青海省樱桃叶斑病病原菌的分离与鉴定

为明确引起青海省樱桃叶斑病病原菌的种类,本研究从西宁市城北区、海东市乐都区和贵德县的樱桃上采集有叶斑症状的叶片,采用组织分离法分离出病原菌,通过观察病原菌的形态特征,结合rDNA-ITS、EF-1α和Alt a 1基因序列分析对病原菌的种类进行了鉴定,并用柯赫氏法则进行验证。结果表明,共获得279株病原菌菌株,分属链格孢Alternaria alternata、细极链格孢A.tenuissima和刺盘孢属Colletotrichum spp.,分离频率分别为84.95%、5.02%和10.03%。采用柯赫氏法则进行离体叶片致病性测定,接种叶片100%发病,说明引起青海省樱桃叶斑病的病原菌为链格孢、细极链格孢和刺盘孢属真菌,且链格孢为主要病原菌。该研究结果可为青海省樱桃叶斑病的综合防治提供理论依据。     

引起葡萄叶斑病的链格孢种类的初步鉴定

为明确北京市大兴区、顺义区和山西省襄汾县葡萄树上叶斑病的病原菌,利用组织分离法对病样进行分离纯化,采用多基因系统发育学分析(ITS,Alt a 1和gpd)和形态学对纯化后菌株进行鉴定,并结合柯赫氏法则对其进行验证。结果表明,共获得37株链格孢属真菌菌株,分属链格孢Alternaria alternata、葡萄链格孢A. viniferae和乔木链格孢A. arborescens,柯赫氏法则检测结果显示接种菌株对所接叶片与果穗均具致病性,说明这3种链格孢种均为葡萄叶斑病的病原菌;葡萄链格孢为主要的病原菌,有28株,故将该类病害命名为葡萄链格孢叶斑病;此外,该类菌株在2～40℃之间均能生长,25℃为最适生长温度。     

南疆骏枣黑斑病症状表现及病原菌鉴定

为明确南疆骏枣黑斑病的症状表现及病原菌种类,2013—2014年在新疆建设兵团第一师选取具有代表性的5个骏枣园,对枣叶、花、果等组织上黑斑病的症状进行了系统调查,采用组织分离法和回接试验分离病原菌及测定其致病性,并根据病菌形态特征、ITS序列和β-tubulin序列分析对病原菌进行了鉴定。结果表明:枣叶、花和果均可感染黑斑病菌,室内接种和田间骏枣黑斑病症状相同,叶、花和果中的病原菌可以相互侵染,并在枣果上均表现出黑斑病典型症状;不同发病组织中分离纯化得到357株菌株,形态观察表明,侵染叶、花和果的菌株均为链格孢属链格孢菌Alternaria alternata(Fr.)Keissler;通过ITS序列和β-tubulin序列分析,并结合形态学特征进一步确定引起骏枣不同组织的黑斑病病原菌为链格孢菌A.alternata。     

黄骅冬枣细极链格孢的分离鉴定

从黄骅冬枣发病叶片上分离到一株真菌L5-4-2,对其进行了菌落形态、分生孢子形态特征观察和致病性测试。ITS序列分析结果表明,该分离物L5-4-2与链格孢属(Alternaria sp.)(JN689942.1、JN545807.1、JF694748.1、MN115554.1)序列的相似性均在99.25%以上;ACT序列分析表明,分离物L5-4-2与细极链格孢(Alternaria tenuissima)在同一个分支,且Bootstrap支持率为100%。结合菌落形态特征、分生孢子形态特征及致病性测试结果 ,将其鉴定为细极链格孢[Alternaria tenuissima (Fr.) Wiltshire]。     

福建省柑橘褐斑病菌的分离、鉴定和系统进化分析

为明确在福建省南平市的橘柚和三明市的温州蜜橘上发现的疑似柑橘褐斑病的病原菌种类,采用组织分离法获得纯化菌株,通过回接法验证菌株的致病性,利用形态学特征对病原菌进行初步鉴定,并采用最大似然法以多聚半乳糖醛酸酶基因endoPG为靶标对本研究以及国内外已报道的链格孢菌株构建系统发育树,分析其遗传多样性。结果表明,从病组织中共分离获得26株纯培养菌株,经形态学鉴定均为链格孢菌Alternaria spp.。利用分生孢子液接种橘柚离体嫩叶发现,有22株菌株能侵染橘柚叶片并产生与田间相似的褐斑病症状,确认该病害为链格孢引起的柑橘褐斑病。系统发育树分析结果显示,分离所得的26株菌株均聚在已报道的4个柑橘链格孢进化分支Clade1～Clade4中,其中21株菌株聚在国内特有的分支Clade4中,有3株菌株和1株菌株分别聚在国内外兼有的分支Clade3和Clade1中,1株菌株聚在国外特有的分支Clade2中,表明在福建省采集的这些柑橘褐斑病菌均为链格孢菌,且遗传多样性较丰富。     

