不同因子对杜仲愈伤组织继代培养的研究

实验进行NAA,NAA与BA及KT的组合,光照条件,培养基pH和糖种类对杜仲愈伤组织继代培养的影响.结果表明,单独使用NAA时,以0.5 mg·L-1愈伤组织继代生长率最高.NAA与细胞分裂素配合使用时,以0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1BA最好,其愈伤组织生长量明显大于单独使用NAA,KT的加入不利于愈伤组织的生长.光照条件以12 h光照12 h暗培养最好,pH以6.3最为适宜,糖以分析纯的蔗糖比葡萄糖和市售普通白糖生长量大.     

苦瓜愈伤组织的诱导及悬浮培养体系的建立

以苦瓜子叶、上、下胚轴为外植体,在添加不同浓度激素组合的培养基上诱导和继代愈伤组织,比较愈伤组织的状态与生长情况,并对悬浮细胞培养条件进行了优化。结果表明,上下胚轴在添加2,4-D2.0mg·L-1+6-BA4.0mg·L-1或NAA1.0mg·L-1+6-BA4.0mg·L-1的MS培养基上均可诱导出状态良好的愈伤组织,愈伤组织在添加2,4-D0.5mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1的继代培养基上能长势最好,添加30g·L-1蔗糖和3.0g·L-1活性炭的B5培养基有利于苦瓜悬浮细胞的快速增殖。     

玉竹愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养体系的建立

以玉竹叶片和根状茎为外植体,研究植物生长调节剂、碳源和pH对玉竹愈伤组织诱导的影响以及植物生长调节剂对愈伤组织增殖的影响,通过正交试验初步建立并优化玉竹愈伤细胞的悬浮培养体系。结果表明,叶片和根状茎愈伤组织诱导的最佳培养基均为MS+1.0mg·L~(-1)?6-BA+0.5mg·L~(-1)?NAA+30%蔗糖,培养基最佳pH5.6,叶片和根状茎愈伤组织增殖的最佳植物生长调节剂组合均为2.0mg·L~(-1)?6-BA+0.8mg·L~(-1)NAA,且根状茎愈伤组织的诱导率和增殖倍数均明显高于叶片。根状茎愈伤细胞悬浮培养的最佳接种量80g·L-1,最佳植物生长调节剂组合1.5mg·L~(-1)6-BA+0.6mg·L~(-1)?NAA,细胞生长曲线与多糖含量变化曲线均呈"S"形,细胞最佳继代周期16d,多糖含量在培养14d时最高,培养基pH呈先下降后上升然后趋于稳定趋势。     

文冠果成熟胚离体培养及细胞学研究

以文冠果成熟胚为外植体,进行了初代培养、继代培养和生根培养研究,结果表明:初代培养诱导文冠果成熟胚形成不定芽的适宜培养基是MS+2.0mg.L-16-BA+0.1mg.L-1NAA+30g.L-1蔗糖+6g.L-1琼脂,分化率可达94.7%;继代高生长的适宜培养基是MS+0.5mg.L-16-BA+0.5mg.L-1NAA+30g.L-1蔗糖+6g.L-1琼脂,培养50d后,苗高大于0.5cm芽数量平均达11.67株;生根培养的适宜培养基是WPM+1.0mg.L-1IBA+30g.L-1蔗糖+6g.L-1琼脂,生根率为70.30%,平均根数为3.57条。并通过石蜡切片技术,观察愈伤组织诱导、愈伤组织分化不定芽以及不定芽发育过程。     

红叶石楠愈伤组织抗褐化研究以及悬浮细胞系的建立

以红叶石楠无菌苗叶片为试材,诱导愈伤组织并建立悬浮细胞系。结果表明:红叶石楠愈伤组织初代诱导最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,诱导率可达97%。继代培养以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L为宜。针对红叶石楠愈伤组织继代培养过程中易褐化的问题,通过正交试验探讨了不同吸附剂、抗氧化剂及其它因素对褐化的影响。采用MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+Vc 1.0 mg/L+Ch 100 mg/L附加1%蔗糖的继代培养基,可以明显降低红叶石楠愈伤组织的褐化现象。将胚性愈伤组织接种到1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L附加2%蔗糖,pH 5.5液体培养基中悬浮震荡培养获得了分散性好、色泽鲜艳的悬浮细胞。     

