大豆7S伴大豆球蛋白和11S球蛋白亚基分析

将大豆7S伴大豆球蛋白和11S球蛋白经粗提后用A-PAGE进行纯化,目的是为了简化分离步骤,提高蛋白纯度,并对其亚基进行SDS-PAGE分析。结果表明,提纯后的两种蛋白纯度均达到99%,在SDS-PAGE图谱中7S伴大豆球蛋白由三个亚基组成,其分子量分别为77 740 Da,72 123 Da和56 242 Da;11S球蛋白也由三个亚基组成,其分子量分别为40 459 Da,35 787 Da和17 505 Da。     

间接竞争ELISA检测大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白

采用酸沉淀、亲和层析(ConA-Sepharose 4B)等手段,成功地分离纯化了大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白,SDS-PAGE检测表明2种蛋白纯度分别达到95%和90%。将纯化的11S球蛋白和7S伴球蛋白分别免疫大白兔获得抗血清,并建立起间接竞争ELISA检测大豆豆粕及其深加工产品中11S和7S抗原蛋白含量的方法。     

挤压大豆提取7S、11S球蛋白试验

文章研究了浸提液pH、离心机转数、离心分离温度3个因素对挤压大豆的7S和11S球蛋白收得率的影响规律。结果表明,在试验范围内浸提液pH越高,离心机转数越高,离心分离温度越低,越有利于7S、11S球蛋白的分离提取。     

大豆7S与11S球蛋白QTL元分析及候选基因挖掘

大豆蛋白作为重要营养来源,其含量在大豆种子中约占40%。7S球蛋白（b-伴大豆球蛋白）和11S球蛋白（大豆球蛋白）约占种子总蛋白70%,其含量直接影响大豆蛋白品质及特性。因此,大豆7S与11S球蛋白含量相关QTL定位与候选基因挖掘非常重要。研究调查国内外已报道的42个7S与11S球蛋白相关QTL数据,通过利用BioMercator ver.2.1软件对其进行元分析得到11个Meta-QTL区间。利用《京都基因与基因组百科全书》和基因本体数据库分析Meta-QTL区域基因,确定18个参与调控7S与11S球蛋白含量的相关基因作为候选基因,该候选基因分别参与植物生长发育、氨基酸生物合成等过程。其中1个基因被注释为编码2S白蛋白超家族蛋白,6个基因与蛋白质合成相关细胞器的生长发育相关,5个基因被注释为编码影响贮藏蛋白积累的转录因子家族蛋白,6个基因与贮藏蛋白运输的分子机制相关。研究结果对大豆7S和11S球蛋白相关QTL定位及分子辅助育种具有重要意义。     

浙江省大豆种质资源蛋白亚基构成分析

以杭州国家大豆改良分中心保存的321份浙江省大豆资源为研究材料,利用SDS-PAGE电泳技术,对其贮藏蛋白中7S和11S球蛋白及其亚基的相对含量(占总蛋白比例)进行了系统的分析。结果表明：浙江省大豆资源7S蛋白亚基相对含量变化范围在0.152～0.371;11S蛋白亚基相对含量变化范围在0.428～0.794;11S/7S比值介于1.269～4.008,平均值为2.289,其中蛋白含量高于45.0%,11S/7S比值高于3.5的有7份种质。不同大豆资源蛋白亚基组成和相对含量存在显著差异。相关分析表明,11S与7S蛋白亚基相对含量呈极显著负相关。在试验中还发现4份大豆资源均表现为7S球蛋白α′,α亚基含量较低,并且在30 kD至17 kD间出现未知小分子肽。依据浙江省大豆生态区域划分,浙北地区大豆贮藏蛋白11S/7S比值平均值最高;浙南地区大豆7S和11S相对含量变异系数高于浙北和浙中地区。     

大豆11S/7S球蛋白比值QTL定位及相关基因分析

11S球蛋白与7S球蛋白是大豆贮藏蛋白主要成分,对大豆营养品质及加工特性有显著影响,且11S球蛋白对大豆营养品质及加工特性影响优于7S球蛋白,两者蛋白含量呈负相关.因此,大豆11S/7S球蛋白比值性状相关QTL位点与候选基因挖掘尤为重要.研究选用181个株系染色体片段代换系群体(Chromosome segment substitution lines,CSSL),采用完备区间作图法(Inclusive composite interval mapping)作11S球蛋白与7S球蛋白比值QTL定位,获得3个与大豆11S/7S球蛋白比值相关QTL.在两个共识QTL区间内,获得6个候选基因,通过实时荧光定量PCR验证,Glyma.09G015100在低、高表型材料中相对表达量均高于对照材料,表明该基因在球蛋白表达过程中有促进作用.研究结果为大豆11S球蛋白与7S球蛋白比值QTL精细定位及适用于加工品种选育提供理论依据.     