北京地区桃黑斑病新症状的发现与诊断

2019年-2020年在北京地区桃园病害调研普查时发现一种桃树病害的新发症状-新叶坏死,主要症状表现为当年新生枝条顶端新叶和生长点腐烂坏死。为明确这种新叶坏死症状是否由病原菌侵染引起,从北京平谷2个乡镇3个桃园采集35份病梢样品,经病样组织分离和菌株纯化,选取12个代表性菌株进行形态学鉴定、系统进化分析以及致病性测定。结果显示,通过形态学鉴定和多基因(ITS,Alt a1,gpd)系统发育分析,以上分离株均鉴定为链格孢Alternaria alternata;3株代表性菌株的致病性测定验证了A.alternata是引起新叶坏死症状的病原菌,并且该病原菌也能导致桃枝条和果实发病,产生黑斑病症状。这是首次报道A.alternata除了引起桃果实黑斑症状之外,还可以引起桃树新叶坏死症状,结果进一步丰富了链格孢侵染桃树的症状多样性,为链格孢引起的病害的整体防控提供了理论基础。     

三叶木通叶斑病病原菌鉴定

叶斑病是三叶木通生长过程中一种严重的病害.为明确引起叶斑病的病原,从三叶木通人工栽培基地叶斑病样本上分离病原菌,对病原菌进行致病性测定、显微形态与分子鉴定.结果表明,三叶木通叶斑病病原菌为链格孢属细极链格孢(Alternaria tenuissima).     

余庆县茶叶斑病致病菌Pestalotiopsis trachicarpicola鉴定及其生物学研究

为有效控制贵州省余庆县茶叶斑病的发生及为害,从该区域茶树叶部病害样品中分离纯化多个菌株,并对其中多个形态相似的分离物进行菌落形态、子实体、产孢细胞、分生孢子的形态观察.测定了核糖体转录间隔区(ITS)、微管蛋白(TUB2)和翻译延长因子1-α(TEF-1α)等核酸序列,采用PAUP软件及最大简约法,进行了多基因系统发育...     

用于虫生真菌遗传转化的苯菌灵抗性菌株筛选

发展虫生真菌的抗药性是协调生防与化防,稳定真菌杀虫剂应用效果的一个重要策略。本研究从代表性地区采集植物病原样本,分离得到35株菌株,鉴定为3属5种,即灰葡萄孢霉Botrytis cinerea、扩展青霉Penicillium expansum、指状青霉Penicillium digitatum、长柄链格孢菌Alternaria longipes和茄链格孢菌Alternaria solani。应用菌落直径法测定其对苯菌灵的抗性,结果表明：供试的11株灰葡萄孢霉菌株中,最高EC50为936.2670μg·mL^-1;12株青霉属菌株中,最高EC50为0.0384μg·mL^-1;12株链格孢菌株中,最高EC50为703.5557μg·mL^-1。其中灰霉和链格孢属菌株中有4株EC50大于600μg·mL^-1的高抗菌株,即灰葡萄孢霉的菌株SD2和SD1以及茄链格孢的菌株CC2-2和LF1-2,这4株菌株可作为遗传转化抗性基因克隆的基础材料。     

引起云南省珠芽魔芋叶斑病的链格孢菌种类鉴定

珠芽魔芋Amorphophallus bulbifer是我国西南地区广泛种植的一种特色经济作物,自2015年开始云南省德宏州及西双版纳州珠芽魔芋种植区发生了一种魔芋新病害。典型症状为早期叶片上出现具黄色晕圈圆形斑点,逐渐形成大斑块,最终整个叶片枯死。本研究采用温室接种致病性测定、形态及分子鉴定等方法对珠芽魔芋叶斑病病原进行研究。结果表明：从各种植区采集的37份叶部病样中分离得到37个生长较一致的真菌分离物;致病性试验证实,均为珠芽魔芋叶斑病病原菌,显微镜下观察该病原菌具有细极链格孢Alternaria tenuissima的形态特征;将其rDNA-ITS、EF-1ɑ和β-tubulin基因序列在GenBank中进行同源性比对分析显示,其序列与A.tenuissima的相似性为99%～100%,分子鉴定与形态学鉴定结果一致。这是国内首次发现由细极链格孢侵染所引起的珠芽魔芋叶斑病。     

安徽省茶树细菌性梢枯病病原鉴定

2017年-2018年在安徽省庐江、东至县茶园种植区发现一种茶树新病害——梢枯病,发病症状表现为顶芽枯死,嫩叶叶柄变褐,叶片枯萎.为明确庐江、东至县茶树梢枯病的病原菌,采用平板划线法和稀释涂布平板法分离病原,按照柯赫氏法则对病原细菌进行致病性测定,并利用细菌的表型特征和分子生物学技术确定病原菌的分类地位.结果表明,从茶...     

