Study on in Viro Induction of Autotetraploid of Tomato(Lycopersicon esculentum Mlll.)

[目的]利用组织培养技术与秋水仙素相结合进行番茄四倍体的离体诱导研究.[方法]以番茄品种渝粉109为试验材料,在建立番茄植株高效离体再生体系的基础上,以带绿芽生长点的子叶愈伤组织为诱导材料,利用秋水仙素分别采用混培法和浸渍法进行番茄同源四倍体的离体诱导.[结果]以带绿芽生长点的子叶愈伤组织为诱导材料,番茄同源四倍体离体诱导采用混培法,0.2％的秋水仙素处理48h时获得了最高诱导率,为50.0％;浸渍法虽然诱导率较高,但对外植体的药害程度大.[结论]通过混培法获得了较高的诱导率,为番茄品种改良和种质资源的创新与丰富提供了一条新的途径.     

水稻体细胞同源四倍体的人工诱导及遗传特性研究

以４种基因型水稻灿粳杂种二倍体为材料，在幼穗离体培养过程和种子发芽期，分别用不同浓度秋水仙素处理愈伤组织和发芽种子，诱变获得水稻同源四倍体。结果表明，秋水仙素３００ｍｇ／ｌ和５００ｍｇ／ｌ的浓度处理愈伤组织，四倍体最高诱导率分别达到４５．５％和５６．３％，平均诱导率比种子发芽期的四倍体诱导率提高１０倍左右。种子发芽期为２５０－５００ｍｇ／ｌ较低浓度的秋水仙素诱导效果较好，四倍体诱导率为２．９－５．     

火鹤四倍体的诱导与鉴定

以火鹤二倍体品种‘Smaragd’和‘Artus’的愈伤组织为诱导材料,利用秋水仙素处理的方法进行火鹤四倍体的离体诱导。结果发现,火鹤四倍体诱导率因基因型、秋水仙素处理浓度及处理时间不同而异。不同品种的四倍体诱导率不同,低浓度的秋水仙素的诱导率要高于高浓度的诱导率;相同浓度处理下,长时间处理的诱导率比短时间处理的诱导率要高。两个品种分别在含0.2 g/L秋水仙素浓度的液体培养基中振荡培养14 d的四倍体诱导率最高,分别为52.50%和61.90%。随着秋水仙素浓度的增加,愈伤组织的绝对生长速度和平均芽分化数逐渐降低。改良压片法是鉴定火鹤四倍体的可靠方法。     

秋水仙素离体诱导红掌四倍体试验

以红掌阿拉巴马(Albama)愈伤组织为诱导材料,采用秋水仙素进行四倍体离体诱导。结果表明,液体培养处理效果较好,能有效地诱导四倍体。秋水仙素浓度0.20 g·L-1时的四倍体诱导率较高,浓度过高或过低均会导致诱导率下降。在同一秋水仙素浓度下,处理时间越长,四倍体诱导率越高。0.20 g·L-1秋水仙素液体培养15 d的四倍体诱导率最高,为17.5%。四倍体植株相对粗壮,叶片大而厚实且皱,叶下表皮气孔长,且密度小,形态筛选和气孔鉴定可作为四倍体的辅助筛选。     

不同倍性白魔芋植株的细胞学形态观察与核型分析

采用种子浸泡法、根状茎生长点滴液法和离体不定芽混培法3种途径诱导白魔芋四倍体植株,并对二倍体和四倍体植株外部形态、叶片气孔特征和核型进行分析比较．结果表明,与二倍体植株相比,四倍体植株叶片明显变宽、叶形指数变小,叶柄粗短,叶片下表皮气孔及其保卫细胞体积变大、密度减小．植株外部形态特征变异和叶片下表皮气孔密度变小等特征可作为鉴定变异材料的间接方法,四倍体和二倍体均为“2B”核型,可认为四倍体是由二倍体经秋水仙素诱导直接加倍产生的同源四倍体．     

不同倍性白魔芋植株的细胞学形态观察与核型分析

采用种子浸泡法、根状茎生长点滴液法和离体不定芽混培法3种途径诱导白魔芋四倍体植株,并对二倍体和四倍体植株外部形态、叶片气孔特征和核型进行分析比较.结果表明,与二倍体植株相比,四倍体植株叶片明显变宽、叶形指数变小,叶柄粗短,叶片下表皮气孔及其保卫细胞体积变大、密度减小.植株外部形态特征变异和叶片下表皮气孔密度变小等特征可作为鉴定变异材料的间接方法,四倍体和二倍体均为"2B"核型,可认为四倍体是由二倍体经秋水仙素诱导直接加倍产生的同源四倍体.     