7S大豆球蛋白α-亚基的原核表达及分离纯化

为制备重组7S大豆球蛋白α-亚基,构建重组表达质粒pET-28a-α并导入大肠杆菌.对重组蛋白的表达条件进行筛选,在OD600为0.6,30℃培养9h的培养液中,目的 蛋白占总蛋白的25.83％.采用镍亲和色谱柱和含350 mmol/L咪唑的磷酸盐缓冲液进一步纯化.在毫克级范围内获得纯度达70.0％的目标蛋白,为进一步...     

大豆种子贮藏蛋白组份11S/7S研究概况

大豆种子贮藏蛋白组份１１Ｓ７Ｓ研究概况王金龙陈存来（山东省农业科学院作物研究所济南２５０１００）目前,世界上人类所得到的蛋白质８０％来源于植物蛋白,其中１６％来源于大豆〔１〕。大豆是蛋白质含量最高的作物之一,栽培大豆蛋白质含量一般为４０％左右,野生...     

大豆7S、11S球蛋白亚基缺失突变体豆腐加工特性的鉴定

以4份7S、11S球蛋白不同亚基组成大豆种质为试材,采用小样本大豆加工方法制作豆腐,测定其豆腐产量、豆腐干重(DTW)、豆腐蛋白含量(PC)、豆腐硬度和豆浆蛋白率(RPA)等豆腐品质指标.并分析和鉴定其豆腐加工特性来明晰以上四种大豆种质在豆腐品质加工上的利用潜力.结果表明,大豆7S球蛋白亚基表现分别为:α'-亚基缺失,...     

温度对黑龙江大豆主栽品种球蛋白的影响

利用SDS-PAGE方法分析6个温度梯度对黑龙江6个主栽大豆品种的7S和11S球蛋白含量的影响.结果表明:7S和11S球蛋白呈显著正相关的关系.7S和11S球蛋白含量在品种间和地点间差异均极显著.品种和温度互作7S和11S球蛋白含量均不显著.6个品种中绥农10、黑农35、东农42和东农46营养价值较高,为今后优质品质资源的筛选和优质新品种的选育提供了参考价值.     

大豆籽粒贮藏蛋白11S/7S比值与生态因子相关关系的研究

 2001～2002年在河南省夏大豆主产区的5个试点，以豫豆25号为材料分13期播种，将109个大豆样本的11S/7S比值与气象、土壤养分和海拔、纬度等29个生态因子进行了逐步回归统计分析。结果表明，6个生态因子与大豆11S/7S比值密切相关。并明确了在夏大豆鼓粒成熟期较低的昼夜温差有利于提高11S/7S比值，鼓粒成熟期日照时数与11S/7S比值呈二次曲线关系，当日照时数在110.8 h时，11S/7S比值最小，当日照时数在459.2h时，11S/7S比值最大；在幼苗期较高的均温和较小的昼夜温差有利于提高11S/7S比值；分枝期较大的昼夜温差利于提高11S/7S比值；土壤中钾含量与11S/7S比值呈二次曲线关系，较低的土壤钾含量有利于11S/7S比值的提高，当土壤钾含量在1.32%时，11S/7S比值最小, 当土壤钾含量在0.83%时，11S/7S比值最大。在本试验研究范围内，其它生态因子对大豆11S/7S比值无显著影响。     

大豆7S与11S组分酶解物混合蛋白在猪肉肠中的应用研究

[目的]研究适合猪肉肠加工的专用蛋白。[方法]以中豆36为原料,以质构特性、肉肠得率为评价指标,比较了添加不同比例和不同添加量的7S与11S组分酶解物混合蛋白对肉肠品质的影响。[结果]添加不同比例7S与11S酶解蛋白的肉肠质构特性优于仅添加7S酶解蛋白或仅添加11S酶解蛋白的肉肠。当7S与11S酶解蛋白的添加比例为3∶1时,肉肠的质构特性最佳,且肉肠的得率最高。7S与11S酶解蛋白的添加比例不变,当混合蛋白的添加量为0.5%时,肉肠的质构特性最佳。混合蛋白的添加量为2.0%时,肉肠的得率最高;添加量为0.5%时,肉肠的得率次之。正交试验的结果表明,当7S与11S酶解蛋白的添加比例为3.5∶1,混合蛋白的添加量为0.5%时,肉肠的得率与质构特性均最佳。[结论]7S与11S复配酶解蛋白可以显著地改善肉肠的质构特性和得率。     

