应用C—ELISA检测禽流感病毒核蛋白抗体

应用杆状病毒表达的重组核蛋白及单抗建立了竞争ＥＬＩＳＡ（Ｃ—ＥＬＩＳＡ）,用于抗Ａ型禽流感病毒核蛋白抗体的检测。试验检测了７５６只鸡,１１２３只火鸡,７０７只鸸鹋和１２６１只鸵鸟的共３８４７个血清样品。与琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）对比,Ｃ—ＥＬＩＳＡ方法对上述四种血样的敏感性均为１００％;而与血凝抑制试验（ＨＩ）相比,则其敏感性在鸡、火鸡和鸸鹋为１００％。鸵鸟为９６．２％。经ＡＧＩＤ检测为阴性而Ｃ—ＥＬＩＳＡ阳性的样品中有９０％以上通过ＨＩ试验至少一种血清亚型呈阳性反应。试验发现Ｃ—ＥＬＩＳＡ和ＡＧＩＤ方法的特异符合率在８５．５％—９９．８％之间。这些结果表明,Ｃ—ＥＬＩＳＡ和ＨＩ一样都比ＡＧＩＤ更敏感、更特异。因此,Ｃ—ＩＬＩＳＡ有可能取代ＡＧＩＤ,用于禽类（包括平胸鸟）Ａ型流感病毒血清学监测。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验     

VP_7-ELISA检测牛、羊血清蓝舌病抗体的研究Ⅱ应用VP_7-ELISA检测蓝舌病抗体

蓝舌病ＶＰ７抗原包被板在－２０℃保存期为６个月,４℃保存１个月。抗原批内重复性试验ＣＶ＜１０％,批间重复性试验ＣＶ＜１０％。ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ与ＡＧＩＤ对４２０份血清平行检测结果：ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ较ＡＧＩＤ试验多检出了 １３份阳性样品, ＶＰ,－ＥＬＩＳＡ检出的阳性样品对ＡＧＩＤ阳性样品的覆盖率为９７．４％,对采自陕西等省１８１６份牛、羊血清样品进行检测,检出阳性样品数为２５７份阳性检出率为１４．２％。     

银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究

本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的银加强胶体金检测法（ＳＥＣＧＡ），并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为０．３１２５ｎｇ／点，其敏感性分别为间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＨＡ的８倍和１０００倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＳＥＣＧＡ具有较高的特异性。２０份样本ＳＥＣＧＡ的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。ＳＥＣＧＡ和间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对７７份样本检测的阳性率分别为８３．１％和８０．５％，其阳性符合率为９６．９％。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点，可用于ＰＰＶ感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。     

VP7—ELISA检测牛,羊血清蓝舌病抗体的研究Ⅱ应用VP7—ELISA检 …

蓝舌病ＶＰ７抗原包被板在－２０℃保存期为６个月,４℃保存１个月。抗原批内重复性试验ＣＶ＜１０％,批间重复性试验ＣＶ＜１０％。ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ与ＡＧＩＤ对４２０份血清平行检测结果：ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ较ＡＧＩＤ试验多检出了１３份阳性样品,ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ检出的阳性样品对ＡＧＩＤ阳性样品的覆盖率为９７．４％,对采自陕西等省１８１６份牛、羊血清样品进行检测,检出阳性样品数为２５７份,阳性检出率为１４．     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散     

Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１：１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１：６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳履率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测     

