新城疫（ND）—减蛋综合征（EDS76）蜂胶二联灭活疫苗的研制Ⅰ．制苗工艺、疫苗安全性和免疫原性试验

将新城疫病毒（NDV）Colon-30株和减蛋综合征病毒（EDS76AV）－127株分别接种于非免疫鸡胚和鸭胚，制备抗原液。抗原液经甲醛灭活后，与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化，制成鸡新城疫（ND）－减蛋综合征（EDS76）蜂胶二联灭活疫苗，对疫苗的安全性和免疫原性进行了测定。对3－6周龄易感雏鸡以2倍使用剂量肌内注射，安全性良好；对1日龄雏鸡接种1个使用剂量进行急性毒性试验。15d生长曲线表明，对雏难 影响。对6周龄雏鸡注射1个使用剂量，每批疫苗免疫10只鸡，免疫后5－32d，鸡血清中EDS76血凝抑制（HI）抗体的几何平均滴度（GMT）为6．5－11．8log2,ND血凝抑制（HI）抗体的几何平均滴度（GMT）为4．8－9．8log2；对ND免疫攻毒试验表明，3批疫苗，每羽份含有的半数保护量（PD50）分别为≥127、≥131和≥127。     

郑州地区家鸭EDS—76血清学调查

郑州地区９个鸭场鸭群中有７个鸭场为ＥＤＳ－７６ＨＩ抗体阳性，阳性率为６６～１００％，不同日龄和不同品种鸭群对感染无明显差异。被感染ＥＤＳ－７６病毒鸭群虽无可见临床症候，对产蛋率也无明显影响，但有一定流行病学意义，试验证明，使用ＥＤＳ－７６ＨＩ母原抗体４．８Ｌｏｇ２以下的鸭胚，用ＨＡ５×２＾１２的种毒接种，对其病毒增殖没有明显的影响，可用于制造ＥＤＳ－７６灭活疫苗，但鸭胚母原抗体超过４．８Ｌｏｇ２以     

鸡新城疫——减蛋综合征二联油佐剂疫苗的研制

应用鸡新城疫（ＮＤ）ＬａＳｏｔａ株和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）ＬＡ３株,分别接种鸡胚和鸭胚增殖病毒,血凝价分别达≥１：１２８０和≥１：１００００时,收取病毒,经福尔马林灭活,按一定比例加入吐温－８０、油佐剂制成ＮＤ－ＥＤＳ－７６二联疫苗,经无菌检验、安全性试验、剂量选择、保护性试验、免疫效果和免疫期测定及保存期观察,结果表明：该二联苗安全性好,于蛋鸡开产前１月皮下注射１ｍＬ／只,２５ｄ后ＮＤ和ＥＤＳ－７６抗体可先后达到高峰,免疫期１年。保存期４℃为１年,２０℃为３个月。     

EDS76双毒株油佐剂灭活疫苗的研制及免疫原性测定

首先以ＥＤＳ７６－ＮＥ_４和ＥＤＳ７６－ＢＣ两个毒株的鸭胚培养物混合或单独分别接种鸡，证明混合接种的鸡，其ＨＩ价高于单独接种的鸡。应用混合培养物（ＨＡ价≥１∶３２７６８）制成３批灭活油佐剂ＥＤＳ７６疫苗，接种鸡６万只以上，接种鸡未出现不良反应，接种后１５、２１、３５和６０天时，鸡的平均ＨＩ价分别为７．５、８．３、９．３和８．０。     

减蛋综合征中药佐剂灭活苗的研制：I.中药佐剂灭活苗的安全性及…

对研制的三批减蛋综合征（ＥＤＳ）中药佐剂灭活苗的安全性和免疫效力进行了试验，经试验证明，中药佐剂可灭活苗的安全性和免疫效力良好，用常规油苗免疫剂量（０．５ｍｌ／只）２～３倍的中药佐剂灭活苗注射，未见不良反应，产蛋正常。在开产前注射０．５ｍｌ／只，接种后１０天即可产生免疫抗体，抗体效价达１：８０，１５天达１：６４０以上。ＥＤＳ中药佐剂灭活苗较油乳剂灭活苗具产生抗体早，抗体水平高，免疫效果好，易注射等     

鸡新城疫——减蛋综合征二联油佐剂疫苗的研制

应用新城疫（ＮＤ）Ｌａｓｏｔａ株和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）ＬＡ３株,分别接种鸡胚和鸭胚增殖病毒,血凝价分别达≥１：１２８０和≥１：１００００时,收取病毒、经福尔马林灭活,按一定比例加入吐温－８０,油佐剂制成ＮＤ－ＥＤＳ－７６二联疫苗,经无菌检验,安全性试验,剂量选择,保护性试验,免疫效果和免疫期测定及保存期观察,结果表明：该联苗安全性良好,于蛋鸡开产前１个月左右皮下注射１ｍｌ／只,２５天后ＮＯ和     

