枇杷花药胚状体成苗条件的优化

以‘大五星’枇杷花药培养获得的子叶胚为材料,研究基本培养基、蔗糖浓度、4℃低温处理、饱和CaCl2脱水处理、"4℃低温+饱和CaCl2脱水"处理对胚状体成苗的影响,并优化枇杷花药培养及植株再生技术体系。结果表明:枇杷花药胚状体经"4℃低温+饱和CaCl2脱水"预处理7 d效果最佳;将预处理后的胚状体种于萌发培养基1/2MS+3%蔗糖,胚状体成苗率最高,为78.2%;将再生植株移栽入配比为腐熟有机肥∶园土∶锯末=1∶2∶1的基质中时,组培苗移栽成活率达85.25%。     

橡胶树花药愈伤组织继代培养与胚状体发生能力研究

利用橡胶树花药愈伤组织进行继代培养与胚状体诱导,结果表明,在诱导愈伤组织、继代培养和分化胚状体中MS培养基稍优于改良MS培养基;以继代1代的愈伤组织胚状体的诱导率最高,分别达到70．8％和67．5％;在继代0代、2代和3代之间差异达到极显著,在继代4代时差异达到显著,其他继代次数之间差异不显著。在继代8代后,两种培养基的诱导率逐渐升高,分别达到44．6％和35．3％。     

温度对甘蓝型油菜花粉胚状体的诱导及其类型的影响

为了提高甘蓝型油菜(Brassica napus L.)花粉胚状体的诱导频率,进行了花药接种前的低温处理和接种后的高温处理,试验采用了五种不同温度的分段培养,对比了变温处理的效应。结果表明:不同基因型油菜花药培养,对变温处理的反应有差异;低、高温处理花药,对胚状体的类型有明显的影响;根据胚状体的形状和大小不同可分为五类,它们的再生植株能力不同。变温处理可以提高甘蓝型油菜花粉胚状体诱导频率和正常胚比率。     

通过继代培养提高橡胶树体胚诱导频率的研究

橡胶树体胚诱导频率低、正常胚状体比例低是影响橡胶树花药培养的重要限制因子。组织切片结果显示:50 d的愈伤组织生长期实际上应划分为2个阶段:0~30 d为愈伤诱导阶段,30~50 d为胚性表达和愈伤增殖阶段,因此本试验以30 d的橡胶树花药愈伤组织为材料,通过继代培养基的正交筛选,探索通过继代培养提高橡胶树体胚分化频率的途径。试验结果显示:橡胶树初代花药愈伤组织经过优化后的继代培养基继代培养1次后,分化的胚状体是不继代培养分化胚状体数量的4.29倍,而其中正常胚状体的数量是不继代的2.4倍。继代培养基包含4种激素,以6-BA的影响最大,其次为KT。优化的愈伤继代培养基为改良MS培养基添加6-BA0.1 mg/L+KT 0.3 mg/L+3,4-D 0.3 mg/L+ABA 0.013 mg/L。与传统橡胶树花药再生体系相比,本试验增加了愈伤组织继代这一程序,并摸索了适宜的继代培养基配方,使花药再生体系更加符合实际花药培养发育的过程,以提高橡胶树胚状体分化频率,促进橡胶树体胚苗产业的发展。     

成熟胚愈伤诱导及再生条件优化

采用三因素随机区组设计,研究不同基因型、培养基种类及2,4-D处理浓度对成熟胚愈伤诱导率的影响。结果表明,影响玉米成熟胚胚性愈伤组织诱导的主要因素是基因型,且基因型、培养基和2,4-D处理对岀愈率影响效果差异达到显著或极显著水平,除初级愈伤三因素互作不显著外,任意两因素或三因素之间的互作效应显著。丹988的最佳培养组合为MN+2,4-2mg/L;铁7922最佳培养组合为MS+2,4-D 2mg/L。添加1mg/L的KT有利于愈伤组织分化。     

不同燕麦种成熟胚诱导条件的优化

选用3个燕麦种,利用混合正交设计方法研究成熟胚形成愈伤组织特性和筛选最佳培养条件,结果表明：接种前种子处理时间与种子大小没有相关性,六倍体燕科1号需21h,二倍体裸燕麦需20h,四倍体大燕麦需18h;综合分析愈伤组织出愈特性、生长状态和生长速度等,3个燕麦种培养难易程度燕科1号、大燕麦、裸燕麦;MS＋2,4-D4mg／L＋NAA 1mg／L＋蔗糖30g／L是燕科1号成熟胚诱导的最佳培养条件,2,4-D5mg／L4-NAA2mg／L4-CH 400 mg／L＋Pro500mg／L4-蔗糖30g／L是大燕麦适宜的培养条件,裸燕麦对应是2,4-D1mg／L4-NAA 1mg／L＋CH 200 mg／L＋Pro 500 mg／L＋蔗糖20g／L。在参试的7个因素中,对成熟胚愈伤组织诱导影响作用具体由大到小排列顺序是：基因型、KT、NAA、2,4-D、Pro、蔗糖、CH。     

