鸡新城疫病毒的分离鉴定与交叉免疫保护试验

为了评价疫苗免疫保护效果,进而筛选出最佳的免疫方案,将分离到的鸡新城疫病毒(Newcas-tle disease virus,NDV)流行毒株制备成灭活疫苗进行交叉免疫保护试验研究。把采集到的疑似发生新城疫的病鸡肺、气管环等组织经处理后接种10日龄SPF鸡胚进行病毒的分离和增殖,并用血清学和分子生物学方法进行毒株的鉴定;用分离到的NDV/Chicken/TC/1/2011毒株制成油乳剂灭活苗,与La Sota疫苗以不同的疫苗组合免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果显示,共分离到9株新城疫病毒,其F蛋白裂解位点的氨基酸均为112 R-R-Q-K-R-F117,表现为强毒株的分子特征,与致病指数结果一致。分离株灭活苗组和分离株灭活苗+La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最高,其次是La Sota灭活苗+La Sota弱毒苗和LaSota灭活苗,La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最低。NDV分离株与疫苗株La Sota存在明显抗原性差异,这将对新城疫疫苗的发展和疾病控制策略制定至关重要。     

鸡新城疫病毒分离株与La Sota株灭活疫苗效力比较试验

用NDV分离株及La Sota株为抗源液，经福尔马林灭活后，与油佐剂混合，分别制成分离株灭活苗、La Sota株灭活苗及分离株与La Sota株二价灭活苗。将这三种灭活疫苗分别免疫SPF鸡后，均获得100%抵抗NDV分离株及F48株强毒攻击的保护力；而用这3种灭活苗与La Sota活苗单独或联合使用，免疫带有ND母源抗体的普通鸡后，3种灭活苗的免疫效力不同，分离株灭活苗与价灭活苗对NDV分离株攻击的免疫保护效力明显优于La Sota灭活苗；灭活苗与活苗同时使用，其免疫效力明显优于单独使用灭活苗或活苗。     

强毒鸡新城疫病毒的分离鉴定及免疫防制研究

从陕西发病鸡群中分离出8株病毒，分离毒大多为速发型NDV强毒株，对经典NDV La Sota株免疫的雏鸡及52周龄高抗体母鸡仍有强的致病力，采用NDV SH1－SH8病株制备成多价油乳剂灭活苗，免疫鸡群有良好的保护力。     

鸡新城疫不同毒株间的交叉保护性研究

将NDV－La Sota疫苗株、NDV山东地方强毒株CY和DY以及NDV F48E8标准强毒株分别制成油乳剂灭活疫苗，免疫6周龄SPF鸡，然后分别用分离强毒株和F48E8强毒株进行攻击。结果发现，两个分离毒株之间、分离毒株与标准毒株之间、IV系疫苗株与分离毒株之间都可以得到完全交叉保护。     

鸡新城疫不同毒株间的交叉保护性研究

将NDV－La Sota疫苗株、NDV山东地方强毒株CY和DY以及NDV F48E8标准强毒株分别制成油乳剂灭活疫苗，免疫6周龄SPF鸡，然后分别用分离强毒株和F48E8强毒株进行攻击。结果发现，两个分离毒株之间、分离毒株与标准毒株之间、IV系疫苗株与分离毒株之间都可以得到完全交叉保护。     

新城疫分离株疫苗免疫保护试验

用经过鉴定的新城疫病毒分离株按国家兽医生物制品质量标准制备油乳剂灭活疫苗，与标准的La Sota疫苗分别免疫带有新城疫母源抗体的白来航鸡，免疫后每7d采血监测新城疫抗体，并于免疫后21，28，35d用鸡新城疫分离毒和F48E9分别进行人工感染试验。结果显示，分离株灭活苗对鸡新城疫分离株的免疫保护效力优于La Sota灭活苗。     