Identification of Alternaria spp. on wheat by pathogenicity assays and sequencing

The pathogenicity of Alternaria spp. isolated from wheat leaves collected in regions where alternaria leaf blight has been reported was compared with that of IMI reference isolates of A. triticina and A. alternata using two durum and two bread wheat genotypes. To identify isolates putatively corresponding to A. triticina , morphological and DNA sequence analyses based on ribosomal DNA from the internal transcribed spacer (ITS) region (ITS1, 5·8S rRNA gene, ITS2) and toxicity bioassays of culture filtrate were combined. Glasshouse inoculations provided reliable information to assess the pathogenicity of A. triticina isolates on wheat. Alternaria leaf blight symptoms were produced by the A. triticina isolates only on durum wheat cv. Bansi, while A. alternata , A. tenuissima and A. arborescens isolates were found to be nonpathogenic on the wheat cultivars tested. Alternaria triticina isolates were distinguished from other Alternaria species by Simmons and Roberts' sporulation pattern 6 and two to three conidia per sporulation unit associated with primary conidia bearing long (> 7  µ m) apical secondary conidiophores. Phylogenetic analysis also proved effective at discriminating wheat-pathogenic A. triticina from other nonpathogenic Alternaria species. Alternaria triticina isolates yielded longer ITS sequences than A. alternata , A. tenuissima and A. arborescens isolates, leading to clear-cut differences as visualized with agarose gel electrophoresis. Additionally, only culture filtrates of A. triticina isolates caused nonspecific necrotic lesions on leaves of 3-week-old wheat plants.     

山茱萸褐斑病病原鉴定

 山茱萸(Cornus officinalis)为山茱萸科(Cornaceae)山茱萸属植物, 其成熟干燥果肉(俗称枣皮)为我国常用名贵中药材。河南省南阳市(西峡、内乡和南召等县)为我国山茱萸主产区之一, 仅西峡县截止1990年已发展到500万株, 年产枣皮315万kg, 产值达4 200万元, 居全国首位。近年, 作者对西峡县山茱萸产区进行病害调查时发现, 由链格孢菌(Alternaria sp.)引起的山茱萸褐斑病发生普遍, 该病严重发生时可致植株95%以上叶片枯死, 落果率高达87%, 造成山茱萸大幅减产, 给当地果农带来严重经济损失。迄今, 未见链格孢菌引起的山茱萸病害报道。本研究对该病的病原菌进行分离鉴定, 以期为病害的防控提供依据。     

百香果疮痂病病原菌鉴定

To identify the pathogen causing scab disease on the fruit of Passiflora Linn. in the passion fruit yard of Cenxi and Nanning cities, Guangxi province. The scab tissues collected from diseased fruits were isolated,purified,and made pathogenicity test,morphological observation, biological and molecular identification. The representive isolate B31, obtained from the diseased fruit, was selected for morphological observation and pathogen identification, and was verified as the causal agent of the scab disease through Koch’s postulates. The result of morphological observation using light microscope showed that the isolate B31 was very similar to Alternaria in terms of hyphae and spore morphology. Phylogenetic analysis results using multiple gene loci showed that identities of sequences of ITS, Alt al, TEF 1 and endoPG genes of isolate B31 were 100% identical to those of Alternaria alternata. This study clarifies that the pathogen causing scab disease of passion fruit in Guangxi is A. alternata, and this is the first report of A. alternate causing scab on passion fruit in China.     

海南省不同寄主植物炭疽病菌侵染油茶研究

为了明确海南省不同寄主植物炭疽病菌侵染油茶的潜力,本研究分离、鉴定海南省4个油茶林中不同寄主植物的炭疽病菌种类及其致病性。结果从油茶、葛根、山麻杆、飞机草、蒲葵、鲫鱼胆、桃花心木、黄兰、羊蹄甲、山矾、银柴、降香黄檀和檀香等13种植物上,共获得135株炭疽病菌,其中果生刺盘孢菌(Colletotrichum fructicola)85株、暹罗刺盘孢菌(C.siamense)45株,盘长孢状刺盘孢菌(C.gloeosporioides)3株,君子兰刺盘孢(C.cliviae)和山茶刺盘孢(C.camelliae)各1株;4个采样地的油茶树与葛根等当地其他12种植物具有相同的炭疽病菌C.fructicola和C.siamense,这两种菌占总分离炭疽菌的96%;通过致病性测定,不同寄主来源的这5种炭疽菌均能引起油茶炭疽病。海南省当地多种植物的炭疽病菌是油茶的潜在侵染源。     

