山羊瘤胃中固氮细菌的分离与初步鉴定

通过瘤胄瘘管采集山羊瘤胃液,分离瘤胃优势菌,并在不同气体环境（纯N2、纯CO2、氢气或空气）下应用无氮培养基培养,考察瘤胃优势菌对氮气的利用情况,并初步进行了微生物学鉴定。结果表明,纯N2条件下,菌株YUAN63和菌株YUAN100在无氮培养基上能生长,与空气条件下相当,但在CO2条件下未有可见菌落,在氢气条件下仅有少数小菌落。研究结果说明了瘤胃细菌中存在一类能利用氮气的细菌,但仍需进一步确定。     

规模化奶牛养殖场空气中可培养微生物的研究

为了了解唐山地区规模化奶牛养殖场空气中微生多样性及种群分布情况,试验采用自然沉降法采集唐山市郊某规模化牧场榨乳间(NT)、贮奶厅(M)和奶牛运动场(YDC)3个不同场所的空气微生物样本并进行纯培养,分离其中的细菌和真菌,运用16S rRNA基因测序鉴定纯培养物的种属,根据菌株形态和鉴定结果选取代表菌株进行种群分布与多样性研究。结果表明:榨乳间共纯培养出26株菌,运动场共纯培养出17株菌,贮奶厅共纯培养出13株菌;榨乳间的NA培养基上的菌落总数明显多于运动场,运动场的菌落总数明显多于贮奶厅,推测可能与采样时间、场所通风、卫生情况有关。其他培养基上的菌落总数在3个不同空间也有差异。56株代表菌株分别归属于18个属,榨乳间空气样本微生物种类最为丰富,分离到包含多种芽孢杆菌、葡萄球菌和曲霉菌等10个属21种微生物;贮奶厅有8个属12种微生物;运动场筛选到10个属16种微生物。芽孢杆菌属、葡萄球菌属和曲霉菌属为3个场所的优势菌属,但不同场所条件致病菌群也存在一定的差异性。说明奶牛养殖场空气微生物种类丰富,存在的条件致病菌对人和动物有潜在健康风险。     

规模化奶牛场空气细菌数量与乳房炎发生的相关性调查

本试验采用自然沉降法对规模化奶牛场泌乳奶牛舍进行空气细菌含量检测,同时对空气中细菌和乳房炎奶牛乳汁中细菌进行分离鉴定。结果表明,不同牧场不同培养基的细菌菌落总数均不同,在NA培养基上,细菌菌落总数B场10.97×10~3 cfu/m~3C场10.17×10~3 efu/m~3A场8.78×10~3 cfu/m~3;运动场细菌菌落总数少于牛舍内。3个牧场奶牛乳房炎的发病率分别是B场32.14%C场的30.91%A场29.25%,空气中的细菌菌落总数与奶牛乳房炎的发病率呈正相关。从3个牧场牛舍空气样本中分离到221个菌株,有金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、沙门菌、停乳链球菌、无乳链球菌和肺炎链球菌等主要病原菌。A、B牧场主要是葡萄球菌,占分离菌的75.34%和60.61%。其中金黄色葡萄球菌分别占45.21%和22.73%。C牧场牛舍空气中主要是肠杆菌,占分离菌的51.23%,其中大肠埃希菌占31.70%。3个牧场乳房炎奶牛乳汁中所检测到的主要病原菌分别是:A、B牧场主要是葡萄球菌,占分离菌的48%和57.96%,其中金黄色葡萄球菌分别占24%和23.8%;C牧场主要是肠杆菌,占分离菌的50%,其中大肠埃希菌占18.8%,沙门菌占9.09%。奶牛场空气中主要病原菌的种类和乳房炎奶牛乳汁中主要病原菌的种类基本一致。     

