯培养的大豆疫霉菌，但在检测病组织时，夹心ＥＩＳＡ的特异性较强，能够可靠地检测到大豆病组织内的病原菌。     

生物素—亲和素酶联免疫吸附测定法检测水稻白叶枯病菌的研究

以单克隆抗体为第二抗体的ELISA双夹心法对于检测水稻白叶枯病菌具有简便快速准确的优点,但对于检测病种所带微量细菌,其灵敏度仍嫌不足。我们在常规ELISA间接法的基础上,建立了一种亲和素—生物素化辣根过氧化物酶复合物酶联免疫吸附测定法(ABC-ELISA),并初步用于水稻白叶枯病菌的检测,取得一定效果。     

生物素-亲和素酶联免疫吸附测定法检测水稻白叶枯病菌的研究

 以单克隆抗体为第二抗体的ELISA双夹心法对于检测水稻白叶枯病菌具有简便快速准确的优点,但对于检测病种所带微量细菌,其灵敏度仍嫌不足。     

酶联免疫吸附技术——Ⅲ酶联免疫吸附法在检测植物病毒上的应用

一、酶联免疫吸附法(ELISA)概述1966年 Nakane 等及 Avrameas等,分别报道用酶代替荧光素标记抗体,作生物组织中抗原的鉴定及定位。随后发展用于鉴定免疫扩散及免疫电泳板上的沉淀线。Miles(1968)等描述了如何在免疫测定中用酶代替同位素。Avrameas(1969,1971)试验使抗体与酶结合,并进行了检测抗原的基础试验。继而由     

酶联免疫吸附技术—Ⅰ酶联免疫吸附法(ELISA)实验技术

从植物检疫的任务着眼,为了防止传染性病害的传入和散布,早期准确诊断是十分重要的。由于这个原因,高度敏感和特异性强的血清学诊断方法已经得到广泛的应用。随着免疫学理论的进展,血清学实验技术也有很大发展,主要表现在抗原、抗体纯化,操作技术的微量化、自动化、标准化,以及荧光素、同位素、特别是酶标记抗体球     

溴氰菊酯酶联免疫吸附分析方法研究

建立了定量测定溴氰菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。合成了半抗原1-羧基-(3'-苯氧基苯基)甲基-3-(2',2'-二溴乙烯基)-2,2-二甲基环丙基羧酸酯(Med)和N-2-(羧基丙基)氨基甲酰基-(3'-苯氧基苯基)甲基-3-(2',2'-二溴乙烯基)-2,2-二甲基环丙基羧酸酯(Di)。分别采用碳二亚胺法和混合酸酐法将半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了免疫原Di-BSA和包被原Di-OVA、Med-OVA。将制得的溴氰菊酯免疫原免疫动物获得多克隆抗体,经间接非竞争ELISA法测得其效价为2.5×105。通过对甲醇含量、离子强度、pH值等影响因素进行异源分析条件的优化,确立了溴氰菊酯间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件(30%甲醇、氯化钠0.4 mol/L、pH 7.5),并建立了标准竞争曲线。该方法的IC50值为0.55±0.05 mg/L,检测限(IC10)为3.76±0.35 μg/L,对大多数拟除虫菊酯无交叉反应。分别在自来水、河水和土壤样品中添加0.05 ~5.0 mg/L(或mg/kg)的溴氰菊酯,回收率分别为89.7% ~106.8%、82.4% ~101.7%、75.6% ~97.8%。     

除草剂酶联免疫吸附测定研究进展

酶联免疫分析技术具有方便快速、特异性强、灵敏度高等优点,近年来广泛应用于农药残留检测.本文介绍了酶联免疫分析技术在除草剂残留检测中的应用研究进展,分别介绍了各类除草剂的半抗原合成方法以及抗体的灵敏度,探讨了酶联免疫吸附分析法存在的问题和应用前景.     

用酶联免疫吸附技术检测柑桔溃疡病初报

长期以来,对柑桔溃疡病的鉴定和检测,采取病原分离、生理生化等常规技术,不仅时间长,还需要较多的设备仪器,不适应植检工作对检测技术快速、准确、方便的要求。四川省植检站同四川农业大学协作,应用血清学先进技术——蔼联免疫吸附技术检测柑桔溃疡病菌,研究结果用该技术的间接法和双抗体夹心法都能在40小时内快速、准确(灵     

用酶联免疫吸附法检测番木瓜的两种病毒病

同属于马铃薯Y病毒组的番木瓜环斑病毒P型(PRSV—P)和番木瓜叶变形花叶病毒(PLDMV)能在番木瓜上引起症状相似的病害。这两种病害仅根据症状难以区别。采用双向抗体夹层的酶联免疫吸附法,可以上述两种抗体血清的1000倍稀释液对被侵染的番木瓜的天然提取液进行检测。     