基因Ⅶ型新城疫病毒分离鉴定及免疫原性研究

旨在分离筛选免疫原性好的新城疫病毒(NDV)流行毒株。从发病鸡组织中分离到4株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定为NDV,进而完成致病指数测定、F基因高变区测序和遗传进化分析,并通过鸡胚交叉中和试验和攻毒试验研究PLK-N-06株对比La Sota疫苗株的抗原差异和免疫保护效力。结果显示,4个分离株的致病指数均属速发型NDV范围,且PLK-N-06株毒力最强;F蛋白裂解位点均为112R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株特征。遗传进化分析表明,分离株均为Ⅶd亚型。交叉中和试验结果显示,PLK-N-06株和La Sota株存在显著的抗原性差异。用PLK-N-06株油乳剂灭活苗免疫接种SPF鸡后产生的HI抗体效价几何平均值为1∶338,显著高于La Sota疫苗(1∶69),且其对PLK-N-06株感染的排毒率为0/10,明显低于La Sota株油乳剂灭活苗的4/10,结果表明PLK-N-06株具有良好的免疫原性,为新城疫基因Ⅶ型新型疫苗的研发奠定了基础。     

鸡新城疫病毒强毒株的分离鉴定及生物学特性研究

从黑龙江省某地发病鸡群中分离出一株病毒APMV1/chicken/China/HLJ-2/02,分离毒为速发型NDV强毒株,对经典NDV La Sota株免疫的雏鸡及高抗体母鸡仍有很强的致病力.本研究对分离株进行了生物学特性研究,并对部分基因进行了序列测定,序列已经发送Gene Bank,序列号为AY208695.采用NDV分离毒株制备成多价油乳剂灭活苗,免疫鸡群有良好的保护力.     

新城疫病毒SXFP株的分离鉴定及油乳剂灭活苗免疫效果评价

从陕西富平某种鸡场发病鸡群中分离出了1株流行毒株,经HA-HI试验和动物回归试验,确定分离到的为NDV,命名为SXFP株.经过测定,SXFP株鸡胚半数致死量(ELD50)为109.0/0.1 mL;鸡胚最小致死量的平均致死时间(MDT)为52.3h;对1日龄SPF雏鸡脑内致病指数(ICPI)为1.92,提示SXFP株为强毒力株.血清交叉反应试验显示,SXFP株和La Sota株存在小的抗原性差异.用SXFP株油乳剂灭活苗对SXFP株和La Sota株的保护率分别为90%和100%,明显优于La Sota株油乳剂灭活苗的60%和70%.提示SXFP株制备的疫苗对流行毒株和经典毒株均能很好地保护.     

NDV地方分离株与La Sota株抗原交叉性研究

用新城疫弱毒疫苗株La Sota阳性血清测定NDVMM,NDVLD,NDV-NH3株新城疫病毒地方分离株和标准株La Sota,F48E9的HI效价,以La Sota阳性血清对La Sota疫苗株的HI效价为参照,分析NDV地方分离株与疫苗株抗原交叉性。结果表明,NDV-MM,NDV-LD 2个野毒株HI效价与NDV-LD HI效价相近,但比La Sota HI效价低2．3个～2．7个滴度;NDV-NH与F48E9 HI效价相近,比La SotaHI效价低4．2个～4．3个滴度,提示以上3个野毒株与疫苗株之间的抗原相关性差异较大。动物免疫保护试验结果表明,经La Sota免疫（HI效价〉2^5）后攻毒保护率为80％-100％。     

新城疫分离株免疫保护试验

对经过鉴定的新城疫病毒(NDV)分离株，按国家兽医生物制品质量标准制备油乳剂灭活疫苗，在隔离器中接种SPF鸡，设标准La Sota疫苗株作对照，进行免疫保护实验。免疫后，每7d采血监测NDV抗体。免疫后3周，利用ND强毒分离毒和F48E。分别进行交叉攻毒实验，同时设SPF鸡对照。每天观察，及时剖检发病鸡，检察鸡群病变，以确定疫苗的保护性，以便对常规生产中的免疫失败进行原因分析。     

