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相似文献
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1.
用反转聚合酶链反应,从纯化的腺胃病变型鸡传染性支气管炎分离株病毒基因组RNA扩增出约1.7kb的IBV S1基因。将该扩增产物于HindⅢ和BamH I位点克隆到pUC18质粒载体中,对重组质粒载体进行酶切分析,得到与S1基因预期大小一致的插入片断。  相似文献   

2.
用聚合酶链式反应(PCR)技术,从金黄色葡萄球菌中扩增出769bp的编码SPA细胞壁跨膜区的编码序列。将扩增的片断克隆进pEZZ-18载体BamHI和sall位点之间。重组质粒转化大肠杆菌HB101后,根据酶切分析筛选到含有目的基因的重组质粒pZSPAX。序列测定结果表明,该重组质粒中的插入序列与已发表的SPA-X是一致的。通过水肿病毒素B亚单位(SLT-IIeB)基因(slt-IIeB)证实质粒pZSPAX能作为在细菌表面表达目的基因的载体。  相似文献   

3.
用 P C R 技术,从马立克氏病病毒( M D V) C V I988/ C 株感染的鸡胚成纤维细胞( C E F)基因组 D N A 中扩增出含起始密码子的 M D V pp 38 基因同源物编码序列。在以 Digoxigenin ( Dig.)标记的 pp38 基因作为探针,在 Southern blot中,该探针能识别该 P C R 扩增片段。将该 P C R 扩增片段在 Bam HⅠ和 PstⅠ位点克隆进 p U C18 质粒载体,酶切分析筛选到含 pp38 基因同源物的重组质粒并进行了全序列分析,证明该重组质粒是 pp 38 基因同源物克隆。  相似文献   

4.
应用RT-PCR方法扩增出番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)的σC基因,通过XhoⅠ+HindⅢ双酶切后把该基因插入到经过同样双酶切的穿梭质粒pShuttle-CMV载体中。重组穿梭载体经过双酶切和PCR鉴定后进行测序,序列测定正确,同源性为99.8%。将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染293细胞后获得重组腺病毒。PCR和RT-PCR鉴定的结果证明σC蛋白基因已成功插入到重组腺病毒载体中。  相似文献   

5.
本研究利用对应于PRRSVATCCVR-2332株及LV株ORF5基因保守序列的1对均为25个碱基的引物1005PS、1006PR对PRRSV中国分离株B13进行RT-PCR,扩增出了包括完整ORF5基因的DNA片段,片段长约730bp。将此片段定向克隆入pUC18载体的EcoRI和stI位点之间,获得了B13ORF5基因与pUC18载体的重组质粒。通过EcorI/PstI、EcorI/HindⅢ  相似文献   

6.
根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2) ORF1基因序列,设计合成了一对引物,扩增出PCV2新疆株ORF1基因片段.将扩增出的ORF1基因(945 bp)插入到pMD18-T载体中,筛选获得重组质粒,命名为pMD18-ORF1.将ORFI酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a中,获得重组质粒,命名为pET-...  相似文献   

7.
用PCR技术,从马立克氏病病毒(MDV)CV1988/C株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组DNA中扩增出含起始密码子的MDVpp38基因同源物编码序列,在以Digoxigenin标记的pp38基因作为探针,在Soulthern blot中,该探针能识别该PCR扩增片段。将该PCR扩增片段在BamH I和PstI位点克隆进pU18质粒载体,酶切分析筛选到含pp38基因同源物的重组质粒并进行了全序  相似文献   

8.
番鸭细小病毒M91G27株VP3基因的克隆与序列测定   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用PCR技术,从纯化番鸭细小病毒M91G27毒株鹅胚尿囊液中扩增出病毒结构多肽VP3基因。将该PCR扩增片段克隆入pUC18质粒载体的HincⅡ和SacⅠ位点之间,酶切分析筛选到含1.6kb基因片段的重组质粒MP13。结果表明:该片段与国外已报道毒株核苷酸序列有98.8%的同源性,氨基酸序列有98.1%的同源性,证明该重组质粒是VP2基因的克隆。  相似文献   

9.
含有IBV S1基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建   总被引:4,自引:0,他引:4  
以含有鸡传染性支气管炎病毒Holte株S1基因的重组质粒pUC18-S1.Holte和pUC18-S‘1.Holte为材料,分别构建了可表达IBV S1基因的昆虫杆状病毒转移载体质粒pSXIVVI^+X3-S1.Holte(含IBV先导序列),pSXIVVI^+X3/4-S1.Holte(IBV先导序列为融合短肽),pAcGHL-C-S1,Holte。  相似文献   

10.
报道了在两条引物的5′端加有不同酶切位点的IBVD41株S1基因PCR产物与pUC18进行分子克隆的研究情况。采用自己改进的微量基因克隆的方法,经回收的插入片段的分子量大小及HaeⅢ酶切分析,证明获得了两株重组质粒转化子  相似文献   