酶联免疫吸附试验方法的比较

应用白背飞虱单克隆抗体比较了３种酶联免疫吸附试验方法。结果表明：间接酶联免疫吸附试验的灵敏度高于直接酶联免疫吸附试验,分别为０．０３１２５μｇ蛋白／ｍｌ（相当于１／２５６头成虫）和０．０６２５μｇ蛋白／ｍｌ（相当于１／１２８头成虫）,而双抗夹心酶联免疫吸附试验无法使用。样品中非目标抗原（捕食者）浓度对检测结果有显著的影响,且对直接酶联免疫吸附试验的影响更大,检测时必须对样品做适当的稀释     

快速检测大豆疫霉菌的酶联免疫吸附技术研究

利用已经制备的大豆疫霉菌的抗血清，对大豆疫霉菌的纯培养和大豆病组织进行检测。结果表明：间接法（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）和夹心法（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）都能较好地检测纯培养的大豆疫霉菌，但在检测病组织时，夹心ＥＬＩＳＡ的特异性较强，能够可靠地检测到大豆病组织内的病原菌     

甲萘威酶联免疫吸附分析技术研究

合成了两种不同结构的甲萘威半抗原并与载体蛋白质共价偶联制备人工抗原。以人工抗原免疫动物获得对甲萘威具特异性的高效价抗体 ,建立并优化了痕量甲萘威的竞争性酶联免疫吸附测定法。该法测定甲萘威的线性浓度范围为 10 1～ 10 -4 μg/ml,检测限低于 0 .0 1ng/ml。其他结构类似的氨基甲酸酯类杀虫剂对甲萘威的分析无干扰。     

酶联免疫吸附技术——Ⅱ酶联免疫吸附法(ELISA)实验中的几个问题

一、酶联免疫吸附法(ELISA)的实验材料及其影响因素 ELISA试验的理论比较简单,但是要成功地应用于常规诊断,需要做很多预试工作,以确定最适当的条件。ELISA的基本操作原则是:固相吸附(抗体或抗原)→洗     

酶联免疫吸附试验检测水稻条纹叶枯病介体昆虫带毒率

本文分两部分。第一部分概述了抗病品种在重病地上连作5年抗性变异测试结果,对山东省各地代表菌系抗性鉴定结果以及全国抗病品种区试中在各地的抗性表现,提出棉花抗枯萎病品种抗性比较稳定,适应性较广。第二部分介绍了病原茵致病力变异研究结果,提出棉花枯萎病菌群体致病力变异是相当缓慢的。     

酶联免疫吸附试验检测水稻条纹叶枯病介体昆虫带毒率

应用酶联免疫吸附试验的双抗体夹心法检测水稻条纹叶枯病毒,灵敏度可达125ng/ml,重复性和特异性均较满意,操作简便,试剂稳定,适用于常规检测。试验用辣根过氧化物酶与提纯的抗 RSV 抗体球蛋白交联,制得酶标抗体,以磷苯二胺为底物,最适包被抗体浓度为0.5～1μg/ml,最适酶标记抗体浓度为0.15μg/ml,能检出抗原的最低浓度;病叶澄清液稀释度为1:6400。应用酶联免疫吸附试验检测水稻条纹叶枯病介体昆虫带毒率,以生物接种测定法为对照,检测1936头灰稻虱,符合率为97.9%,在农业生产上具有实用价值。     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测花生种子带毒的研究

 利用花生上分离到的花生轻斑驳病毒(PMMV),黄瓜花叶病毒CA株系(CMV-CA),花生矮化病毒Mi株系(PSV-Mi)所制备的抗血清,从中提取IgG、应用ELISA间接法检测花生种子,在花生种子中不程度地都检测出带有PMMV、CMV、PSV病毒,而且有复合带毒现象。经催芽的花生种子子叶、胚芽及胚根分别用PMMV和CMV免疫制备的抗体进行检测,花生的上述三部分均带有PMMV和CMV病毒,且胚芽中病毒量最高。萌发种子及未萌发种子的子叶无论从带毒率还是病毒含量上均看不出明显的差异。ELISA间接法由于直接利用商品酶标抗体,简化了试验程序,利于对种子带毒进行快速检测。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)方案

A.试剂1、饱和硫酸铵溶液煮沸溶解足够的(NH_4)_2SO_4,最少764克/升水放凉到室温。2、磷酸盐缓冲盐水(PBS),pH7.4。8.0克 NaCl0.2克 KH_2PO_42.9克 Na_2HPO_4.12H_2O0.2克 KCl0.2克 NaN_3将各种成分溶解在800毫升蒸馏水中,加到1,000毫升,核对 pH。3、吐温 PBS 液加1.0毫升吐温20到1,000毫升 PBS 液中,