一株鸡新城疫病毒的分离鉴定及其油乳剂灭活苗免疫效果评价

从河南某种鸡场发病鸡群中分离出1株毒株,经HA、HI和动物回归试验,确定分离的病毒为NDV,命名为HNYD株。经过测定,HNYD株鸡胚半数致死量（ELD50）为10^90/0．1mL;鸡胚最小致死量的平均致死时间（MDT）为53．8h;对1日龄SPF雏鸡脑内致病指数（ICPI）为1．86,提示HNYD株为强毒力株。血清交叉反应试验显示HNYD株和La Sota株存在一定的抗原性差异。用HNYD株油乳剂灭活苗对HNYD株和La Sota株的保护率分别为90％和100％,明显优于La Sota株油乳剂灭活苗,提示HNYD株制备的疫苗对流行毒株和经典毒株的攻击均能很好的保护。     

两种新城疫灭活疫苗免疫原性比较

新城疫作为家禽养殖业危害最大的疫病之一,近些年来常发生免疫失败的现象,究其原因,由于免疫压力的增大和变异株的增多,使疫苗的免疫效果受到极大的挑战,因此选择合适的病毒株制备疫苗对免疫效果具有重要的意义。论文通过测定抗体水平比较新城疫基因Ⅶ型A-Ⅶ株和传统基因Ⅱ型La Sota株油乳剂灭活疫苗对鸡只免疫效价的影响,通过攻毒后的保护、排毒情况及病毒载量的研究,综合比较了2种毒株的免疫原性。通过本试验发现,利用基因Ⅶ型A-Ⅶ株灭活苗与基因Ⅱ型La Sota株灭活苗免疫SPF鸡后,A-Ⅶ株灭活苗所产生的HI抗体效价明显高于La Sota株灭活苗。而通过基因Ⅶ型YND株和标准强毒F48E9株攻毒试验结果显示,2种疫苗均能100%的保护鸡只不死亡,但A-Ⅶ株比La Sota株灭活苗能够更好地抑制强毒在体内的复制和排毒。由此可见,基因Ⅶ型A-Ⅶ株对不同基因型强毒的抵抗能力优于基因Ⅱ型La Sota株,具有更好的免疫原性,通过本试验可为新城疫的防控选择合适的疫苗提供一定的参考。     

鸡新城疫-传染性支气管炎二联油乳剂苗的研制

以NDV La Sota株，IBV呼吸道型H120株和肾型SN9301株为制苗毒株，病毒经鸡胚繁殖后甲醛灭活，灭活毒液依毒价按比例混合加入油佐剂中，乳化制成ND—IB二联油乳剂疫苗。对该疫苗的安全性、稳定性和免疫效果等进行了测定。结果表明：疫苗安全稳定，物理性状良好；将该苗与相应弱毒苗配合用于雏鸡首免，可获得稳定的免疫保护；单用该苗给雏鸡首免，或用相应弱毒苗免疫雏鸡，免疫效果均较差。     

鸡新城疫流行毒株与标准毒株的交叉免疫保护试验

用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫母源抗体平均为2 log2的12日龄公雏。免疫后每隔1周采集血清，用微量血凝抑制试验检测HI抗体。免疫后21 d抗体水平达到峰值，抗体水平在6log2以上，维持30 d以上。免疫40 d后，用ND分离强毒株和NDVF48E9分别进行攻毒试验，2种疫苗的保护率均为100％，攻毒结果表明，ND分离强毒株和NDVF48E9株的免疫原性差异不显著。     

新城疫La Sota疫苗对山东分离株的免疫保护试验

用标准疫苗株La Sota活疫苗在隔离器中接种SPF鸡,进行免疫保护试验.免疫后,每7 d采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病毒(NDV)潍坊毒SGM01、昌乐毒SCL03、东营毒HY、日照毒SRZ03、莘县毒SSX03和标准强度F48E9分别进行攻毒试验,同时设SPF鸡对照.每天观察,及时剖检发病鸡,检查鸡群病变,确定疫苗的保护性.结果表明,La Sota疫苗能对除SGM01和HY以外的病毒攻击的SPF鸡提供较好的保护.     

