培养基渗透压对延缓生长的苹果组培苗生理代谢指标影响

以富士、乔纳金苹果试管苗为试材,研究了不同渗透压处理下苹果组培苗延缓生长以及恢复生长后SOD、POD活性和MDA含量的变化,以期为筛选苹果组培苗延缓生长种质保存的适宜方法提供依据。结果表明：在延缓生长保存期间,随培养基中蔗糖、琼脂浓度提高,添加甘露醇,试管苗SOD、POD活性逐渐升高,而MDA含量呈下降趋势,依品种不同分别在蔗糖浓度达到50～60g/L、琼脂浓度达到10～14g/L、甘露醇浓度达到30～40g/L时达显著差异水平。恢复生长当代试管苗的SOD活性、POD活性以及MDA含量处理间表现相同。研究认为添加50～60g/L的蔗糖适宜苹果试管苗延缓生长法种质保存。     

植物生长调节剂对苹果组培苗延缓生长保存的效应

以富士、乔纳金、金矮生、嘎拉组培苗为试材,在继代培养基中加入不同浓度的比久、矮壮素、多效唑及脱落酸,研究了植物生长延缓剂和生长抑制剂对苹果组培苗延缓生长种质保存的效应。结果表明：比久、矮壮素均有明显抑制苹果组培苗生长的作用,且茎尖存活率高,试管苗生长状况较好,转入常规继代培养基当代即可恢复生长,可用于苹果种质资源的离体保存,比久适宜的浓度为80mg/L,矮壮素为75mg/L左右;多效唑处理虽能明显抑制苹果试管苗生长,但易使有些品种试管苗玻璃化,可选择性应用;脱落酸作用过于剧烈,绝大部分处理苗死亡,不宜在苹果种质保存中使用。     

苹果培养茎尖超低温保存试验研究

对富士等苹果品种进行超低温保存试验研究,结果表明:苹果试管苗低温锻炼的适宜时间为35d。试管苗低温锻炼后,移入含2.5%二甲亚砜MS培养基培养4d,可以省略前处理。低温锻炼培养基中BA、蔗糖的适宜浓度分别为5×10~(-7)、3%。在低温锻炼培养基中添加ABA10×10~(-8)或20×10~(-6),试管苗锻炼的适宜温度相应提高到15、20℃。茎尖浸入前处理液处理18h效果最好,筛选出较理想的前处理液和冻结媒液。     

B_9、PP_(333)和ABA对芋头种质离体保存的影响研究

为延长芋头试管苗的保存时间,提高试管苗的成活率,以槟榔芋丛芽为试验材料,采用3种不同浓度的生长延缓剂和不同的温度和光照培养条件对芋头试管苗成活率的影响进行研究。结果表明,在常温(25±2)℃光照培养条件下,PP333、ABA和B9的最佳处理浓度分别为2.0、2.0、1.0 mg/L;在低温(5±1)℃光照培养条件下,PP333、ABA和B9的最佳处理浓度分别为1.0、1.0、0.5 mg/L;在低温(5±1)℃暗培养条件下,PP333、ABA和B9的最佳处理浓度为1.0、1.0、0.5 mg/L。与常温光照培养相比,低温光照培养的芋头试管苗成活率更高,生长延缓剂的最佳处理浓度也相对更低。与低温光照培养相比,低温暗培养的芋头试管苗的存活率相对更高,两者的处理浓度相同,但低温暗培养提高了芋头试管苗的存活率。通过离体保存的试管苗恢复生长后,长势旺盛,与对照株无明显差异,3种植物生长延缓剂均能有效提高芋头试管苗的成活率。     

草莓快速繁殖和种质试管苗的保存

本文描述了草莓快速繁殖和品种资源保存的组织培养技术。在加有不同细胞分裂素和生长素组合的MS培养基上培养小的离体茎尖。试验了培养基中6-苄氨基嘌呤(BA)、吲哚丁酸(IBA)对茎尖苗生长的影响,生长在含有0.5—1%甘露醇培养基中的试管苗在10℃、500Lx、每天光照8小时的条件下保存15个月,存活率80%以上。试验结果表明,降低温度、减弱光照是离体保存草莓品种资源的重要条件。     