宿根婆婆纳‘达尔文之蓝’的组培脱毒和快繁技术

将供试品种的带茎尖和腋芽的茎段,用70%酒精浸泡30 s,然后用20%的次氯酸钠溶液浸泡30 min,无菌水冲洗4次,消毒处理后剥取0.1~0.3 mm的茎尖,接种于以MS为基本培养基添加6-BA、IAA、NAA等外源激素的培养基中,研究了不同条件对愈伤组织诱导芽形成和芽继代增殖、生根和移栽效果的影响。结果表明,以MS为基本培养基,添加6-BA 1.0 mg·L-1和IAA0.5 mg·L-1为较适宜的外植体诱导愈伤组织和愈伤组织诱导芽的培养基。最佳继代增殖培养基为6-BA2.0 mg·L-1和NAA0.1 mg·L-1。最佳生根培养基为1/2MS添加NAA0.2 mg·L-1和IAA1.0 mg·L-1。25 d后,组培苗移栽成活率达到98%以上。     

圆齿野鸦椿叶片的植株再生及快速繁殖

以圆齿野鸦椿茎段继代繁殖或种子继代繁殖的幼嫩叶片为材料进行组培育苗试验,建立叶片植株再生和快速繁殖的技术体系.结果表明:叶片外植体在WPM+1.0 mg.L-1N6-异戊烯基腺嘌呤(2ip)+1.0 mg.L-1NAA+20 g.L-1蔗糖+7.5 g.L-1琼脂的培养基上形成黄绿色的愈伤组织,30 d后愈伤组织诱导率达95.7%;丛生芽的增殖系数随2ip和NAA含量的增加而加大,2ip含量为1.5 mg.L-1,NAA含量为0.3 mg.L-1时,增殖系数达3.5,WPM+2.0 mg.L-12ip+0.3 mg.L-1NAA+20 g.L-1蔗糖+7.5 g.L-1琼脂是最适的增殖培养基;不定芽在1/2WPM+0.5 mg.L-1IBA+0.3 mg.L-1NAA+20 g.L-1蔗糖+7.5 g.L-1琼脂的培养基上生根效果较好,再生植株移栽的成活率达90%以上.     

福建野生葡萄松散型愈伤组织的诱导及其继代保持

以福建野生葡萄(Vitis amurensis Rupr.)带节茎段为外植体,建立无菌株系,并以此无菌株系小苗的茎段或叶片为外植体,进行愈伤组织诱导、继代增殖和长期保持等方面的研究.结果表明,光照条件下,愈伤组织诱导以MS+BA 2.0 mg·L-1 +NAA 0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1培养基最佳,诱导率可达100％;愈伤组织的继代增殖以MS+2,4-D 1.0 mg·L-1+蔗糖30g· L-1培养基最佳,可以获得生长状态良好的松散型愈伤组织;采用MS+2,4-D 1.0 mg· L-1+蔗糖30 g· L-1培养基继代培养几代后转到MS+2,4-D 1.0 mg· L-1+KT 0.5 mg· L-1+AgNO35.0 mg· L-1+蔗糖30 g·L-1培养基上培养1代,如此交替进行,同时在光照条件下,可长期继代保持野生葡萄愈伤组织,并可保持其旺盛的生长能力.     

沙芥愈伤组织培养的初步研究

采用沙芥种子作为无菌外植体来源时,以0.1升汞消毒10～12min的效果较好.下胚轴和子叶均在MS+2,4-D 0.01 mg·L-1+NAA 2 mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1+3.0蔗糖+0.5琼脂(pH5.8)中可诱导出愈伤组织.愈伤组织的最佳继代培养基为MS+NAA 2mg·L-1+KT0.5 mg·L-1+3.0蔗糖+0.5琼脂(pH5.8).     

文冠果子叶同步胚的高效诱导及植株再生

以文冠果成熟种子的子叶为外植体,优化培养基配方,诱导收集胚性愈伤组织,建立了高效的同步胚液体培养扩增体系,同步胚转移到固体培养基上,实现了植株的高效再生,为文冠果转基因平台的建立打下了基础.结果表明,文冠果子叶外植体胚性愈伤组织诱导优化培养基为附加2,4-D 2.0 mg·L-1、NAA 1.0 ·L-1、6-BA 1.0 mg·L-1和3%的蔗糖的MS固体培养基,可产生大量胚性愈伤组织;胚性细胞系经继代和初步扩增后,在附加2,4-D 0.5 mg·L-1、NAA 0.5 mg·L-1、6-BA 0.5 mg·L-1和2%的蔗糖的B5液体培养基中增殖产生大量的同步球形胚;球形胚转入NAA 0.25 mg·L-1、6-BA 0.5 mg·L-1的B5固体培养基上,经心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚,再生成植株.