一株犬种布鲁氏菌的分离鉴定及其在巨噬细胞内存活能力的研究

为分离鉴定流产犬的致病病原及其生物学特性，本研究从重庆某宠物医院无菌采集流产犬全血2份，将其涂布于布鲁氏菌选择培养基，分别在不含CO2和含7.5%CO2条件下37℃培养72 h，观察菌落形态，并经结晶紫染色，观察细菌类型。按照国家标准鉴定分离菌的生化特性。细菌分离结果显示，在不含CO2和含7.5%CO2的培养箱中2份流产犬全血样品在布鲁氏菌选择培养基上均长出边缘整齐、光滑的圆形菌落，透射光下，菌落呈浅黄色且有光泽；结晶紫染色结果显示分离菌为典型的粗糙型细菌；生化鉴定结果显示，分离株在TSA中的生长不依赖于CO2，且不产生H2S，氧化酶和脲酶试验均为强阳性。上述结果表明分离到一株犬种布鲁氏菌，命名为B. canis CQ3。对分离菌进行全基因组测序，利用MAUVE对分离株与GenBank中38株不同种的布鲁氏菌基因组进行比对，并构建分离菌全基因组的进化树。将不同种布鲁氏菌及分离株分别接种于TSB培养基中，通过测定不同时间的OD450nm值绘制各菌株的生长曲线。将各菌株及B. canis CQ3株分别以MOI 100感染小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7，在感染后的不同时间(1 h、24 h...     

不同乳牛舍环境空气中细菌含量的比较研究

采用自然沉降法对南京3个规模化奶牛场和3个奶牛小区泌乳奶牛舍内细菌含量进行监测和比较。结果显示,牛舍环境空气中的细菌菌落总数,不同的牛舍不同采样点、不同的培养基其结果均不相同。运动场细菌菌落总数少于牛舍内。NA培养基菌落数最高达33.81×103 CFU/m3,MAC和S.S培养基在多个分布点无细菌生长。6个牧场空气中的细菌菌落总数为F场＞E场＞B场＞C场＞A场＞D场。牛舍的空气细菌总数与牛舍规模化程度无关,而与各牧场牛舍卫生管理有很大的相关性。从270个样本中共分离到338株细菌,A、B牧场主要是葡萄球菌,分别占分离菌的75.34%（55/73）和60.61%（40/66）;C、E、F牧场主要是肠杆菌,分别占分离菌的51.22%（42/82）、62.16%（23/37）、61.11%（33/54）;D牧场葡萄球菌占分离菌的46.15%（12/26）,肠杆菌和链球菌分别占26.92%（7/26）。结果表明,规模化奶牛场和奶牛小区空气细菌总数无明显差异。     

硝化细菌的分离鉴定

应用硝化细菌选择性培养基,从南京的土壤和水体中筛选到6株硝化细菌,包括3株亚硝化菌和3株硝化菌,对其生理生化特性、温度敏感性、耐盐性、抗生素抗性、及硝化能力等生物学特性进行了测定。结果表明,6株细菌均为G-,菌体杆状或球状。生长缓慢,培养120 h以后才进入对数生长期,5 d左右形成菌落。最适生长温度为25~30℃。耐受偏碱环境。不耐盐,6株菌都能耐受的盐浓度范围是0.05%~0.3%。通气量对该菌的生长没有太大影响。6株菌株对不同的抗生素具有抗性。其中,菌株J2的抗药谱最窄,只抗卡那霉素。6株菌只能在以碳酸钠或者碳酸氢钠为唯一碳源、以硫酸铵或者亚硝酸盐为唯一氮源的培养基上生长良好。菌株硝化能力不同,其中菌株J2硝化能力较强,在基础培养基中200 h,该菌转化NO2-42%左右,可以作为降解鱼塘中和饲料中亚硝酸盐的硝化菌候选株。     

瘤胃内微生物对饲料蛋白质消化的探析

1饲料蛋白质被瘤胃微生物降解瘤胃中有很多细菌能分泌蛋白酶,具有降解蛋白质的能力。最熟知的有嗜淀粉拟杆菌、溶纤维丁酸弧菌和栖瘤胃普雷沃氏菌这3种细菌。瘤胃真菌也具有分解蛋白质的能力。瘤胃厌氧性真菌菌株都可产生金属蛋白酶,N.frontalis可产生相当于细菌产生的高活性蛋白酶。     