Ab─ELISA和Ag─ELISA诊断骆驼伊氏锥虫感染的比较

采用四种方法：即①单克隆抗体检测抗原的酶联免疫吸附试验（Ａｇ－ＥＬＩＳＡ）②检测抗体的酶联免疫吸附试验（Ａｂ－ＥＵＳＡ）③表膜检查（ＢＣＥ）④小白鼠接种（ＭＩ），检查了肯尼亚１８３头骆驼锥虫的循环抗原，ＢＣＥ查出３７头阳性２０％），ＭＩ６０头阳性（３３％），Ａｇ－ＥＬＩＳＡ６３头阳性（３４％），Ａｂ－ＥＬＩＳＡ检出９０头阳性（４９％）。其中ＢＣＥ未能检出的２４头中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出１８头（７５％）。所有阳性头数中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出９３％，Ａｂ－ＥＬＩＳＡ９５％。根据５５头的结果，阳性与阴性之间Ａｇ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异极显著（Ｐ＜０．０００１），Ａｂ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异不显著。因此，用Ａｇ－ＥＬＩＳＡ或结合ＢＣＥ诊断伊氏锥虫感染比用ＡＢ－ＥＬＩＳＡ更理想。     

Ab—ELISA和Ag—ELISA诊断骆驼伊氏锥虫感染的比较

采用四种方法：即①单克隆抗体检抗原的酶联免疫吸附试验（Ａｇ－ＥＬＩＳＡ）②检测抗体的在酶联免疫吸附试验（Ａｂ－ＥＬＩＳＡ）③表膜检查（ＢＣＥ）④小白鼠接种（ＭＩ），检查了肯尼亚１８３头骆驼锥虫的循环抗原，ＢＣＥ查出尼亚１８３头骆驼锥早的循环抗原，ＢＣＥ查出３７头阳性２０％），ＭＩ６０头阳性（３３％），Ａｇ－ＥＬＩＳＡ６３头阳性（４９％），Ａｂ－ＥＬＩＳＡ检出出的２４头中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出１８头     

用ELISA检测山羊关节炎脑炎病毒抗体

以差速离心，结合ＳＤＳ处理制备ＥＬＩＳＡ抗原，用含０．０２％ＮａＮ３的碳酸盐缓冲液作抗原包被液，不加任何封闭剂，待测血清以含５％犊牛血清和０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０稀释，检测９２２份山羊血清的ＣＡＥ抗体，并与免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）比较，提高检出率约一倍并减少漏检     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和试验和单克隆抗体阻断酶联免疫吸附试验对８１头美国进口猪轿清作猪传染性胃肠炎抗体检测。ＳＮ试验同７份阳性血清，检出率为８．６４％，Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于Ｓ     

酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

建立的检测猪生殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为１．７ｍｇ／Ｌ，血清的最适稀释度为１：１００，酶标兔抗猪ＩｇＧ的家访工为１：２０００。比较试验表明，ＥＬＩＳＡ的敏感性优于间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）。用ＥＬＩＳＡ检测１９９１年从美国进口猪的血清７６份，阳性率为零；１９９５年从加拿大进口猪的血清１６３份，阳性率为５．５２％；北京地区甲猪场的血清１２１份，阳     

检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的三种血清学方法的比较

应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）和鸡气管环培养中和试验（ＳＮｉｎＴＯＣｓ）三种常规血清学方法对实验鸡血样的鸡传染性支气管炎病毒抗体进行了检测。从实验鸡血样的检测结果表明，ＥＬＩＳＡ和气管环中和试验的灵敏度较好，而ＡＧＰ的灵敏度相对较差，但三者均有较好的特异性。对田间送检血样的检测结果表明，ＥＬＩＳＡ与气管环中和试验、ＥＬＩＳＡ与ＡＧＰ的一致性均较好，而气管环中和试验与ＡＧＰ的一致性较差。ＥＬＩＳＡ效价与气管环中和试验效价的相关系数为０．８４     

用竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病病毒抗体的研究

对加拿大动物疾病研究所（ＡＤＲＩ）现行的检测ＢＴＶ群特异性抗体的竞争酶联免疫吸附试验（下称标准程序）进行改良，建立新的适合国内实验条件易于推广的试验方法（下称改良程序）。对１５份实验感染ＢＴＶ的参照牛血清和３６０份样品牛血清进行比较检测，结果表明改良程序与标准程序特异性和敏感性基本一致。用琼凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）对上述参照血清和样品血清进行检测，表明改良程序与标准程序均较ＡＧＩＤ试验敏感。本研究进一步验证改良后的Ｃ－ＥＬＩＳＡ可取代传统的ＡＧＩＤ方法成为ＢＴＶ群特异性抗体的检测标准方法，且它还具备操作简便，作用时间短等特点     