小果型西瓜离体诱导四倍体的初步研究

[目的]为小果型西瓜三倍体的育种奠定基础。[方法]以二倍体小果型西瓜优良自交系MH-39-1的子叶为外植体进行离体诱导四倍体的研究。[结果]100 mg/L秋水仙素处理子叶的不定芽分化率达66.7%,平均分化不定芽6.7个。400 mg/L秋水仙素处理的四倍体诱导率为20.0%。秋水仙素处理12 h的不定芽分化率为83.3%,处理48 h的不定芽分化率为16.7%。秋水仙素处理24~36 h的四倍体诱导率为16.7%。4.0 mg/L 6-BA处理的不定芽分化率为83.3%,1.0 mg/L 6-BA处理的不定芽分化率为58.3%。再生芽在4种生根培养基上的生根率均在90%以上,在不添加植物生长调节剂的培养基上再生苗的平均生根数仅为6.5条,添加NAA的培养基上再生苗的平均生根数在10条以上,但根短而粗。[结论]初步确定秋水仙素离体诱导小果型西瓜四倍体的适宜浓度和处理时间为400mg/L和24 h。     

秋水仙素离体双层诱导同源四倍体青花菜的研究

研究秋水仙素离体双层培养诱导对3种青花菜染色体加倍的诱导效应,建立青花菜四倍体的离体双层培养诱导体系,为植物倍性育种提供新途径。以子叶期保留下胚轴0.4~0.6 cm的子叶为外植体,接入含不同浓度的秋水仙素离体双层培养基(上层为含秋水仙素的液体培养基,下层为不含秋水仙素的固体培养基)中诱导24、48和96 h。结果表明:以300mg·L-1秋水仙素处理48 h诱导获得四倍体的效果最佳,LQ-2、S139-2和LQ-23三个材料外植体存活率达100.00%,增殖系数分别为2.00、2.33和2.67,四倍体诱导率分别为66.67%、71.42%和62.50%。与二倍体相比,四倍体植株在株高、叶片、花球等性状上增大,气孔大小和密度呈现显著差异,LQ-2、S139-2和LQ-23三个材料的花粉粒增大,增幅分别为18.85%×63.71%、25.00%×34.68%和3.36%×61.86%。四倍体根尖染色体为2n=4x=36。流式细胞仪鉴定发现二倍体DNA相对含量为300,四倍体为600。结论:通过大量试验,找到了秋水仙素双层诱导青花菜的最佳秋水仙素浓度和诱导时间,提高了诱导率,获得了3个同源四倍体青花菜新材料。     

利用秋水仙素诱导地艹念多倍体的研究

[目的]探索利用秋水仙素诱导地艹念多倍体的可行性。[方法]以秋水仙素作为诱变剂,对地艹念无菌试管苗丛芽进行多倍体诱导,研究秋水仙素浓度、处理方法和处理时间对地艹念组培苗丛芽诱导效果的影响。经纯化和鉴定后,分析地艹念多倍体的外部形态和叶片气孔特征。[结果]采用混培法用0.1%秋水仙素对地艹念处理14 d的诱导率达28%,明显优于浸泡法。秋水仙素浓度对地艹念染色体的加倍率影响显著。采用不定芽技术切取变异株顶芽继代5次后,可得到纯合四倍体地艹念植株,染色体数目为2n=56。与正常二倍体相比,四倍体地艹念植株表现出多倍体巨大型特征。[结论]采用混培法用0.1%秋水仙素处理地艹念试管苗丛芽21 d,可获得最好的诱导效果。     

利用秋水仙素诱导地菍多倍体的研究

[目的]探索利用秋水仙素诱导地蒸多倍体的可行性.[方法]以秋水仙素作为诱变剂,对地菍无菌试管苗丛芽进行多倍体诱导,研究秋水仙素浓度、处理方法和处理时间对地菍组培苗丛芽诱导效果的影响.经纯化和鉴定后,分析地菍多倍体的外部形态和叶片气孔特征.[结果]采用混培法用0.1%秋水仙素对地菍处理14 d的诱导率达28%,明显优于浸泡法.秋水仙素浓度对地菍染色体的加倍率影响显著.采用不定芽技术切取变异株顶芽继代5次后,可得到纯合四倍体地菍植株,染色体数目为2n=56.与正常二倍体相比,四倍体地菍植株表现出多倍体巨大型特征.[结论]采用混培法用0.1%秋水仙素处理地菍试管苗丛芽21 d,可获得最好的诱导效果.     