饲喂热带牧草和酪蛋白补充剂的内洛尔阉牛瘤胃中碳水化合物发酵菌及专性氨基酸发酵超产氨菌的生化及遗传多样性分析

日粮蛋白质在反刍动物营养中起着重要作用,对反刍动物补充蛋白质是在热带地区农民的普遍做法。瘤胃细菌是蛋白质和氨基酸降解的主要作用者,但很少有研究关注饲喂热带日粮或补充瘤胃降解蛋白的动物瘤胃内超产氨菌的分离鉴定。本试验研究了添加或不添加酪蛋白补充剂饲喂热带牧草的内洛尔阉牛的瘤胃细菌群落多样性。文章还对高产氨瘤胃细菌进行了分离鉴定。聚合酶链式反应—变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析结果表明对照组和酪蛋白补充组动物的瘤胃细菌群落组成无差异。用胰蛋白胨作为唯一碳源和有机氮源的富集和分离培养基,从饲喂Tifton 85(狗牙根属种)的杂交内洛尔阉牛体内分离出氨基酸发酵菌(n=250)。从补充酪蛋白的阉牛体内分离出的菌株脱氨率较高,NH3350nmol/(mg·min)(P0.05),而从未补充酪蛋白的阉牛体内分离出的脱氨率为NH3200nmol/(mg·min)。虽然大多数菌株(84%)可发酵碳水化合物,但所有菌株均不能水解蛋白质或用尿素维持增长。所有菌株均对拉沙里菌素、莫能菌素敏感。16SrRNA序列的相似性分析结果表明,优势细菌属于梭菌目(Clostridiales),与已知细菌种类的同源性为73%~99%。本试验结果拓展了关于超产氨菌的生化和遗传多样性的认识,并强调碳水化合物发酵细菌在瘤胃产氨过程中的作用。     

桑树根际解磷细菌的分离鉴定及解磷能力测定

桑树根际解磷细菌能够改善桑树营养,促进根系生长。利用选择性培养基,从桑树根际分离获得32个具有解磷能力的细菌分离物,经rep-PCR基因指纹分析得到19株解磷细菌。经解磷能力测定,PYP2、PYP4、PYP6、FYP2菌株具有较强的解有机磷能力,FWP7、PWP4菌株具有较强的解无机磷能力,FWP1、FWP9、FWP11、PYP6和PWP1菌株的解有机磷和无机磷能力均较强。利用菌落形态特征观察及16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,对具有较高解磷能力的菌株进行了鉴定:FWP1、FWP11、PYP2、PYP6、FYP2菌株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),FWP9和PWP1菌株为贪噬菌属(Variovorax sp.),FWP7、PWP4菌株为根瘤菌属(Rhizobium sp.)。     

乳牛舍内环境空气中细菌数量与乳房炎的关系研究

采用自然沉降法对规模化泌乳奶牛舍内消毒前后空气细菌含量进行检测,同时对泌乳牛群进行乳房炎调查,对乳房炎奶牛乳汁中病原菌分离鉴定。结果表明,不同的牛舍不同的培养基其结果均不相同,NA培养基菌落数最高达77.8×103cfu/m3,S.S培养基在多个分布点无细菌生长。牛舍经过消毒后环境空气中的细菌总数大幅度减少,运动场空气细菌总数明显低于舍内。奶牛乳房炎的发生率与牛舍环境空气中的细菌总数呈正相关,细菌总数多的牛舍奶牛乳房炎的发病率也高。环境空气中和乳房炎奶牛乳汁中同时分离到金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌等。     

Use of bean husk as an easily digestible fiber source for activating the fibrolytic rumen bacterium Fibrobacter succinogenes and rice straw digestion

A series of in sacco and in vitro studies were carried out to evaluate bean husks for activation of fibrolytic rumen bacteria and rice straw digestion. First, lablab bean husk, chickpea husk and rice straw were suspended in the rumen of sheep to analyze the bacterial consortium developed on each fiber source. Known members of fiber‐associating bacteria were found on both lablab bean husk and rice straw, but some of these bacteria were lacking on chickpea husk. Second, a pure culture study was carried out using six strains of Fibrobacter succinogenes. Both husks stimulated the growth of all tested strains, including a strain that did not grow on rice straw. The strain OS128 that showed the highest growth on rice straw displayed even higher growth on lablab bean husk without a time lag. Finally, two‐step incubations were carried out to determine whether prior incubation of rumen fluid with husks stimulates subsequent rice straw digestion. Higher digestibility of rice straw was recorded in the second‐round incubation following the first incubation with bean husks. These results suggest that the tested bean husks improve the digestion of rice straw by activating fibrolytic F. succinogenes and other associated bacteria.     