油梨苗期黑茎病病原菌的鉴定

正油梨(Persea americana Mill.)又名鳄梨、牛油果和樟梨等,为樟科、鳄梨属,原产中美洲,属热带、亚热带名贵果树之一~[1],具有营养价值高、风味好,其消费遍及全球,经济潜力巨大~[2]。目前关于国内外病害的报道,主要有根腐病、炭疽病~[3]、蒂腐病~[4]和褐斑病~[5]等。2017年5月,作者在海南省儋州市附近的苗圃中发现一种为害油梨苗茎基部的病害,发病率在15%～20%,严重时导致整株植物死亡。本研究对该病进行症状描述和     

花椒枯穗病病原鉴定

Ten Zanthoxylum bungeanum ear blight diseased samples were collected from the Research Base of Forestry Research Institute of Hebei Province of China during 2009. Three isolates were obtained from diseased samples and no distinct difference could be observed among them. The fungus E-1 was determined to be responsible for this disease by the Koch’s Postulation. Morphological and the phylogenetic tree constructed based on ITS sequences showed that the morphological characters were the same as Alternaria alternata and the homology between E-1 and A. alternata was up to 100 percent. It indicated that E-1 was A. alternate（JQ973810）.     

甘薯茎线虫rDNA-ITS1区的PCR扩增与序列分析

 利用PCR技术获得了甘薯茎线虫rDNA-ITS1区序列。序列分析表明,采自我国河北、山东、安徽的甘薯茎线虫16个地理种群的ITS1区序列分化为短型(S)和长型(L)2种基因型。山东费县芍药山乡4个地理种群为L型,ITS1区长度为466 bp;河北、安徽和山东费县新庄乡的12个地理种群为S型,ITS1区长度为288 bp。甘薯茎线虫与鳞球茎茎线虫(Ditylenchus dipsaci)的rDNA-ITS1序列同源性为52.0%~52.5%,与腐烂茎线虫(D.destructor)序列同源性为82.0%~85.4%;我国甘薯茎线虫不同地理种群间的序列同源性为96.6%~100.0%。     

马铃薯早疫病病原菌鉴定及其对不同药剂的敏感性

 为了明确马铃薯早疫病病原菌及其对不同药剂的敏感性,2009~2011年从河北省5个县采集180个早疫病样,以常规方法进行分离与纯化。根据病原菌的形态特征和致病性,结合其rDNA-ITS区域的序列分析对病原菌进行鉴定,并采用菌丝生长速率法测定病原菌对不同药剂的敏感性。结果分离到两种菌（A、B）,分离比例为4:6。致病性测定证实分离菌A和B均为马铃薯早疫病病原菌。经形态学鉴定,初步认定A为茄链格孢（Alternaria solani）,B为链格孢（Alternaria alternata）。采用通用引物ITS1/ITS4对病原菌A和B的rDNA-ITS序列区扩增并测序,通过与GenBank数据库比对,A与A.solani同源性为98%,B与A.alternata 的同源性达100%。两种病原菌对咯菌腈、吡唑醚菌酯、啶酰菌胺、苯醚甲环唑等药剂的敏感性差异极显著,而对异菌脲的敏感性差异不显著。因此,将河北省马铃薯早疫病菌鉴定为茄链格孢（A.solani)和链格孢（A.alternata）,二者对同一药剂的敏感性不同。     

侵染西葫芦的中国南瓜曲叶病毒的检测及序列分析

2019年山东种植的西葫芦上广泛发生病毒病,症状与之前常发症状有差异,发病植株叶片向下卷曲、黄化,植株矮化。为明确引起此次西葫芦病毒病的病原,我们以田间采集的10份西葫芦病叶为材料,进行PCR扩增并测序。测序结果显示扩增片段核苷酸序列与我国广东的中国南瓜曲叶病毒(SLCCNV)南瓜分离物(MW389917.1)一致性最高。根据同源序列设计引物,经PCR扩增获得SLCCNV全长序列,DNA-A 全长为2 730 bp(OM692270.1)、DNA-B 全长为2 711 bp(OM692269.1),经序列比对发现DNA-A序列与已登录的SLCCNV一致性为89.65%~99.42%,其中与我国广东的SLCCNV-GDHY南瓜分离物(MW389917.1)一致性最高,为99.42%;DNA-B序列与已登录的SLCCNV一致性范围为81.82%~97.29%,其中与我国广东的SLCCNV-GDHY南瓜分离物(MW389918.1)一致性最高,为97.29%。因此推测引发山东西葫芦病毒病的病原物是SLCCNV,由于该病毒是在山东西葫芦上首次发现,将其命名为SLCCNV-SD。前人已报道SLCCNV可侵染南瓜、甜瓜、烟草、番茄等作物,但SLCCNV可侵染西葫芦在国内未见报道。