高粱花药和花序培养诱导愈伤组织及再生植株

小麦、水稻、玉米及木本植物的花药培养诱导花粉植株已经取得了成功,而高粱的花粉或花药培养诱导单倍体的方法、培养基及程序还不完善,基因型和培养基对高粱再生植株的影响也没有报道。Rose 等(1985)用栽培品种(Advance)从1000多个花药形成的愈伤组织中仅得到4株不知倍数的白化苗。利用高粱体细胞组织或器官,如未成熟的胚、芽尖和叶圆片来诱导愈伤组织和再生植株已经成功,但     

巴西橡胶树花药体胚发生类型及其培养条件的改良

橡胶树花药培养体胚发生率低及植株再生频率低是制约其组培苗工厂化生产的瓶颈。以热研7-33-97品系花药为外植体,研究橡胶树花药体细胞胚发育过程并对其体细胞胚进行系统分类,同时改良其培养条件。结果表明,完整的体胚发育过程是球形胚-心形胚-鱼雷胚-子叶胚,但有些心形胚不能进一步发育成鱼雷胚,在后继培养中会分化成畸形胚;体胚发生不具同步性,在鱼雷胚旁又长出次生胚。胶树花药体细胞胚共分9种类型,发现胶树花药体胚发生过程中产生连体胚现象,该类胚能正常发育成植株。不同胚状体培养条件对植株再生率的影响说明,暗培养诱导胚状体2个月后再转移至500 lx弱光照条件下培养10～15 d,然后再转移至出苗培养基培养,能够显著提高植株再生率。在诱导胚胎发生培养基中添加不同浓度的稀土,结果表明,稀土具有提高橡胶树花药体胚发生率的效果,其中以添加1 mg/L稀土培养效果最佳。     

糖液预处理对提高玉米花培诱导率的研究

对不同材料用蔗糖溶液预处理花药,使之产生质壁分离,再接种于不同蔗糖浓度的培养基上.探讨了玉米花药胚状体(愈伤组织)产生情况,指出胚状体(愈伤组织)与基因型关系很大,用25%浓度蔗糖预处理花药6～7min及培养基中加15%浓度蔗糖诱导频率最高。     

应用ICP-MS法对枇杷果实中痕量元素的研究

以15年生的枇杷果实为试材,采用微波消解法处理样品,电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)分析测定果实中V、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Se和Mo等9种人体必需痕量元素的质量分数(w)。结果表明,各元素的线性相关系数均大于0.999,检出限为0.003~0.126μg/L,相对标准偏差均低于3.00%;枇杷果实中痕量元素含量存在显著差异,其中Mn、Zn和Fe含量丰富,高于10 mg/kg DW;不同品种果实Co、Mo、Se和V等元素的变异系数高于40%;聚类分析结果表明,果实中矿质元素与果实风味品质有明显的相关性。     

枇杷试管苗限制生长保存过程中叶肉细胞超微结构变化的研究

本试验以早钟6号枇杷试管苗为材料,将其分别保存在MS+5 mg/L PP333培养基上和MS培养基(对照)上,采用超薄切片透射电镜对保存的试管苗成熟叶片叶肉细胞进行观察。结果表明:与对照相比,添加5 mg/L的PP333,保存6个月时,明显推迟了叶绿体的变形、移动、叶绿体和线粒体的镶嵌及叶绿体的解体;保存9个月时,叶肉细胞叶绿体结构完整,少数出现解体,淀粉粒明显增大、增多,线粒体和细胞核结构正常。     

茄子游离小孢子培养初探

以10份本地主栽长茄品种为试材,对二倍体茄子游离小孢子培养进行研究.结果表明:7份材料可诱导出愈伤组织,‘黑金刚’长茄愈伤组织诱导率可达8.3个/蕾;单核期小孢子是诱导愈伤组织最佳时期;4～6d蔗糖饥饿结合35℃高温预处理是小孢子脱分化的必要条件;愈伤组织诱导与培养分3段进行,先以1.5 NLN培养基附加甘露醇90g/L、2,4-D 0.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L、6-BA 0.2 mg/L 35℃暗培养4～6d,接着添加等体积60g/L蔗糖培养基25℃暗培养3d,再均分成2皿,每皿添加等量30g/L蔗糖的培养基,25℃暗培养5～10d肉眼可见愈伤组织.     