掌叶半夏微茎尖培养脱毒和快繁体系的建立

研究了茎尖大小、激素浓度、培养基成分对药用植物掌叶半夏脱毒效果的影响以及影响无病毒苗快速繁殖的因素等,结果表明：茎尖大小是影响茎尖成活和脱毒效果的主要因素,0.2~0.5mm的茎尖培养在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L培养基上,成活率为53.3%,病毒脱除率为76.7%,培养基中附加247mg/L NH₄ ⁺可有效提高茎尖成活率至86.7%,同种培养基上继续培养,可一次性成功诱导形成试管苗,移栽成活率高达100%。MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+GA₃ 0.5mg/L组合最有利于试管茎的形成和发育,从而建立了以掌叶半夏微茎尖为外植体的脱毒和快速繁殖体系。     

树莓试管苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存

摘要：本试验对树莓茎尖包埋玻璃化法种质资源保存进行了研究,以期建立简单、高效的树莓种质资源超低温保存体系。试验以树莓试管苗茎尖为材料,探讨了不同因素对包埋玻璃化法超低温保存后成活率的影响。结果表明：长约1mm的树莓试管苗茎尖用海藻酸钙包埋后,采用分步预培养的方法,最后终止蔗糖浓度为0.9mol/L的MS培养基中进行预培养3d,再用含2M甘油和0.9M蔗糖的装载液处理90min, 在0℃下用PVS2处理180min后投入液氮中保存1h,在40℃下化冻3min,用含1M蔗糖的MS液体培养基洗涤20min,最后转到恢复培养基上,30d后在没有形成愈伤组织的情况下形成新的植株。以上的保存程序应用于6个树莓品种,成活率达87%。该结果为树莓种质资源的长期保存提供了理论依据。     

香石竹茎尖试管苗继代培养玻璃化现象的研究

香石竹红色品种茎尖试管苗继代培养玻璃化现象是香石竹脱毒试管苗生产的一个主要障碍。采用改善光照,在培养中提高糖和琼脂的浓度,降低细胞分裂素的用量,对克服香石竹茎尖试管苗继代培养玻璃化有明显效果,但对一些红色系品种效果并不理想,继代培养玻璃苗率仍达61%以上。     

银杏茎尖无菌接种条件的优化

本研究以银杏的茎尖为材料,对银杏的消毒条件、培养基蔗糖浓度、激素种类及浓度进行了分析比较,以探索银杏茎尖作为外植体的无菌接种最佳条件,为银杏的快速繁殖及资源保护提供基础。结果显示选择广安地区树龄约30年母树当年发出的侧芽带叶茎尖为外植体,70%酒精处理1.5 min,0.5%新洁尔灭处理15min是最佳的灭菌组合。以MS为基本培养基,添加激素0.3 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA,加入0.3%活性炭,调减蔗糖用量为0,琼脂9 g/L,在此条件下培养更能有效地抑制褐化现象,利于银杏茎尖的生长,且长势旺盛。以幼茎尖为外植体建立的无菌体系,为银杏的快速繁殖技术及新品种的培育等研究提供了理论依据。     

一种木薯种质资源离体保存方法的初步研究

为探讨木薯种质资源的离体保存方法,以木薯试管苗为主要材料,观测试管苗成活率、株高生长变化及茎秆变化情况,探索卡那培养基与常规培养基对木薯种质资源离体保存的效果。结果表明：在培养室温度25±2℃、光照强度3000 lx、光周期16 h/8 h的环境下,木薯品种‘华南8号’(SC8)试管苗在卡那培养基（MS+0.2 mg/L NAA +80 mg/L Kan +30 g/L蔗糖+9 g/L琼脂）保存时间为22~24个月,是常规培养基试管苗保存时间的10~12倍,且在卡那霉素培养基中生长的试管苗根系较发达、节间显著缩短、茎节数显著增加、茎秆明显增粗、叶色浓绿,温室移栽存活率超过了90%,是常规培养基的5~8倍。该保存方法有效延长了木薯种质资源的离体保存时间,既增强了种苗移载成活率和保存质量,又显著地节约了木薯种质资源保存过程中耗费的人力劳动、试剂药品、水电能源等成本。     

‘洛阳红’牡丹组织培养快速繁殖技术研究

以‘洛阳红’牡丹组培苗为试材,探讨了不同基本培养基、激素配比、培养条件、抗褐化物质对‘洛阳红’牡丹继代苗增殖生长、生根及褐化的影响。结果表明：DKW基本培养基适宜‘洛阳红’牡丹继代增殖;培养基中附加2.0～3.0mg/L BA与0.5mg/L IAA或0.05mg/L NAA配比有利于继代苗分化、生长,而附加玉米素ZT效果不佳;20～25℃对‘洛阳红’继代苗增殖影响不大,30℃下试管苗很快老化、枯死,不宜采用;1/2MS附加0.2mg/L NAA或2.0mg/L IAA与2.0mg/L IBA配比可促进‘洛阳红’牡丹试管苗不定根诱导;继代和生根培养基中附加0.5g/L PVP可有效减轻‘洛阳红’牡丹组培苗褐变,促进继代苗分化、生长,但对生根没有明显影响。     