大豆多糖提取工艺优化

大豆多糖是大豆中的有效活性成分之一,具有抗氧化性、提高食品稳定性等作用.以豆渣为材料,采用不同的超声波处理时间、料液比、水提取温度和水提取时间进行单因素试验,然后在此基础上采用四因素三水平L_9(3~4)的正交试验对水溶性大豆多糖的提取条件进行优化.结果表明:超声波处理时间对水溶性大豆多糖提取率的影响最大,其次是水提取时间,再次是水提取温度,最后是料液比.水溶性大豆多糖提取的最优工艺参数是:超声波处理时间为20 min、水提取时间为4 h、水提取温度为80℃、料液比为1:40,在此条件下大豆多糖提取率为3.54%.经苯酚-硫酸法测定,所提取的大豆多糖纯度为96.58%.     

枣树叶片蛋白质提取及SDS-PAGE单向电泳条件优化

[目的]对枣树叶片蛋白质提取方法及其SDS-PAGE单向电泳条件进行优化。[方法]对枣树5种蛋白质提取方法和影响SDS-PAGE单向电泳的因素进行比较研究。[结果]改良丙酮沉降法提取出的蛋白质杂质较少,条带数量多且清晰,同时通过研究确定了一套适用于枣树蛋白检测的SDS-PAGE凝胶制备及电泳方法。[结论]该研究为进一步从分子生物学的角度研究枣树与枣疯病植原体的互作机制提供了技术的基础。     

大豆蛋白质提取工艺中碱溶pH值的简单效应分析

研究了提取大豆蛋白质工艺中pH值对蛋白质提取率及得率的简单效应,结果表明:①在料水比1∶10、酸沉pH值4.3、离心速度4 000 r/min、碱溶pH值9.5、碱溶时间为45 min的条件下,蛋白质平均提取率最高为66.49%。在pH值7.5~9.0之间,碱溶pH值对蛋白质提取率的简单效应为2.88%;在pH值9.0~10.0之间,简单效应下降直至为负值。方差分析表明,各处理间蛋白质提取率差异极显著;新复极差测验表明,pH值7.5~9.0之间时,各处理的蛋白质提取率差异极显著,pH值9.0~10.0之间时,差异不显著。②同样条件下,蛋白质平均得率最高为37.23%。在pH值7.5~9.0之间,碱溶pH值对蛋白质得率的简单效应为2.33%;在pH值9.0~10.0之间,简单效应下降直至为负值。方差分析表明,各处理间蛋白质得率达显著水平;新复极差测验表明,pH值7.5~8.5之间时,各处理间的蛋白质得率差异显著,pH值8.5~10.0之间时,差异不显著。③在不考虑其他因素时,为了取得碱溶pH值的最大简单效应,宜选择9.0作为碱溶pH值参数。     

山西不同品种大豆贮藏蛋白提取及亚基分析

用不同盐缓冲溶液分别提取大豆贮藏蛋白,对提取效果分析比较,结果表明,Tris-HCl(pH 7.8)缓冲溶液的提取方法最为合适;在确定提取方法的基础上,对山西不同品种大豆的贮藏蛋白进行了SDS-PAGE分析,电泳图谱显示,不同品种间贮藏蛋白亚基在数量和含量上有较大差别。     

适于SDSPAGE分析的高粱叶片蛋白质提取方法

为了探索适于高粱叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,对TCA/丙酮沉淀后的蛋白质分别用裂解液Ⅰ(尿素+硫脲+CHAPS+DTT)和裂解液Ⅱ(尿素+DTT)2种裂解液进行裂解,用改良的Bradford法进行定量分析,并进行SDS-PAGE分离检测。结果表明,裂解液Ⅰ所得蛋白质质量浓度(2.538g/L)高于裂解液Ⅱ所得蛋白质质量浓度(1.905g/L),且两者呈极显著差异(P<0.05),但裂解液Ⅰ所得蛋白质电泳条带出现1条杂带;而裂解液Ⅱ所得蛋白质能满足上样要求且电泳条带清晰无杂带。因此,TCA/丙酮沉淀并用裂解液Ⅱ进行裂解的方法适用于高粱叶片的SDS-PAGE分析。     

大豆中硒含量提取方法研究

为快速测定大豆中硒含量,采用原子荧光光谱法研究了消解温度、消解液组成及样品质量对硒含量提取的影响。结果表明:在消解温度60℃,HNO3-HClO4比例1∶4样品质量0.500 0g条件下进行消解,具有较好的测定效果,该方法的加标回收率为97.8%~101.0%。