鸡EDS—76油乳剂灭活苗的研制及免疫效果观察

以鸡ＥＤＳ－７６ＡＶ－１２７毒株为材料,研制出ＥＤＳ－７６油乳剂灭活疫苗,并对其物理性状、保存期、安全性及免疫效果进行了检测。结果表明：该苗的外观性状、物理稳定性、粘度以及安全性与免疫效果均已达到国内同类疫苗水平;用该疫苗免疫试验鸡,３０ｄＨＩ抗体可达９．６ｌｏｇ２,能很好地抵抗ＥＤＳ－７６ＡＶ－１２７强毒的人工感染;该苗于４℃保存期为１年,２０℃保存期为３个月。找出了油乳剂疫苗水相与油相的最佳合理配比、乳化时间、乳化速度及水相加入油相的速度。     

EDS—76快速瓷板HA和HI试验研究

ＥＤＳ－７６瓷板ＨＡ和ＨＩ试验与常规使用的９６孔微量板ＨＡ和ＨＩ试验相比，瓷板法具有快速、简易、特异等优点，对ＥＤＳ－７６有检测诊断实用价值。定量检测较微量板法平均低２个滴度左右，且呈正相关性。本试验在１５－２５℃的室温下，１分钟左右可判定结果，缩短试验反应时间６０倍。瓷板法适应于广大基层推广应用。     

鸡新城疫蜂胶灭活疫苗制苗工艺,疫苗安全性和免疫原性？…

用ＮＤＶ Ｃｏｌｏｎ－３０株病毒接种非免疫鸡胚，制备抗原液，经甲醛灭活后与纯化的天然免疫增强蜂胶灭活疫苗，研制成功鸡新城疫蜂胶灭活疫苗，对制品的安全性和免疫原性进行测定，对３～６周龄易感雏鸡以２倍使用剂量从注射，安全性良好，对１日龄雏鸡接种１个使用剂量，进行急性毒性试验观测同，１５３天生长曲线表明，对雏鸡无影响，对３～６周龄雏鸡注射１个使用剂量，每批轩免疫１０只鸡，免疫５～３２一鸡轿清中ＮＤ血凝抑     

ND—EDS76二联油乳剂灭活疫苗的研制

以鸡新城疫LaSota株、EDS76京911株为抗原研制了鸡新城疫减蛋综合征二联油乳剂灭活疫苗。并对其物理性状、安全性、免疫效力、保存期及抗体消长规律进行了检测。结果表明，试验鸡疫苗在免疫后6个月内对新城疫和减蛋综合征两种病毒攻击均获全部保护。疫苗4℃保存15个月，其免疫效力没有下降。     

鸡减蛋综合症灭活疫苗的研究：疫苗制造及免疫效力试验

用鸡减蛋综合症ＢＣ１２７毒株接种９日龄鸭胚尿囊腔制备抗原，加福尔马林灭活后与油佐剂乳化成油佐剂甲醛灭活苗。三批疫苗实验室检验各项指标均合格，用其免疫１０５－１４０日龄未开产鸡，１５－２１天即可产生免疫抗体；用１／４剂量免疫２１天后也能产生较强的免疫力。     

禽脑脊髓炎灭活油乳剂疫苗的研制

将ＡＥＶ－ＶＲ株接种于６日龄ＳＰＦ鸡胚卵黄囊，孵化至１６日龄时迫杀，采集鸡胚绒毛尿囊膜、尿囊液、胚体称重，研磨、离心取上清液加入福尔马林灭活，以灭菌ＰＢＳ（ｐＨ７．２）稀释成１：１、１：１０、１：２０三种浓度，加入吐温－８０制成水相，另以白油、司斑－８０和硬质酸铝煮沸灭菌制成油相，搅拌混合制成不同浓度的灭活油乳剂疫苗，分别免疫２日龄ＳＰＦ雏鸡，安全可靠．用ＡＥＶ－ＶＲ、ＡＥＶ－１１４３、ＡＥＶ－ＮＨ９３７三株混合毒做攻毒试验证明１：１稀释的灭活苗效果最好，保护率可达１００％．用ＡＥＶ－ＶＲ，ＡＥＶ－１１４３、ＡＥＶ－ＮＨ９３７及以上三株混合毒同法制成１：１浓度的灭活油乳剂疫苗，分别免疫２日龄商品雏鸡后用其相应的毒株做攻毒试验，表明该疫苗是安全的，而且可使免疫鸡抵抗ＡＥＶ的感染，具有良好的免疫效果．     

