水稻种子蛋白质组分的双向电泳分析

本文对双向电泳技术作了一些改进,应用于水稻种子胚乳及胚蛋白的组分分析,获得了较清晰而稳定的结果。水稻(Oryza sativa.L)品种珍汕97的胚乳蛋白可分析出约100种成分,而胚蛋白可分析出约550种成分,检测灵敏度为0.2μg 蛋白质/mm~2。通过对这些实验条件的比较,表明该技术对水稻等作物种子蛋白的分析是一种行之有效的方法。     

大葱花蕾总蛋白双向电泳体系的建立

为建立适合于大葱花蕾总蛋白的双向电泳体系,本研究以大葱花蕾为材料,对大葱花蕾总蛋白提取方法、IPG胶条梯度范围、上样量、等电聚焦等双向电泳的关键步骤进行优化。结果表明最适宜大葱花蕾总蛋白的双向电泳条件为:TCA-丙酮沉淀法提取大葱花蕾总蛋白,选择24 cm p H 4~7的IPG胶条,上样量800μg,按聚焦程序Ⅰ聚焦后进行双向电泳并采用考马斯亮蓝染色。采用该体系可以获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。     

双向电泳联用质谱技术研究松材线虫和拟松材线虫的差异蛋白

松材线虫是造成松树萎蔫病的病原,对松林威胁很大。其近似种拟松材线虫与松材线虫在形态学上极其相似,却不具致病性。所以,松材线虫和拟松材线虫的快速检测至关重要。应用双向电泳联用质谱技术,研究松材线虫和拟松材线虫的蛋白差异,并对差异蛋白进行MALDI-TOF/MS分析以及数据库鉴定,共鉴定了45个差异蛋白,其中松材线虫22个、拟松材线虫23个。不仅为松材线虫和拟松材线虫的准确鉴定打下基础,差异蛋白的进一步研究可望揭示松材线虫的致病机理。     

高丹草叶片总蛋白双向电泳体系的建立

本研究以杂种高丹草及其亲本为试材,分别采用2种方法(三氯乙酸丙酮沉淀法,丙酮沉淀法)提取高丹草叶片总蛋白,并对IPG胶条的pH范围、蛋白上样量进行了优化。研究结果表明:与三氯乙酸丙酮沉淀法相比,丙酮沉淀法更适合高丹草叶片总蛋白的提取;采用17 cm pH 4~7 IPG胶条,上样量为800μg,构建了背景清晰,分辨率高,重复性好的高丹草双向电泳图谱,为后期高丹草差异蛋白质组学研究提供良好的技术支撑。     

籽粒苋根系蛋白的提取与双向电泳体系的建立

本研究以籽粒苋根为试验材料,比较3种不同蛋白提取方法对蛋白质双向电泳的影响,并对其中的蛋白上样量和等电点聚焦时间进行了优化。结果表明:与酚抽提法和TCA-丙酮法相比,Tris-Hcl法提取籽粒苋根系蛋白效果较好;上样量800μg和聚焦时间70 000 Vh的条件下会得到理想的双向电泳图谱。采用优化后的条件,可以得到蛋白点数量多、背景清晰的双向电泳图谱,将为下一步镉胁迫下籽粒苋根系蛋白质组学研究及利用分子育种技术培育耐镉的籽粒苋新品种提供技术资料。     

适用于水稻微粒体蛋白的双向电泳技术及苯达松抗性相关蛋白的初步分析

针对不同来源的样品，建立相应的双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)技术是开展蛋白质组学研究的基础。以野生型水稻(O. sativa L.)农林8号(N8)及其苯达松敏感致死(bentazon sensitive lethal, bsl)突变体农林8号m (N8m)为材料，通过优化条件，建立了适合于水稻微粒体蛋白的双向电泳技术。并通过双向电泳图谱的比对，共找到15个差异蛋白点，分为供试材料间差异、苯达松处理前后差异和N8在苯达松处理后特异表达等3种类型。结合苯达松抗性比较及苯达松残留分析，推测材料间差异是因γ射线辐照引起基因结构变异，从而影响了基因的表达；苯达松处理前后差异与氧自由基清除酶系或系统获得抗性相关酶系有关；N8在苯达松处理后特异表达与苯达松代谢有关。     

适合双向电泳的植物全蛋白提取方法比较

样品处理是双向电泳实验最基础也是最关键的环节之一,样品制备成功与否直接关系到双向电泳图谱的质量和蛋白质组信息的完整性。应用于双向电泳中提取植物全蛋白的常用方法有：TCA-丙酮沉淀法、Tris-HC1法、酚法、Trizol沉淀法、Tris-丙酮-酚法、尿素/硫脲提取法。不同的方法适合不同特征的植物样品,比较了用于双向电泳的六种植物全蛋白提取方法的优缺点,并对每种方法适用的植物组织作了简要概述。     