葡萄叶盘法基因转化中抗生素种类和浓度的筛选

本研究以优良无核葡萄品种莫利莎葡萄试管苗为试材,研究了卡那霉素（Kan）、潮霉素（Hyg）对葡萄继代苗生长和离体叶片再生的影响,以确定叶盘法基因转化的选择压和转化体的筛选浓度;同时研究了不同浓度的头孢霉素（Cef）和羧苄青霉素（Carb）对葡萄离体叶片再生的影响,以确定侵菌共培养后合适的抑菌抗生素种类和浓度。试验结果表明葡萄继代苗对Hyg的敏感性强于Kan,葡萄遗传转化更适合使用潮霉素磷酸转移酶基因作为选择标记。Hyg 3.0mg/L即达到继代苗致死浓度,可作为转化后抗性苗的筛选浓度,Hyg 0.8mg/L完全抑制叶片不定芽的分化,可作为叶盘法转化时抗性芽的选择压。葡萄叶盘法基因转化中抑制农杆菌生长的抗生素可选用Cef 300mg/L或Carb 400mg/L,但对不定芽的分化有抑制作用。     

苹果茎尖组培苗继代保存多年后繁殖特性研究

为解决种质离体保存的适宜年限等实用性问题,需了解多年继代保存的组培苗繁殖能力有无变化。本试验对继代保存不同年限的 ‘金冠’、‘乔纳金’和‘嘎拉’、‘富士’茎尖组培苗进行继代增殖能力、不定根诱导和离体叶片不定芽再生能力的研究。结果表明：外植体接种初期4年以内,即继代次数为24或40代时,‘富士’、‘金冠’、‘乔纳金’的新梢增殖能力较低,‘嘠拉’生根率较低,‘金冠’、‘富士’、‘嘠拉’离体叶片再生率较低,随着培养时间延长,继代次数增加,以上品种的继代增殖效率、生根能力及离体叶片再生能力均稳定在较高水平。长期继代保存的苹果品种茎尖组培苗（‘富士’已保存25年,‘金冠’、‘乔纳金’19年,‘嘠拉’10年）仍保持其器官再生能力。     

苹果叶盘法基因转化中抗生素种类和浓度的筛选

以苹果品种嘠拉试管苗为试材，研究了卡那霉素（Km）、潮霉素（Hm）对继代苗生长和离体叶片再生的影响，以确定叶盘法基因转化的选择压和转化体的筛选浓度以确定苹果叶盘法基因转化中的选择压和抗性芽的筛选浓度；同时研究了不同浓度的头孢霉素（Cef）和羧苄青霉素（Carb）对苹果离体叶片再生的影响及对农杆菌EHA105和LBA4404的抑菌效果，以确定苹果叶盘法基因转化中合适的抑菌抗生素种类和浓度；以确定侵菌共培养后合适的抑菌抗生素种类和浓度。。结果证明表明：Km卡那霉素10mg/L、Hm4.0 mg/L完全抑制了叶片不定芽的分化，可作为苹果叶盘法转化时抗性芽的选择压； 在Km 50mg/L、Hm5.0 mg/L达到继代苗的半致死浓度，可作为基因转化后抗性芽苗的筛选浓度，10mg/L时完全抑制供试叶片不定芽的分化。；由于抗性芽再生的选择压与抗性苗筛选浓度相差较小，Hm相对于Km更适合作为苹果基因转化的选择标记；培养基中附加潮霉素的浓度为5mg/l继代苗不再分化生长，作为基因转化后抗性芽的筛选浓度，2.0mg/L时完全抑制供试叶片不定芽的再生，作为基因转化后抗性芽的筛选浓度。头孢青霉素在Cef 300mg/L时就能完全抑制农杆菌生长，对叶片不定芽的再生影响不大；而附加Carb羧苄青霉素则需400mg/L以上时才能抑制农杆菌LBA4404的生长，同时严重抑制了叶片再生。因此，宜选用Cef作为苹果基因转化的抑菌抗生素。     