花蕾型金银花同源四倍体的诱导和鉴定

[目的]为选育金银花优良品种提供材料。[方法]以当年生银翠蕾嫩枝茎段为外植体,进行愈伤组织和不定芽培养,对获得的不定芽采用秋水仙素浸泡法和培养基中添加秋水仙素法诱导多倍体,并进行染色体鉴定。[结果]染色体观察结果表明,7:30 a.m.取材,用0.2%的秋水仙素溶液浸泡3 h,用1.0 mol/L盐酸溶液在60℃下处理18 min的材料中,中期细胞多,染色体分散和着色均较好,而且可以看到清晰的点状染色体。染色体鉴定结果表明,秋水仙李浓度对多倍体诱导率有显著影响,用0.4%秋水仙李浸泡16 h的诱导率为50.0%,在秋水仙李浓度为1.0 g/L的培养基中培养8 d的诱导率为43.8%。[结论]该研究为金银花同源四倍体的诱导与鉴定提供了一定的试验依据。     

番茄温敏核不育系花粉发育及其对愈伤组织诱导的效应

[目的]探讨番茄花蕾外观形态及花粉发育时期与花药培养愈伤组织诱导的相关性,筛选出番茄温敏核不育系花药培养的适宜花粉发育时期。[方法]采用形态学观测、细胞学鉴定和花药组织培养相结合的方法,对番茄2个温敏核不育系T7、T8和普通杂交种王蔬、红日2个品种,进行了花蕾外观形态分类、花粉发育时期鉴定与愈伤组织诱导效应的比较研究。[结果]番茄花蕾外观形态与花粉发育时期的关系为：花蕾长0.2~0.3 cm=花粉孢子期,花蕾长0.4~0.5 cm=花粉单核早期,花蕾长0.6~0.7 cm=花粉单核中晚期（单核靠边期）,花蕾长0.8~0.9 cm=花粉二核期、三核期,花蕾长≥1.0 cm=花粉三核期、成熟期;T7、T8、王蔬、红日的花药培养均以花粉发育在单核中晚期（单核靠边期）为最佳时期,此时愈伤组织诱导率达最高,分别为11.8%、13.7%、19.6%和18.1%。[结论]番茄花蕾外观形态及花粉发育时期与花药培养愈伤组织诱导有明显的相关性;番茄温敏核不育系花药培养的适宜花粉发育时期为单核中晚期（单核靠边期）。     

不同因素对油樟愈伤组织生长的影响

[目的]筛选油樟组培条件。[方法]以油樟带芽茎段为外植体,通过愈伤组织诱导率、污染率、褐变等指标研究无机盐、光照、抗生素等因素对愈伤组织生长影响。[结果]愈伤组织在2种培养基上均能明显增殖,且MS的培养效果好于1/2MS。由带芽茎段诱导的新生愈伤组织略带绿色。继代培养后,黑暗中诱导和培养的愈伤组织为淡黄色或白色,光照下培养的愈伤组织为褐色。愈伤组织诱导率和外植体污染率都随抗生素浓度的增加而降低,25～50mg/L的链霉素处理出愈率最高(60%～72%),污染率最低(0～15%),死亡率也最低(0)。在相同浓度下,使用链霉素外植体死亡率最低。[结论]MS培养基+25～50mg/L链霉素是油樟组培的最佳条件。     

番茄温敏核不育系花药培养诱导愈伤组织的研究

[目的]探讨影响番茄温敏核不育系花药培养诱导愈伤组织的相关因子。[方法]研究不同灭菌处理、不同基本培养基、不同激素种类及浓度对番茄温敏核不育系花药培养诱导愈伤组织的影响。[结果]0．1％HgCl28min＋10％NaClO8min的灭菌处理效果最佳,菌污染率仅为1．95％,出愈率达71．73％;在MS、B5Miller3种基本培养基的比较试验中,以MS为基本培养基对花药愈伤组织的诱导效果最好;诱导愈伤组织的适宜浓度为2,4-D1mg／L、6-BA2mg／L、KT2mg／L。[结论]灭菌处理、基本培养基、激素种类及浓度可以影响番茄温敏核不育系花药培养诱导愈伤组织的效果。     

不同激素配比对番茄下胚轴诱导与分化的影响

[目的]研究不同激素配比对番茄下胚轴诱导与分化的影响。[方法]以番茄栽培品种03HN31为试验材料,通过对番茄下胚轴的离体培养,研究不同激素配比对番茄下胚轴愈伤组织诱导、不定芽分化和根形成的影响。[结果]愈伤组织诱导和芽分化的最适培养基为MS＋6-BA 2.0 mg/L＋IAA 0.2 mg/L,有利于根形成的最适培养基为MS＋IAA 0.1 mg/L。[结论]该研究为番茄转基因研究、亲本的保存以及快速繁殖等工作奠定了基础。     