不同禽源的禽Ⅰ型副黏病毒株毒力、免疫原性及抗原相关性研究

从病死的鸡、鹅、鸽中分离到3株禽I型副黏病毒(CPMV、GPMV、PPMV)。毒力测定结果显示,CPMV、GPMV的毒力与鸡新城疫病毒(NDV)F48E9株的毒力相似,为强毒型;PPMV的毒力与鸡NDVLaSota株的毒力相似,为自然弱毒株。对该分离株F基因裂解位点的序列分析结果表明,CPMV、GPMVF裂解位点氨基酸序列为112K-R-Q-K-R-F117,符合强毒株的序列特征;PPMV F裂解位点氨基酸序列为112G-R-Q-G-R-L117,属于弱毒株的特征性序列。将该3株病毒制成灭活疫苗,分别免疫鸡,结果都能诱导鸡体产生较高水平的HI抗体;再分别以CPMV、GPMV攻击免疫鸡群,结果显示免疫鸡群可得到保护,而非免疫鸡群被攻击后全部致死。用HI方法检测3株病毒与Lasota株之间的交叉血凝抑制试验,结果表明LaSota与GPMV两毒株间的抗原性无明显差异,LaSota与CPMV、PPMV两毒株间的抗原性有较小的差异。本研究将有助于进一步开展禽Ⅰ型副黏病毒的致病机制和新型疫苗等方面的研究。     

新城疫病毒样颗粒(ND-VLPs)免疫效力的研究

为了研究ND-VLPs的免疫原性,利用共表达NDV F、HN、NP和M蛋白的重组杆状病毒rBac-F-HN-NP-M感染Sf9细胞,采用蔗糖密度梯度离心法纯化释放到细胞培养上清的VLPs,免疫60只,18日龄SPF鸡,监测血清中NDV特异性抗体滴度的变化.2周后用相同剂量的VLPs加强免疫.二免后2周以3.16×103EID50的F48E9株强毒滴鼻攻毒.攻毒前,La Sota灭活苗、La Sota 20μg VLP和不同剂量VLPs组(10 μg、20 μg、25 μg)HI效价分别为28.3、28.9、24.1、26.1、26.7;攻毒后,10 μg和20 μg VLP免疫组仅能提供了80%和90%的保护率,但与La Sota灭活苗、La Sota 20 μg VLP一样,25 μg VLP试验组却能够完全抵抗致死剂量的NDV强毒攻击.本试验表明,ND-VLPs具有良好的免疫原性,25 μg VLP诱导机体产生的免疫应答能抵抗致死剂量强毒的攻击.ND-VLPs有可能用来研制针对新城疫流行变异株的高效疫苗.     

新城疫病毒山东强毒株的分离鉴定

从山东流行烈性传染病的鸡群中分离出7株具有血凝活性的病毒，该7株病毒的血凝活性均能被新城疫La Sota株标准阳性血清所抑制，但病毒不能被中和，仍能致死鸡胚。经分离鉴定，分离毒均为新成疫病毒株。通过鸡胚半致死量（ELD50）、最小致死量致鸡胚的平均时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内致死指数（ICPI）、6周龄雏鸡静脉致死指数（IVPI）、血凝解脱及血凝素稳定性等试验表明：7株分离病毒均为新城疫病毒强毒性，其毒力与标准强毒株F48E9株相似。     

云南2株基因Ⅱ型新城疫病毒F基因变异特性分析

对云南省2个发病鸡场的组织病料进行病原分离,通过血凝、血凝抑制试验和RT-PCR检测,证明分离毒株为新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）。采用特异性引物经RT-PCR扩增F基因,纯化后克隆至pMD18-T载体,并对其进行测序。序列比对及系统发育分析结果表明,分离获得的云南省2株 NDV毒株F基因核苷酸与La Sota株的核苷酸同源性为99.4%～99.6%,与国内外分离的流行毒株SP13和NDV027344核苷酸同源性均为99.7%～99.8%,与F48E9株的核苷酸同源性为89.0%～89.1%;F蛋白氨基酸与La Sota株的氨基酸同源性为99.3%～99.5%,与流行毒株SP13和NDV027344的氨基酸同源性均为99.5%～99.6%,与F48E9株的氨基酸同源性为91.8%～92.0%。系统发育分析结果表明,2株病毒均属于基因Ⅱ型,裂解位点氨基酸为G-R-Q-G-R-L,属于弱毒株裂解位点氨基酸排列特征。