牛源金黄色葡萄球菌凝固酶基因的分型

为了了解我国不同地区奶牛场金黄色葡萄球菌基因型的分布情况,采用凝固酶基因（Coa）扩增的分型方法,对在奶牛乳房炎奶样中所分离到的26株金黄色葡萄球菌进行了分型。结果显示,26株金黄色葡萄球菌共分为5个基因型,黑龙江省分离株以PCR 3型为主（10/16）。发现在同一牛群中的分离株可以存在相同的基因型,也可以存在不同的基因型;而不同牛群中的分离株也可属于同一基因型。这种结果提示,在某个或某些牛群中存在某一金黄色葡萄球菌的流行型,但也可能存在多个金黄色葡萄球菌的克隆。     

不同凝固酶基因型牛源金黄色葡萄球菌主要致病因子的检测及分析

采用PCR的方法对不同凝固酶基因型的30株奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的主要致病因子进行检测，包括α溶血素（α-hemolysin）、β溶血素（β-hemolysin）、白细胞毒素F（LukF）、白细胞毒素S（LukS），结果显示：在28株分离株中检测到LukF和LukS；在8株和3株分离株中检测到β、和α溶血素，其分别占分离株的93％、26．7％和10％。这些致病因子在各基因型菌株间的分布并不表现出相关性，而是广泛的分布在各个基因型菌株间。     

金黄色葡萄球菌基因分型方法研究进展

金黄色葡萄球菌是引起医院和社区感染的重要致病菌之一,也是引起奶牛乳房炎的重要致病菌。为有效控制其感染及流行,并为临床采取控制措施提供理论依据,需要对菌株进行分型。本文就金黄色葡萄球菌的基因分型方法研究进展作一综述。     

奶牛乳房炎样品金黄色葡萄球菌分离株的基因分型

为了掌握上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌基因型,本文采用ERIC-PCR分型方法,对从患有乳腺炎的奶牛乳汁中分离所得的74株金黄色葡萄球菌进行了基因分型。结果显示,74株金黄色葡萄球菌可扩增出4~9条带,共分为4个聚类群,亲缘关系相同或相近的菌株占97.7%。发现在同一牛群中的分离株可以是相同的基因型,也可以存在不同的基因型,而不同牛群中的分离株也可属于同一基因型。但总的来说,上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌多为同一基因型,在某个或某些牛群中存在金黄色葡萄球菌的优势基因型,而不同地区、不同环境和条件下同一种病原菌的基因型也存在一定差异,可能存在多个金黄色葡萄球菌基因型。     

牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌研究进展

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的最主要病原菌之一。然而,在治疗奶牛乳房炎的过程中由于抗生素滥用,造成乳汁中药物残留及耐药菌株增多。近年来,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率逐年呈上升趋势,成为危害人畜健康的重要致病菌之一。同时也给奶牛乳房炎的治疗带来巨大的挑战。论文对牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法、流行病学、致病性及致病因子、耐药机制、预防与治疗措施及未来发展前景及展望进行了综述,希望为深入研究MRSA,减少其耐药性,研制有效的药物和疫苗起到参考作用。     

我国牛源金黄色葡萄球菌耐药现状及药敏检测方法探讨

为调查我国牛源金黄色葡萄球菌的临床耐药现状,对2009年以来新疆、浙江、山东、内蒙古和上海五省区不同地方分离的120株金黄色葡萄球菌用纸片扩散法进行临床药敏试验。结果显示,新疆分离株对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素耐药,22%的菌株对头孢西丁耐药,43%的对氯霉素耐药,64%的对环丙沙星耐药,58%的对庆大霉素耐药;其它4地区分离株耐药情况更为严重,除头孢西丁以外,对其它9种抗生素均耐药。对菌株的多重耐药情况分析发现,新疆分离株中对5种以上抗生素耐药的占86.1%,对10种抗生素完全耐药的占17.4%;而内地分离株的数据为100%和38.2%。此外,在试验中鉴定出33株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,新疆19株,占新疆菌株的22.1%,内地四地区14株,占内地分离株的41.2%。结合2005~2009年间发表的相关耐药数据的分析结果,研究显示,我国牛源金黄色葡萄球菌呈现多重耐药,且出现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,并在不同地区分离株中占有一定的比例;研究还发现,新疆分离株与浙江、山东、内蒙古和上海四地分离株的耐药情况有较大差异。此外,在整理药敏试验资料时,发现在金黄色葡萄球菌药敏试验中,药物的选择没有遵循选药规则,试验操作不规范和试验结果的报告不规范等问题,对此提出一些探讨性建议,供试验人员参考。     