红姬凤梨离体培养植株再生关键技术研究

[目的]建立红姬凤梨组织培养快繁体系。[方法]以MS培养基为基本培养基添加植物生长调节剂,对红姬凤梨叶片进行愈伤组织诱导,并进行芽分化、芽的继代增殖和生根培养。[结果]叶鞘愈伤组织诱导以MS＋2,4-D0．5mg／L＋BA3．0mg／L＋KT2．0mg／L培养基最好、愈伤组织诱导率和分化率分别达82．4％和40．2％;丛生芽诱导以MS＋2,4-D0．2MG/L＋NAA0．05mg／L＋BA3．0mg／L＋KT2．0mg／L培养基增殖效果最佳,增殖倍数迭9．72;生根诱导以1／2MS＋NAA3．0mg/L培养基诱导生根效果最好,平均每株生根12．12条。[结论]采用组织培养可有效去除病毒,增加繁殖系数。     

不同浓度的激素组合对猕猴桃愈伤组织诱导及芽分化的影响

[目的]寻求代替ZT提高猕猴桃愈伤组织诱导及芽分化的最佳激素组合。[方法]以美味猕猴桃离体茎段为外植体,以MS为基本培养基,附加2,4-D0.5、1、2.0mg/L和NAA0.1、0.3、0.5mg/L与6-BA0.5mg/L分别组成诱导愈伤组织的6个激素组合,并以同样浓度的2,4-D和NAA与6-BA1.0mg/L分别组成分化芽的6个组合激素,研究不同浓度的激素组合对猕猴桃愈伤组织诱导及芽分化的影响。[结果]6种不同浓度的激素组合对猕猴桃茎段愈伤组织均有一定的诱导作用,其中2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L的组合有利于愈伤组织诱导,诱导率达86.1%;绿色愈伤组织在MS培养基附加激素2,4-D+6-BA组合中芽的分化率很低,而在附加NAA+6-BA组合中芽的分化率较高,其中,NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L的组合有利于芽分化,芽分化率为75.2%。[结论]2,4-D与6-BA组合对猕猴桃绿色愈伤组织的芽分化有一定抑制作用。     

不同抗褐变剂组合对海南龙血树组织培养及抗褐变效果的影响

[目的]探讨不同抗褐变剂及其组合对海南龙血树组织培养及抗褐变效果的影响,为其种苗的快速繁殖提供参考依据.[方法]采用3种抗褐变剂处理海南龙血树外植体嫩茎,开展愈伤组织诱导与抗褐变试验;在基本培养基MS中添加不同浓度的6-BA和NAA组合,检测其对海南龙血树愈伤组织分化不定芽和丛生芽形成的影响.[结果]海南龙血树嫩茎在0.1 g/L半胱氨酸(Cys)溶液中浸泡10 min后接种于含0.1 g/L维生素C(Vc)的培养基中,褐变率比对照(CK)低,仅20.5%,愈伤组织诱导率最高,为75.5%;适宜龙血树嫩茎愈伤组织诱导的植物生长调节剂组合为6.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为75.5%;适宜龙血树芽增殖的植物生长调节剂组合为4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,增殖倍数为3.3.[结论]采用Cys和Vc两种抗褐变剂组合处理可适当减轻龙血树组培过程中嫩茎的褐变程度,促进愈伤组织诱导;培养基中适当添加6-BA和NAA可促进愈伤组织的不定芽分化和丛生芽形成.     

组培固定番茄杂种优势优化体系的建立

[目的]建立组培固定番茄杂种优势优化体系。[方法]以番茄杂种优势组合优秀植株的侧芽作为外植体,MS培养基为基本培养基,通过添加不同浓度配比的6-BA和IAA筛选适宜的不定芽诱导、增殖培养基,并通过添加不同浓度的NAA筛选适宜的不定芽生根培养基。[结果]在温度25~26℃,光照强度3 000 lx,光照时间12 h/d的环境和静止培养的条件下,参试材料在MS+6-BA 2.4 mg/L+IAA 0.60 mg/L的培养基上能够诱导出生长状态良好的不定芽,并且能够大量增殖;在1/2MS培养基中添加的NAA浓度为0.5 mg/L时,不定芽生根状态较好。[结论]该研究建立的番茄杂种优势组合植株侧芽组培快繁体系,可以快速繁殖出大量番茄杂种优势组合侧芽的组培苗,将其用于固定番茄杂种优势,可以达到加快番茄新品种选育进程的目的。