ELISA法与HI法检测鸡新城疫抗体的比较及ELISA阴、阳性临界点对临床检测结果的影响

应用商品化酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒和血球凝集抑制（ＨＩ）试验同时测定１８７份常规鸡新城疫（ＮＤ）抗体血样。结果显示,二种方法的抗体效价呈显著相关,其相关系数为０．８３。在此基础上,以ＨＩ法为标准方法对ＥＬＩＳＡ的临床检测结果进行了分析。ＨＩ法的测定结果表明,该试验群的抗体阳性率为５４．５％。按试剂盒提供的阴、阳性临界点判定结果,ＥＬＩＳＡ的相对灵敏度为９７．１％,相对特异性为６１．２％,反映总体测试能力的指标即检测准确率为８０．７％,Ｙｏｕｄｅｎ指数为０．５８;而具临床指导意义的指标即阴、阳性结果预测值分别为９４．５％和７５％。本试验还根据上述指标应用了一种改进的ＴＧ－ＲＯＣ分析方法（Ｔｗｏ－ＧｒａｐｈＲｅｃｅｉｖｅｒＯｐｅｒａｔｉｎｇＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）,对如何选择合适的ＥＬＩＳＡ临界点进行了分析。结果显示,在不同条件下,ＥＬＩＳＡ试剂盒所提供的临界点并非都是最佳的,使用者可根据检测目的采用ＴＧ－ＲＯＣ法进行调整;同时也证实ＥＬＩＳＡ法是一种敏感、特异、快速、简便的血清学方法,可以大批量样品检测时采用。     

抗鸽IgG单克隆抗体的制备及鉴定

鸽卵黄经硫酸铵盐析、酒精沉淀及凝胶（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００）柱层析后,得到较纯的鸽ＩｇＧ,以其免疫ＢＡＬ Ｂ／Ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）进行细胞融合,经过酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）筛选,得到两株能稳定分泌抗鸽ＩｇＧ的单克隆抗体（以下称单抗）,分别命名为１Ｅ５和４Ｃ２。经亚类鉴定,该类抗均为ＩｇＧ１亚类。在鸽ＩｇＧ包被的９６孔板上用间接用ＥＬＩＳＡ方法测定单抗腹水的ＥＬＩ     

间接法Dot—ELISA检测鸡减蛋综合症抗体的建立及应用研究

应用ＳｅｐｈａｄｃｘＧ－２００层析法纯化鸡减蛋综合症病毒，利用ＮＣ膜作为载体，成功建立了检测ＥＤＳ－７６血请抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，被检血清浓度为１：２０，酶标兔抗鸡１ｇＧ浓度为１：２００．底物溶液最适ｐＨ值为７．２。对Ａ－Ｆ６个养禽场随机抽检血清１６０份，分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ、ＨＩ和ＡＧＰ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出阳性率为５１．９％，ＨＩ检出阳性率为４６．９％，ＡＧＰ检出阳性率为３１．９％。对１４０日龄鸡人工感染试验，测定抗体消长规律。本方法不需特殊仪器。适用于基层兽医部门和养鸡场对ＥＤＳ－７６的血清学诊断和流行病学调查。     

应用Dot—ELISA检测鸡白血病病毒群特异性抗体

利用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）的基本原理,根据蛋清可以直接吸附在硝酸纤维素（ＮＣ）膜上的特点,建立了Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡白血病病毒（ＡＬＶ）群特异性抗原的方法,并与双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）进行比较,两种方法具有相同的特异性和敏感性。     

快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ４９０值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡＩ法具有实际应用价值。ＰＥＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有