产蛋下降综合征（EDS—76）病毒DNA酶切图谱分析

选Ｅｃｏ，Ｒｉ，Ｐｓｔ，Ｉ，Ｐｖｕ ＩＩＩ，ＨｉｎｄＩＩＩ，Ｂｇ１Ｉｔ和Ｂｇ１ＩＩＩ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株子ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４，８，１０，１０，６和７条。各酶切图形，片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和Ｐｓｔ－Ｉ－Ｅｃ     

减蛋综合征—新城疫二联油乳剂苗的研制

试验以减蛋综合征病毒株新城疫（ＮＤ）ＬａＳｏｔａ株为制苗毒株,分别经鸭胚和鸡胚增殖后,甲醛灭活,灭活毒液按适当比例混合加入油佐剂中,乳化制成二联苗,对苗的安全性,保存期,免疫效力等进行测试。结果表明,疫苗本身安全,对鸡无副作用;乳化度,稳定性良好,易于保存,常温避光６个月以上,４℃左右１２个月,免疫效力无明显下降;ＮＤ于注苗后７ｄ即产生免疫（ＨＩ抗体效价ＧＭＴ ｌｏｇ２为７．５）,ＥＤＳ７６免疫１     

ND和EDS－76二联灭活苗的研制及其免疫抗体消长规律的观察

应用ＮＤＬａＳｏｔａＮ７９株和ＥＤＳ－７６Ｈ９３１株，分别接种鸡胚和鸭胚增殖病毒．血凝价分别达到≥１：１２８０和≥１：１００００时，收取病毒．经福尔马林灭活．按一定比例加入吐温８０、司本８０、硬脂酸铝和白油，高速搅拌均匀，制成ＮＤ和ＥＤＳ－７６二联疫苗。该苗具有良好的免疫力，其中两种病毒无相互干扰性，接种鸡群无不良反应。疫苗置４～８℃和１５～３０℃分别保存８和６个月不破乳．不分层，颜色无变化。用联苗接种６０００余只父母代种鸡，接种后２５天．ＮＤ和ＥＤＳ－７６抗体可先后达到高峰，接种后９个月，鸡群ＮＤ和ＥＤＳ－７６抗体平均效价仍分别保持在７．０和５．６ｌｏｇ２水平上。对１６～１８周龄产蛋母鸡（皮下注射１ｍｌ／只）应用２０万羽份的联苗证明，疫苗安全．效力确实，使用方便．效益显著。     

EDS—BH91毒株血凝特性的研究

本试验主要从红细胞凝集谱、凝集解脱情况以及血凝性的影响因素几方面对本室分离的ＥＤＳ－ＢＨ９１毒株和ＥＤＳ－７６ＡＶ１２７毒株进行了比较系统的测定。试验结果表明：两毒株均能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞，而且２４小时内无解脱现象；对兔红细胞呈可疑；对人、奶牛、绵辜、猪、小鼠、驴的红细胞不能凝集。血凝反应的最适温度产３７℃；最适红细胞浓度为１％；分别以ｐＨ７．４，浓度为０．０１、０．０４、．０．１、０．２Ｍ以     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究：EDS76—NE4株病毒的培养与鉴定

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＥＣＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１：２０４８０－１：３２７６８０倍。     

减蛋综合症病毒（EDS76V）HSH-23株灭活试验研究

对EDS76病毒HSH-23株进行了灭活试验研究，采用最终浓度为0.1%福尔马林在不同时间及温度条件下灭活HSH-23株病毒液，将灭活病毒液接种鸭胚以检查其灭活效果。结果表明：在37℃条件下，经过10h可将病毒完全灭活；该毒株具有较强的热稳定性，在37℃下，放置35天其HA价保持不变；灭活检验中发现，必须将灭活病毒液进行连续2次鸭胚接种，方可作出病毒是否完全灭活的判定。     

检测减蛋综合征抗体间接ELISA法的建立及应用

用蔗糖不连续梯度纯化的减蛋综合征＊（ＥＤＳ－７６）病毒包被ＥＬＩＳＡ板，建立了检测ＥＤＳ－７６抗体的间接ＥＬＩＳＡ法。经测定，抗原最适包被浓度为１μｇ／ｍＬ，待检血清最佳稀释度为１：２００，以ＯＤ４９０〉０．３，Ｐ／Ｎ〉２．１判为阳性结果。对４个鸡场的１２０份鸡血清进行检测，阳性率分别为０，４３．３３％，８０．００％和９３．３３％。     

产蛋下降综合征（EDS—76）病毒DNA探针的制备及应用研究

用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现了１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用Ｂａｍ ＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔ ｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