香蕉枯萎病菌双向电泳体系的建立及蛋白质组学初步研究

旨在对香蕉枯萎病菌胞内蛋白的提取方法进行优化,建立菌体胞内蛋白质双向电泳体系。在原有的基础上优化菌体胞内蛋白提取方法,提取蛋白质进行双向电泳,并应用质谱技术鉴定一些蛋白质来验证提取蛋白质的质谱兼容性。通过扩大培养的方法获得足够的生物量,采用过滤法收集菌体用来提取蛋白质,涡旋振荡30 min能有效破胞,提高蛋白质提取效率。甲醇和丙酮各清洗2次能有效的清除蛋白质中的杂质,得到了高质量的蛋白质图谱,选取了10个蛋白质点进行质谱鉴定,成功的鉴定了8个蛋白质点,代表了8种蛋白质。这些结果表明提取的蛋白质和采用的胶内酶解方法具有良好的质谱兼容性,能为进一步研究不同菌体之间的差异表达蛋白质提供技术支持。     

橡胶树花序总蛋白双向电泳研究体系的建立与优化

以橡胶树热研7-33-97花序为试验材料,分别采取3种蛋白质提取方法(TCA/丙酮法,酚抽提法和Tris-丙酮-酚法)提取橡胶树花序总蛋白。对3种蛋白质提取方法的蛋白提取率、单向SDS-PAGE电泳和双向电泳结果进行分析比较,结果表明3种方法中TCA/丙酮法的提取率最高(6.09±0.22)mg/g,单向SDS-PAGE电泳条带清晰且较完整,双向电泳后获得的蛋白点最多(994±25),是建立橡胶树花序蛋白质组学研究体系的较好方法。进一步对基于TCA/丙酮法提取的橡胶树花序总蛋白质双向电泳体系进行优化,结果显示利用p H范围为4~7的IPG胶条,在聚焦时间为7.0×10~4 Vh、蛋白上样量为1.0×10~3μg,以及12.5%凝胶浓度条件下,考马斯亮蓝染色法获得的橡胶树花序蛋白质双向电泳图谱质量最好,可为橡胶树生殖发育相关蛋白质组学研究奠定良好基础。     

向日葵幼苗全蛋白提取及双向电泳技术体系的建立

本研究以向日葵幼苗为材料,比较TCA-丙酮提取法、Tris饱和酚提取法以及水溶法三种提取蛋白的方法,并且对双向电泳技术进行研究,初步建立向日葵幼苗蛋白的双向电泳体系。研究结果表明,用Tris饱和酚提取法提取蛋白含量最高,经蛋白定量后显示含量可达43.359 ug/u L;用不同浓度分离胶进行SDS-PAGE凝胶电泳,结果显示用8%分离胶可分离条带数较多,最多可分离20条蛋白条带;用不同聚焦时间以及不同上样量进行双向电泳,结果显示一向IEF聚焦时间为6 h左右,上样量为1 mg的条件较为适合,用Image Master5.0软件分析检测到蛋白点为102个。     

水稻温敏叶绿素突变体叶片蛋白的双向电泳分析

采用经改进的蛋白质双向电泳技术,分析了水稻温敏叶绿素突变体武金4B和1103S"斑马叶”性状表达过程中叶片蛋白质的变化.结果表明:在该性状表达期,叶片蛋白质含量下降,特别是RubisCO大、小亚基含量明显减少;在叶片的失绿部分蛋白P1(MW56kD,pI6.7)发生特异缺失;在叶片的绿色部分该蛋白明显表达.复绿后,P1蛋白正常表达.在对照及     

甜瓜叶片蛋白的提取和双向电泳体系的优化

为建立适合甜瓜(Cucumis melo L.)叶片蛋白质组分析的双向电泳体系(2-D),以甜瓜植物叶片为试验材料,比较了2种不同植物叶片蛋白的提取方法,并对双向电泳的2个重要的环节技术即聚焦参数和上样量进行了优化。结果表明：与Tirs-酚提取法相比,使用改良后的Mg/NP-40/PEG3350/TCA丙酮提取法提取叶片蛋白,经过SDS-PAGEF分析之后,所得的蛋白含量较高,Rubisco酶去除的较好,条带清晰。采用 pH 3~10,18 cm的IPG胶条进行双向电泳时,适当增加低电压聚焦时间,得到了较为清晰的2-D图谱。蛋白上样量为800 μg时,得到的蛋白点数最多,低峰度蛋白较为清晰。研究建立了适用于甜瓜叶片蛋白分析的双向电泳体系,得到了蛋白点数目多且分辨率高的双向电泳图谱。为下一步在蛋白组学水平上分析与甜瓜抗病、产量、性状等相关蛋白提供了技术支持。     