11.
以伪狂犬病毒TK^-/gI^-缺失疫苗株为亲本株提取病毒基因组DNA,克隆含gG基因的EcoR V/StuⅠ片断,用限制性内切酶BamHⅠ和NdeⅠ缺失gG基因,构成重组质粒pIRV。同时,分别将狂犬病病毒SRV9的株糖蛋白和绿色荧光蛋白克隆入载体pIRESneo,构建平行表达糖蛋白和绿色荧光蛋白表达盒。将表达盒插入到pIRV,构建gG基因缺失转移载体,为下一步同源重组获得伪狂犬病毒奠定基础。  相似文献   

12.
IBV S1基因RT—PCR产物的分子克隆   总被引:1,自引:0,他引:1  
报道了在两条引物的5‘端加有不同酶切位点的IBV D41株S1基因PCR产物与pUC18进行分子克隆的研究情况。采用自己改进的微量基因克隆的方法,经回收的插入片段的分子量大小及HaeⅢ酶切分析,证明获得了两株重组质粒转化子。  相似文献   

13.
根据GenBank发表的PCV2序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2 ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF2与伪狂犬病毒SA215株基因组共转染真核ST细胞,通过空斑纯化得到了表达猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因和绿色荧光蛋白基因的重组伪狂犬病毒SA215(C)。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的ORF2基因蛋白和绿色荧光蛋白。并且重组病毒及亲本株在同一细胞上的增殖滴度基本相同,表明EGFP和PCV2 ORF2基因的插入不影响PRV SA215的增殖。该重组病毒可作为猪Ⅱ型圆环病毒和伪狂犬病毒候选疫苗毒株。  相似文献   

14.
以伪狂犬病毒TK-/gI-缺失疫苗株为亲本株提取病毒基因组DNA,克隆含gG基因的EcoRⅤ/StuⅠ片断,用限制性内切酶BamHⅠ和NdeⅠ缺失gG基因,构成重组质粒pIRⅤ。同时,分别将狂犬病病毒SRV9的株糖蛋白和绿色荧光蛋白克隆入载体pIRESneo,构建平行表达糖蛋白和绿色荧光蛋白表达盒。将表达盒插入到pIRⅤ,构建gG基因缺失转移载体,为下一步同源重组获得伪狂犬病毒奠定基础。  相似文献   

15.
利用IBV全长S1基因特异性引物,以纯化的3个标准株M41、H52、T和6个地方分离株(QD、ZZ、GZ、GJ、DL和YC)的基因组RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出预期大小约1.73kbcDNA片段,经BAMHI和HindⅢ酶切插入到质粒pUC18中,并在大肠杆菌JM83中实现了克隆。对6个分离株的S1基因PCR产物进行HaeⅢRFLP分析,表明QD、TJ属于M41基因型,ZZ和GZ与T基因  相似文献   

16.
以本实验室从河北分离到的TGEV毒株,采用RT-PCR技术扩增了TGEV N基因,长为1149bp,并进行亚克隆重组到pMD18-T质粒载体上,连接,转化,鉴定后得到阳性重组质粒.命名为pTN.将重组质粒插入的片段进行序列分析和比较,结果表明TGEV河北分离株N基因与国外的Purdue-115、FS772/70、TO14、96-1933株均具有较高的同源性,达95%以上。推导的氨基酸序列同源性为95%以上。并将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-3重组,成功构建了原核表达载体pGEX-N。pGEX-N表达载体的构建,为其蛋白质的表达提供重要依据。  相似文献   

17.
选用土壤新分离株S18-4为供体菌,以PHT3101穿梭质粒为载体,载体和供体DNA用Pstl酶切后进行连接,用电激法将重组质粒转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Btk·BE20中。经SDS-PAGE蛋白电泳及扫描电镜观察,证明δ-内毒素基因得到了表达,并具有很高的表达量。生物测定结果显示,重组株对夜蛾科幼虫具有比野生株S18-4更强的杀虫毒性。  相似文献   

18.
采用RT-PCR技术扩增禽呼肠孤病毒ARV S1133毒株和广西分离株R1的δ2基因,将δ2基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)载体上,对获得的重组质粒经PCR酶切以及序列分析鉴定.结果表明,插入的片段为δ2目的基因,插入的位置、大小和阅码框架均正确,成功构建了真核表达载体重组质粒peDNA-S1133-δ2、...  相似文献   

19.
将拟南芥ATLP-3基因从质粒pUCTL亚克隆到植物表达载体pBI121中,得到了质粒命名为pBITL。被亚克隆到重组质粒pBITL的ATLP-3基因通过农杆菌LBA4404介导法导入烟草(Nicotiana tobacco L.var Gexin No.1)。通过卡那霉素抗性筛选,得到19株再生烟划植株。PCR(用根据CaMV35s启动子和NOS终止子序列合成的引物)分析表明,ATLP-基因是在  相似文献   

20.
将甜菜碱醛脱氢酶基因BADH和植物表达载体pGMAR通过内切酶BamHI和KpnI双酶切,T4连接酶进行连接反应。重组质粒在大肠杆菌菌株DH5α内扩增,提取并纯化质粒。经鉴定,基因BADH已被完整、正确的插入到pGMAR载体中,并成功将BADH插入到载体pGMAR的两个MAR序列之间。  相似文献   

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