TDZ在小麦花药培养中的作用

为了进一步提高小麦花药培养效率,以8个小麦杂交F1代为供试材料,通过在培养基中添加不同浓度的噻重氮苯基脲(thidiazuron,TDZ)探讨其对小麦花药培养的作用。结果表明,TDZ的作用与添加剂量及小麦基因型密切相关。在诱导培养基中添加TDZ对基因型中麦875/郑豫麦043具有负向调控作用,但对兰考198/黄明118、郑麦7698/西农979以及天禾7号/0836H-3则具有正向促进作用。TDZ的最佳添加剂量为0.05mg·L-1,可显著提高3个基因型的胚性愈伤组织诱导率和绿苗产率,其中兰考198/黄明118胚性愈伤组织诱导率和绿苗产率最高,分别达到25.1%和8.7%。同样,在分化培养基中添加一定剂量的TDZ,对4个基因型的愈伤组织分化均表现正向促进作用,TDZ的适宜浓度范围为0.5~1.0mg·L-1,以添加0.5mg·L-1的处理表现最优,能够显著提高绿苗分化率和绿苗/白苗比率;基因型兰考198/黄明118的绿苗分化率和绿苗/白苗比率最高,分别达50%和1.87。研究还表明,在诱导培养基或分化培养基中添加TDZ还能够促进绿苗增殖,提高单倍体自然加倍效率。本研究结果将有助于小麦花药培养技术的优化,进而提高花培育种效率。     

枇杷胚性培养物中2个ACS基因的克隆及生物信息学分析

以枇杷(Eriobotrya japonica)胚性培养物为材料,采用同源克隆法分离2个ACC合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase,简称ACS)基因家族成员EjACS-1和EjACS-2,GenBank登录号分别为GQ370519和GQ370520.结果显示:EjACS-1和EjACS-2的开放阅读框(ORF)长度均为1 464 bp,编码487个氨基酸.2个ACS基因之间核苷酸和氨基酸的一致性分别为92％和93％,且枇杷ACS与蔷薇科苹果亚科植物多种ACS高度同源.此外,从枇杷基因组DNA中分离了1个含有3个内含子、长度2 319 bp的基因gACS,GenBank登录号为GU180353.EjACS-1和EjACS-2的克隆,为今后研究枇杷组织培养中乙烯的作用机理奠定基础.     

巴西橡胶树花药体细胞胚形成中乳管分化的研究

培育数量多、质量好的体细胞胚是当前巴西橡胶树花药组织培养的主要研究目标,而对于体细胞胚发育过程中是否有乳管分化目前尚不清楚。以不同发育阶段的正常体细胞胚以及不同形态的畸形胚为材料,对它们的乳管分化情况进行了研究。结果表明,球形胚、心形胚和鱼雷胚中都没有乳管分化,最早出现可辨识的乳管是早期子叶胚,而不同形态的畸形胚都有乳管分化。本研究为深入研究乳管分化的机制提供了基础。     

响应面法优化枇杷叶中熊果酸提取工艺及纯化的研究

采用单因素试验,考察乙醇浓度、时间、温度、液固比对枇杷叶中熊果酸提取率的影响。再通过三因素三水平的响应面分析法优化枇杷叶中熊果酸的提取工艺,建立二次项数学模型,验证模型的可靠性,并对熊果酸粗品进行纯化。结果表明：最佳提取工艺为乙醇浓度95％,温度85 ℃,时间2.8 h,液固比（mL ∶ g）15 ∶ 1。此条件下枇杷叶中熊果酸的提取率为95.4％。熊果酸粗品经纯化后,纯度可达54.6％。     

Haploid Plantlet Production through Somatic Embryogenesis in Anther-Derived Callus of Bupleurum falcatum

Abstract

This study was carried out to verify the production of haploid plantlets through somatic embryogenesis of Bupleurum falcatum in anther culture (2n=16). Flowers with anthers at the uninucleate stage, less than 200 µm in anther length, were exposed to 10ºC for 5 days (cold pretreatment) and the anthers were cultured on MS medium supplemented with 2,4-D and/or picloram at various concentrations at 30ºC. The optimal supplement for callus formation was a mixture of 0.075 mg L-¹ 2,4-D + 0.075 mg L-¹ picloram or 0.75 mg L-¹ 2,4-D without picloram. Only a few calli were induced from the anthers without cold pretreatment. The calli were transplanted to MS medium without phytohormones and cultured at 25ºC for plant regeneration. Among one hundred twenty root tips of the regenerated plantlets examined, 14.2% were haploid (n=8). However, in the plantlets regenerated from anthers without cold pre-treatment only 2.5% was haploid. In both haploid and diploid regenerated plantlets, the chromosome number was fixed without variation. Among the regenerated plantlets, one was albino. Haploid plantlets were transplanted to the field after acclimation in pots filled with vermiculite under 90% humidity for a month, and haploid plant were produced. The potential of haploid plants derived from anther culture for production of high-yield and good-quality cultivars is discussed.