牛源金黄色葡萄球菌16SrRNA分子鉴定与随机多态性扩增分型

利用16S rRNA保守序列对引起内蒙古地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,并且建立引物随机多态性扩增(RAPD)体系对金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究.结果表明,共分离出金黄色葡萄球菌35株,RAPD结果显示这35株菌均可得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物在1～8条带之间,产物大小在350～4 500bp之间.菌株分为6个基因型,Ⅳ型为该地区的流行优势菌群.不同牛场各基因型菌株分布有明显差异,这与牛场的环境和病原菌在牛场间流行传播情况有关.研究结果为地区性奶牛乳房炎的防治及新疫苗的研制提供了可靠的理论依据.     

牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离鉴定

从奶牛分离得到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methieillin—resistant Staphylococcus aureus,MRSA）。按常规方法复苏菌株,用血浆凝固酶试验鉴定SA。用KB法、琼脂筛选法、生化鉴定法（VITEK32）、聚合酶链反应等鉴定MRSA。常规分离鏊定的葡萄球菌468株,其中凝固酶阴性葡萄球菌（coagulase negative Staphylococcus,CNS）361株,检出率为77．149,6,金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）105株,检出率为22．44％,MRSA36株检出率为34．29％,2株未定型,占0．42％。而MRSA在乳房炎奶样中检出率高达34．29％,表明新疆兵团部分垦区牛场MRSA已经呈蔓延趋势。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌脉冲场凝胶电泳分型研究

为探讨新疆北疆奶牛乳房炎致病菌的流行规律,本研究采用Sma Ⅰ酶切,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型的方法对43株分离自新疆6个规模奶牛场隐性乳房炎奶样的金黄色葡萄球菌进行了分子分型比较研究.结果表明,所有菌株都能被PFGE法分型,43株金黄色葡萄球菌可分为A、B、C、D和E 5个基因型.A型株(22株,51.2%)有13个亚型,相似度在81.8%～96.8%之间,在5个奶牛场均分离到,是主要的流行株;B型(25.6%)、C型(14.0%)、D型(7.0%)各型别内菌株间的相似度为100%,E型仅有1株.不同地区主要流行株有差别:乌鲁木齐主要流行A型菌株,昌吉以A型和B型菌株为主,而奎屯主要流行C型和B型.有2个奶牛场流行株只有1个基因型,也有2种基因型(3个牛场)或3种基因型(1个牛场)同时存在,但以1种为优势株.这些结果提示,不同地区主要流行株有差别,多数奶牛场以1种流行株感染为主,不同牛场可能流行相同的菌株,在较大地域范围内某些流行株具有侵染优势.     

MLVA方法对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分型研究及效果评价

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分型对预防菌株在牛体之间传播、了解菌株地域性分布特点及针对性疫苗的研制均有重要的意义。本研究旨在将多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)法应用于国内乳房炎金葡菌的分型研究,以进行分子流行病学调查。同时,将其与16-23SrRNA基因间区分析法(RS-PCR)的分型结果比较,以评价MLVA法对乳房炎金葡菌的分型效果。作者建立MLVA方法(多重PCR体系)对27株乳房炎金葡菌进行分型,同时应用RS-PCR法进行分型。结果2种方法均可将8个地区17个牛场分离到的27株菌全部分型,分型率为100%。MLVA法将菌株分为19个型,不同牛场来源的金葡菌均属于不同型,相同牛场来源的菌株除上海和北京某牛场外均属于相同型;此方法的分型力为0.969。RS-PCR法将菌株分为10个型,其中Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ型菌株均来源于不同地区,分型力为0.829。结果显示,MLVA分型法具有快速、操作方便和分型能力强等特点,可应用于乳房炎金葡菌的分子流行病学研究。同时,研究表明,我国不同牛场的乳房炎金葡菌具有型特异性,该结果与少数优势型金黄色葡萄球菌引起绝大多数乳房炎的报道相反。     

我国部分地区奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌血清型及毒力调查

为了解我国奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌(S.aureus)流行血清型和不同血清型菌株的毒力情况,本研究采用玻板凝集和双重PCR方法分别对北京、山西、内蒙古、山东、浙江和新疆奶牛乳房炎乳样中分离的191株S.aureus进行血清分型并从各血清型中随机选取100株菌以小白鼠进行毒力测定.结果表明:这些地区牛源S.aureus中,336PS型为流行血清型,占60.2％(115/191),CP8型占19.4％(37/191),CP5型占11.5％(22/191),未分型菌株占8.9％(17/191).毒力测定显示:336PS、CP8和CP5型菌株中强毒力菌株分别占65.1％、62.9％及61.9％,未分型菌株中强毒力菌株为22.2％.该调查为我国奶牛乳房炎S.aureus疫苗菌株的筛选提供了依据.     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌基因多态性分型试验