适用于花叶唐竹叶片总蛋白的双向电泳体系的建立

本研究以花叶唐竹二年生苗木的健康叶片为材料,采用3种不同的蛋白质提取方法(酚法, TCA-丙酮法, TCA-丙酮/酚法)、不同的上样量、不同p H值IPG胶条及不同等电聚焦方案等因素进行筛选和优化,以期获得最佳的花叶唐竹叶片总蛋白的提取方法,并建立适用、高效的花叶唐竹蛋白质双向凝胶电泳技术体系。结果表明,选择TCA-丙酮/酚法的蛋白得率高、纯度高,选择17 cm pH 5～8的线性IPG胶条,450μg的上样量以及60 000 Vhs的等电聚焦强度进行双向电泳,共检测到726个蛋白点,整体分布均匀,分离效果较好。本研究初步建立了花叶唐竹蛋白质双向电泳体系,有助于后续研究叶片呈色机理提供技术帮助。     

双向电泳联用质谱技术研究棉苗对细极链格孢菌蛋白激发子诱导的应答

 采用双向电泳和质谱技术分析了细极链格孢菌蛋白激发子对棉苗诱导的全蛋白质组,建立二者间的差异表达图谱,并对差异蛋白进行了鉴定及分析归类。结果表明,蛋白质分子质量在10～100 kD之间、等电点3～10范围内,每块胶分离到约600个蛋白质点。得到了大约53个差异蛋白点,其中有31个为上调蛋白,22个为下调蛋白。对PEAT诱导后表达量明显增加的 7个上调蛋白点用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)进行肽质量指纹谱的分析,并通过检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测,获得了4个蛋白的肽质量指纹图谱,经数据库检索鉴定分析,GH-1、GH-3、GH-6推测为核酮糖1,5-二磷酸羧化酶基因家簇,GH-7推测为-S-腺苷一蛋氨酸合成酶。     

适于双向电泳分析的大豆花瓣采样方法

大豆花器小,花瓣中蛋白含量低,花瓣采集是大豆花型发育蛋白质组学研究首先要解决的难题.大豆开花期一般持续大约为30d,花瓣采集不仅需要选择恰当的时期、掌握正确的方法,还需要一定的实践经验和技巧.本研究确定了不同发育阶段的大豆花瓣采集标准;明确了采集用于蛋白质组双向电泳分析的不同发育阶段大豆花瓣所需的工作量;建立了1mm花苞大豆花瓣的采集方法.为大豆花型发育蛋白质组双向电泳分析提供了有效的样品采集方法.     

水稻籽粒蛋白双向电泳条件的优化及其蛋白组学方法的比较

探讨适用于籽粒蛋白组学研究的策略,对深入研究籽粒的发育过程具有重要的意义。本文对比了3种不同的蛋白提取方法,优化了双向电泳中自制管胶一向的等电聚焦条件和IPG干胶条一向的等电聚焦时间,以MALDI-TOF/MS、Western-blot和磷酸化蛋白组学3个重要的蛋白质组学研究方法对胶内蛋白质鉴定分析。结果表明,可溶性蛋白提取法最适用于籽粒蛋白组学的研究; 电泳条件优化后,得到了较优的2-DE图谱; 胶内蛋白点适用于质谱分析、蛋白表达量验证(Western-blot)及籽粒蛋白的磷酸化组学的研究。本研究为下一步在蛋白组水平上分析籽粒发育提供了技术支持。     

甘蓝型油菜蛋白质双向电泳体系的建立

选用油菜品种08127,采用TCA-丙酮提取方法,pH 4~7胶条和改进的IEF聚焦程序,得到较好的蛋白质双向电泳结果,建立了一种适合甘蓝型油菜的双向电泳体系;利用其他甘蓝型油菜品种的幼苗、叶片和茎中的蛋白检验了建立的实验体系,都能得到较好的蛋白质双向电泳结果;利用该实验体系比较甘蓝型油菜幼苗不同发育时期蛋白质双向电泳图,找到二者之间的差异点,选取部分点成功进行了质谱分析。     

提高杂交水稻种子质量的技术和方法

提高杂交水稻种子质量的技术和方法四川省三台县种子公司李庆荣产品的质量是企业的生命，种子的质量是种子公司的生命。我县是国家级杂交水稻种子生产基地县，１９９３年农业部水稻种子质量监督检验测试中心和四川省种子质量监督检验站联合对我县１９９２年生产的汕优６３...