绵羊瘤胃液中固氮菌的分离及其特性的研究

由两头绵羊的瘤胃液中分离到三株具有固氮能力的细菌,可于无氮培养基中生长繁殖,其中一株为需氧固氮,固氮能力较强,另两株为厌氧固氮,固氮能力较弱,鉴于它们在瘤胃液中存在数量较多,认为是绵羊瘤胃中一个正常的菌群,从而为瘤胃菌群增加了一个新的类群,并进行了生化鉴定及生长特性的研究。     

不同瘤胃细菌培养物添加水平对奶牛瘤胃发酵及BCP含量的影响

本文旨在研究不同剂量的瘤胃细菌培养物对荷斯坦奶牛瘤胃发酵及菌体蛋白(BCP)含量的影响。试验采用单因素试验设计,选用4头装有永久性瘤胃瘘管,体况相近的荷斯坦奶牛,取其瘤胃液混匀,添加不同剂量的瘤胃细菌培养物进行体外培养,分别为:对照组(0 CUF/g),试验Ⅰ组(添加量为3%,4.4×108CUF/g),试验Ⅱ组(添加量为5%,7.8×108CUF/g),试验Ⅲ组(添加量为10%,1.2×109CUF/g),每组分别设2、4、8、12、24、36、48 h 7个指标测定时间点,每个时间点3个重复。结果表明:(1)添加瘤胃细菌培养物使瘤胃液pH有所降低,但始终在6.5～7.0,对瘤胃内环境无不良影响;(2)添加3%的瘤胃细菌培养物显著降低氨态氮(NH3-N)的含量(P<0.05),显著增加了培养液BCP的浓度(P<0.05);(3)添加3%的瘤胃细菌培养物可一定程度增加总挥发性脂肪酸(TVFA)和乙酸浓度,但对其他各挥发性脂肪酸及乙酸/丙酸比值无显著影响。由此可见,添加3%剂量的瘤胃细菌培养物可改变瘤胃的发酵环境,提高BCP浓度。     

高精料日粮下硫胺素对体外培养荷斯坦牛瘤胃微生物消化代谢的影响

本试验旨在揭示高精料日粮条件下硫胺素对体外培养荷斯坦牛瘤胃微生物消化代谢的影响。以2头安装永久性瘤胃瘘管的荷斯坦牛为试验动物,设置精粗比为6：4的底物,硫胺素的添加量设为0、60、120、180和240mg／kg5个水平,采用人工瘤胃体外发酵方法研究硫胺素对瘤胃微生物发酵的影响。试验结果表明．（1）高精料日粮条件下添加硫胺素可以提高培养液的pH值;（2）高精料日粮条件下NH3-N浓度随着硫胺素添加水平的提高而降低;（3）高精料日粮条件下硫胺素提高了细菌蛋白的产量而降低了原虫蛋白的产量。     

1株牦牛瘤胃源无色杆菌的鉴定及生物学特性评价

【目的】对分离得到的1株牦牛瘤胃源菌株进行鉴定和生物学特性分析,开发新型动物源益生菌。【方法】通过显微镜和菌落观察试验菌株的形态学特征,采用VITEK2微生物生化自动鉴定仪鉴定其生化特性,并对其16S rDNA进行PCR扩增、相似性比对和遗传进化树构建。进一步对其生长性能、产酸能力、自凝聚、疏水性、溶血性和耐药性、耐酸耐胆盐及胃肠环境适应性等生物学特性进行研究。【结果】试验菌株经过形态学、分子鉴定和16S rDNA扩增鉴定为无色杆菌（Achromobacter）,命名为无色杆菌YKS2。该菌株2 h进入对数生长期,持续增长至20 h后开始出现平台期并缓慢下降。发酵48 h后pH未降低,说明该菌株不具产酸性能;自凝聚力为28.7%,表面疏水性在氯仿中达到77.1%,其他溶剂均>60.0%,平均达到60%以上,表明细菌有一定的黏附能力;在血琼脂平板培养48 h后未出现溶血环;通过K-B法测试了对14种抗生素的敏感性,发现其对常见的12种抗生素敏感;在pH 2.0的培养基中不能存活,在pH 4.0的培养基中存活率为61.4%;对0.1%和0.3%胆盐培养基有较高的耐受;在人工胃液重悬后培养3 h的细菌存活率为78.18%,在人工肠液中处理4、8 h后,与对照组相比,菌落数极显著增长（P<0.05）,说明YKS2菌株能够耐受一定程度的人工肠液。【结论】牦牛瘤胃源YKS2菌株为肠杆菌科无色杆菌亚种,无溶血、产酸及耐强酸特性,非耐药菌株,增殖性能较好,具有耐胆盐、耐胃肠液、自凝聚及表面疏水特性,可作为一种候选益生菌菌株进行进一步的评价和研究。     