利用随机引物AP-7,建立引物随机多态性扩增(RAPD)体系对71株引起内蒙古和贵州地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,71株金黄色葡萄球菌均得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物为2～9条带,产物大小为240～4 500bp。菌株共分为6个基因型,其中Ⅰ型17株(占23.9%)、Ⅱ型3株(占4.2%)、Ⅲ型33株(占46.5%)、Ⅳ型15株(占21.1%)、Ⅴ型2株(占2.8%)、Ⅵ型2株(占2.8%)。Ⅰ型为内蒙古地区的流行优势菌群,Ⅲ型为贵州地区的流行优势菌群。两地区各基因型菌株比例有明显差异,这可能与奶牛养殖业水平和环境差异有关。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定

为检测江苏省某奶牛场中乳房炎是否为金黄色葡萄球菌所致,采取4份患病乳汁样本进行试验分离和鉴定,并针对金黄色葡萄球菌采用分离后鉴定,结果显示,分离到的2株致病菌为金黄色葡萄球菌,其他菌株还包括大肠杆菌、肠球菌等,为多种致病病原菌同时引起,主要为金黄色葡萄球菌感染。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌8种毒力基因的PCR检测

为研究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)主要毒力因子的分布情况,本试验利用PCR对70株临床型乳房炎、55株隐性乳房炎金黄色葡萄球菌的8种主要毒力基因进行检测。结果显示,nuc、ClfA、TSST-1、PVL、Hla、Hlb、FnBPA和FnBPB 8种毒力基因在临床型乳房炎SA菌株中的检出率分别为:100.0%(70株)、100.0%(70株)、0(0株)、5.7%(4株)、100.0%(70株)、11.4%(8株)、97.1%(68株)和100.0%(70株);在隐性乳房炎SA菌株中的检出率分别为:100.0%(55株)、100.0%(55株)、0(0株)、70.9%(39株)、98.2%(54株)、9.1%(5株)、100.0%(55株)和100.0%(55株)。结果表明,nuc、ClfA、Hla、Hlb和FnBPA 5种毒力基因是引起奶牛乳房炎的SA的最主要毒力基因;PVL基因可能是引起隐性乳房炎的重要致病基因。     

Prediction of penicillin resistance in Staphylococcus aureus isolates from dairy cows with mastitis,based on prior test results

AIM: To gauge how well prior laboratory test results predict in vitro penicillin resistance of Staphylococcus aureus isolates from dairy cows with mastitis.

METHODS: Population-based data on the farm of origin (n=79), genotype based on pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) results, and the penicillin-resistance status of Staph. aureus isolates (n=115) from milk samples collected from dairy cows with mastitis submitted to two diagnostic laboratories over a 6-month period were used. Data were mined stochastically using the all-possible-pairs method, binomial modelling and bootstrap simulation, to test whether prior test results enhance the accuracy of prediction of penicillin resistance on farms.

RESULTS: Of all Staph. aureus isolates tested, 38% were penicillin resistant. A significant aggregation of penicillin-resistance status was evident within farms. The probability of random pairs of isolates from the same farm having the same penicillin-resistance status was 76%, compared with 53% for random pairings of samples across all farms. Thus, the resistance status of randomly selected isolates was 1.43 times more likely to correctly predict the status of other isolates from the same farm than the random population pairwise concordance probability (p=0.011). This effect was likely due to the clonal relationship of isolates within farms, as the predictive fraction attributable to prior test results was close to nil when the effect of within-farm clonal infections was withdrawn from the model.

CONCLUSIONS: Knowledge of the penicillin-resistance status of a prior Staph. aureus isolate significantly enhanced the predictive capability of other isolates from the same farm. In the time and space frame of this study, clinicians using previous information from a farm would have more accurately predicted the penicillin-resistance status of an isolate than they would by chance alone on farms infected with clonal Staph. aureus isolates, but not on farms infected with highly genetically heterogeneous bacterial strains.     