提高培养温度建立水稻成熟胚再生体系

为了探索在较高温度环境中,以水稻成熟胚为外植体进行组织培养,是否能够提高水稻再生效率,本试验以"超2-10"和"中花11"两种粳型水稻为材料,设置了26℃和36℃温度环境,对两种水稻成熟胚进行愈伤组织诱导和继代培养,并完成整个再生过程.结果表明,36℃温度环境不会影响"超2-10"和"中花11"水稻成熟胚愈伤组织的诱导;尽管两种水稻在36℃环境生长的愈伤组织在继代培养中重量增幅低于26℃的愈伤组织,而且36℃环境培养的愈伤组织分化率也低于26℃的愈伤组织,但是,36℃诱导和继代培养的"超2-10"和"中花11"两种水稻愈伤组织再生率都高于26℃环境培养的愈伤组织,两种水稻的再生率分别提高105.15%和57.28%.     

温度、光照及继代周期等对‘金叶’复叶槭组培苗生长的影响

本文研究了温度、继代周期、光照时间和光照强度等培养条件对金叶复叶槭组培苗根、叶及苗高生长的影响,结果表明:温度、继代周期、光照条件对苗高影响较大,差异均达到显著水平;同时发现继代周期显著影响叶片数量、光照时间对根生长系数影响差异达到极显著水平。筛选出在30℃、4200Lx的光照强度下,16h/d光照时间、继代周期35d为金叶复叶槭最佳培养条件。     

霍山石斛试管丛生芽增殖影响因素的探讨

为了更好地保护霍山石斛野生资源,变野生为家种。本试验以霍山石斛试管丛生芽为试验材料,采用3因素3水平L9（33）正交设计方案,考察BA、NAA、KT不同激素及浓度对霍山石斛试管丛生芽继代增殖的影响。试验结果表明：植物激素BA、NAA、KT对霍山石斛试管丛生芽的增殖均有一定影响,其中NAA及KT的影响更为明显,并通过SAS软件统计分析确定三种植物激素的最佳浓度配比分别为：BA 1.5 mg/L,NAA 1.0 mg/L,KT 1.0 mg/L,即霍山石斛试管丛生芽继代增殖的最佳培养基配方为：MS+BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+食糖30.0 g/L+琼脂 8.0 g/L。     

药用植物白及组培苗瓶内复壮研究

对白及(Bletilla striata)试管苗进行复壮研究,以期解决其羸弱纤细、不利于生根培养及生根后成活率低等问题,同时优化复壮培养条件。在课题组已有的白及增殖及生根培养基配方中,分别添加不同质量浓度植物生长延缓剂多效唑(PP₃₃₃)和矮壮素(CCC)并改变培养基碳源浓度,以不同继代试管苗为材料,通过单因素和L₉(3⁴)正交实验研究不同材料和不同植物生长延缓剂种类及其质量浓度对试管苗复壮、繁殖生长、生根培养及驯化移栽的影响。实验表明,4代苗在MS+活性炭1.0 g/L+香蕉泥50 g/L+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.01 mg/L+ PP₃₃₃ 0.5 mg/L+CCC 0.1 mg/L+蔗糖40 g/L中获得最佳的复壮效果,培养70天后,试管苗基茎直径平均达(0.26±0.06) cm,繁殖系数2.13,假鳞茎发生率100%;复壮后的试管苗在1/2MS+活性炭1.0 g/L+香蕉泥80 g/L+ 6-BA 0.1 mg/L+ NAA 1.0 mg/L+蔗糖15 g/L中培养60天后,可获得具假鳞茎、根粗苗壮的再生植株,生根率100%;再生苗移栽成活率亦达100%。本研究完善了白及体外快繁及复壮条件,建立了高效的植株再生体系。     

红叶乌桕组织培养技术研究

为了实现红叶乌桕优良种源和变异个体的种质保存和快速繁殖,以带腋芽茎段、茎尖、叶片为外植体,进行了红叶乌桕的组织培养技术研究。结果表明：6月中旬取半木质化茎段,用0.1%HgCl2灭菌5min,外植体接种成功率达79.5%;MS+KT0.5mg/L+IBA0.5 mg/L培养基适于试管苗继代增殖,20~25d继代一次长势良好;试管苗在MS+IBA0.5mg/L+KT(0.5~1.0)mg/L和1/2MS+IBA (0.1~0.5)mg/L培养基中生根效果较好,生根率在91.14%以上,平均主根数为6.49~13.03条/株。