规模化养鸡场鸡舍内空气和饮水细菌含量检测

采用自然沉降法对现代化鸡舍内空气细菌含量进行检测,并对不同日龄鸡舍内外水质进行测定。结果显示：肉鸡饲养中期鸡舍内空气细菌含量明显高于生长前期和后期。带鸡消毒可以显著降低鸡舍内空气细菌含量;不同日龄鸡舍水质变化不大,饮水中细菌总数均较高,经过消毒处理后,饮水中细菌总数显著降低,与未消毒前比较,差异极显著（P〈0.01）。     

山竹岩黄芪青贮中优质乳酸菌的分离和鉴定

从山竹岩黄芪(Hedysarum fruticosum Pall.)青贮饲料中分离到3株乳酸菌(HF84,HF69,HF49)。经传统鉴定方法及16SrRNA序列分析,菌株HF84为蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii),菌株HF69为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.Lactis),菌株HF49为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。3株乳酸菌均为同型发酵乳酸菌,蒙氏肠球菌在pH 3.0条件下不能生长,乳酸乳球菌乳酸亚种在pH 3.0、温度5℃时及6.5%NaCl溶液中不能生长,植物乳杆菌均可在试验设定条件下生长。通过测定3株乳酸菌的生长曲线和产酸速率,菌株HF49生长速度快、产酸性能好,可作为制备乳酸菌青贮饲料添加剂的优良菌株。     

Elution of bacteria adhering to the epithelium in the rumen in sheep and their detection using electron microscopy

A method of preparing the pure concentrate of epithelium-adherent bacteria in sheep rumen was worked out and it was tested in 24 samples of the rumen wall, obtained from 12 slaughtered sheep. The purity of the bacterial eluate was checked by transmission electron microscopy and negative staining, followed by electron-microscopic evaluation. Besides bacterial cells no residues of feed, epithelium and other undesirable impurities were found out in the eluate. The percent yield of this method was determined by scanning electron microscopy and it made 93.3%. An isolated pure concentrate of the mixture of bacterial cultures, previously adhered to the rumen epithelium, was prepared which can be used for morphological and biochemical studies of this interesting group of rumen bacteria.     

菊芋内生固氮菌分离、鉴定及特性研究

通过气相色谱,结合乙炔还原法,对菊芋根系的内生固氮菌进行了分离和鉴定。结果表明,筛选得到的7株具有固氮酶活性的菌株,分别属于根瘤菌属,寡养单胞菌属,假单胞菌属和肠杆菌属。菌株之间固氮酶活性相差较大,固氮酶活性较高的菌株较少,100 nmol/(mL·h)以上的只有cho1和cho9两株菌。菌株cho4的耐盐性较高,可以在盐浓度为7%的条件下正常生长。分离得到的菌株中,有5株具有解磷活性,其中以菌株cho7的活性最高,为63.84 μg/mL。菌株全部都具有分泌生长素的能力,但差异较大,分泌IAA浓度最高的是cho2,达到13.49 μg/mL。     

The characteristics and regulation of glutamate dehydrogenase in strains of Bacteroides ruminicola ssp. ruminicola isolated from the rumen of fallow deer]

Very little information about NH4+ assimilation paths in rumen anaerobic bacteria is available, and the information about wild animals is completely missing. Glutamate dehydrogenase (GDH) isolated from the rumen strain B. ruminicola in fallow deer was purified and its properties were specified after crystalline ammonium sulphate precipitation and gel filtration on Sephadex G-200. The properties of partly purified GDH were specified. One of the first specifications concerning GDH from various sources was to determine its coenzyme specificity. The results of these determinations enabled to draw a general conclusion that GDH from non-animal sources was specific to only one coenzyme while GDH from animal sources could utilize the two coenzymes (Frieden, 1964). In our study the specificity of GDH isolated from the rumen strain B. ruminicola in fallow deer to the coenzyme NADH (Tab. I) was determined; this specificity was different from the coenzyme specificity of GDH isolated from the rumen strain B. ruminicola in calves where GDH was found to be specific to the coenzyme NADPH. The effect of increasing concentrations of NADH, 2-oxoglutarate and NH4+ on the enzyme reaction velocity was also investigated and Km was determined for NADH, 2-oxoglutarate and NH4+ (Tab. II). The kinetic properties of GDH isolated from different sources are considerably variable. Michaelis constants for GDH range from 0.003 to 0.125 mmol/dm3 for NADPH (NADH), from 0.95 to 7.4 mmol/dm3 for 2-oxoglutarate, and from 0.25 to 16 mmol/dm3 for NH4+ (Misono et al., 1985). The average value of Km for NH4+ in a mixed rumen population was 33 mmol/dm3 (Erfle et al., 1977).(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)