牛源金黄色葡萄球菌生物被膜与毒素基因检测及agr分型

旨在对牛源金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）的生物被膜、耐药性、毒素基因和agr基因型进行研究,并分析agr基因型与毒素基因之间的相关性。分别用微量滴定板法、药敏纸片法和PCR对S.aureus的生物被膜、耐药性和毒素基因进行检测,用多重PCR对S.aureus进行agr分型。结果表明,336株牛源S.aureus均能形成生物被膜,其中,形成中等（++）和强（+++）生物被膜的S.aureus分别占52.1%和47.9%。药敏试验结果显示,S.aureus对青霉素耐药最为严重,耐药率达91.7%,其次是红霉素、卡那霉素、克林霉素和庆大霉素,耐药率分别为89.6%、72.9%、66.7%和60.4%,而所有S.aureus对呋喃妥因和利奈唑胺均表现为敏感。PCR检测结果显示,黏附素基因fnbA检出率最高,达99.7%,其次是icaD、icaA、clfA和cna,检出率分别为98.2%、89.6%、86.0%和56.0%,bap基因检出率最低,为14.6%。肠毒素基因sea的检出率为26.5%,其次是seb（8.3%）和sec（6.8%）,毒素基因tst的检出率占8.3%。分型结果显示,agr Ⅰ型S.aureus是主要的流行菌株,占77.1%,agr Ⅱ、agr Ⅲ和agr Ⅳ型S.aureus流行率分别为14.0%、4.8%和2.1%。统计分析结果表明,agr Ⅰ型S.aureus更具有携带多种毒素基因的潜力,而agr Ⅳ型S.aureus无毒素基因携带潜力。综上表明,牛乳腺炎性S.aureus对常见的抗菌药物耐药严重,毒素基因分布多样,agr Ⅰ型是奶牛乳腺炎性S.aureus主要的基因型,且具有携带多种毒素基因的能力,其潜在威胁应引起重视。     

Investigation of Biofilm Formation,Virulence Genes and agr Typing of Staphylococcus aureus from Bovine Mastitis Cases

The objective of the present study was to investigate the biofilm formation, antimicrobial resistance, virulence genes, and agr genotypes of Staphylococcus aureus (S. aureus) isolated from bovine mastitis cases, and to analyze the correlations between agr genotypes and virulence genes. Biofilm formation, antimicrobial resistance, and virulence genes for 336 strains of S. aureus were detected by microtiter plate method, disk diffusion method, and PCR respectively, and the agr typing of tested strains was determined by multiplex PCR. The results showed that all 336 strains of S. aureus from bovine mastitis were biofilm producers, among which 52.1% and 47.9% of isolates tested were moderate (++) and strong (+++) biofilm producers, respectively. Antimicrobial susceptibility testing demonstrated that S. aureus strains were highly resistant to penicillin, with a resistance rate of 91.7%, followed by erythromycin (89.6%), kanamycin (72.9%), clindamycin (66.7%) and gentamicin (60.4%). However, all isolates were sensitive to nitrofurantoin and linezolid. PCR results showed that the prevalence of fnbA gene was the highest (99.7%), followed by icaD (98.2%), icaA (89.6%), clfA (86.0%), cna (56.0%), and bap (14.6%) genes. Moreover, the sea, seb, sec and tst genes were found in 26.5%, 8.3%, 6.8% and 8.3% of the isolates, respectively. The agr typing results showed that S. aureus strains belonging to agr Ⅰ was predominant in our study, accounting for 77.1% of the isolates, and the frequencies of agr Ⅱ, agr Ⅲ and agr Ⅳ genotypes were 14.0%, 4.8% and 2.1%, respectively. Statistical analysis indicated that the strains of S. aureus belonging to agr Ⅰ genotype have the potential to carry more virulence genes, while no toxin genes could be found in any of the strains belonging to agr Ⅳ. The results revealed high antimicrobial resistance to common antimicrobial agents in S. aureus isolated from bovine mastitis milk samples. Moreover, agr Ⅰ was the predominant genotype with diverse toxin genes in S. aureus from bovine mastitis, and the potential hazard should be of concern.     

贵州地区牛源金黄色葡萄球菌分离株16S rRNA分子鉴定及RAPD分型研究

利用16S rRNA保守序列对引起贵州地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,建立随机多态性扩增体系对金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,69份奶样中共分离出金黄色葡萄球菌37株,DNA随机多态性扩增（random amplified polymorphic DNA,RAPD）结果显示这37株金黄色葡萄球菌扩增产物在1～7条带之间,产物大小为400～4500 bp。菌株可分为7个基因型,其中Ⅰ型7株（18.9%）、Ⅱ型2株（5.4%）、Ⅲ型2株（5.4%）、Ⅳ型1株（2.7%）、Ⅴ型19株（51.4%）、Ⅵ型1株（2.7%）、Ⅶ型5株（13.5%）,Ⅴ型为该地区的流行优势菌群。地理和气候环境对病原菌流行传播的影响是病原菌基因型分布差异的重要原因。